【国家标准】 食品安全国家标准 食品中胭脂虫红的测定

中华人民共和国国家标准
GB 5009.288—2023
食品安全国家标准
食品中脂虫红的测定
2023-09-06发布
中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局　
2024-03-06实施bZxz.net
1范围
食品安全国家标准
食品中脂虫红的测定
本标准规定了食品中脂虫红的液相色谱测定方法。本标准适用于食品中胭脂虫红的测定。2原理
GB/T5009.288—2023
试样中的脑脂虫红，经盐酸溶液提取，固相萃取柱净化后，反相C18液相色谱柱分离，紫外-可见光检测器检测，外标法定量，
试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂
3.1.1甲醇(CH:OH)：色谱纯。
3.1.2乙腈（CH:CN）：色谱纯。3.1.3盐酸（HCI)。
3.1.4磷酸（H;PO4）。
试剂配制
3.2.1盐酸溶液（2.0mol/L）：量取168mL盐酸至盛有800mL水的1000mL容量瓶中，充分混匀后，冷却至室温，用水定容至刻度3.2.2磷酸甲醇溶液（2%）：量取20mL磷酸至盛有800mL甲醇的1000mL容量瓶中，充分混匀后，冷却至室温，用甲醇定容至刻度。3.2.3磷酸水溶液（0.1%）：吸取1.0mL磷酸至盛有800mL水的1000mL容量瓶中，充分混匀后，冷却至室温，用水定容至刻度。
3.2.4磷酸乙腈溶液（0.1%）：吸取1.0mL磷酸至盛有800mL乙的1000mL容量瓶中，充分混匀后，冷却至室温，用乙腈定容至刻度。3.3标准品
胭脂红酸标准品（C22H20O13，CAS号：1260-17-9）：纯度≥95.5%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
3.4标准溶液配制
3.4.1胭脂红酸标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取100.0mg（精确至0.1mg）标准品，用水溶解，并1
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定容至100mL容量瓶中，摇匀，于4℃下避光保存，有效期3个月。3.4.2胭脂红酸标准系列工作液：用移液管（精确至0.01mL）准确吸取标准储备液（1.00mg/mL）0.5mL于100mL容量瓶中；分别准确吸取标准储备液（1.00mg/mL）0.1mL、0.2mL、0.5mL和1.0mL于10.0mL容量瓶中，用磷酸水溶液（0.1%）定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L和100mg/L胭脂红酸标准系列工作液。临用现配。3.5材料
固相萃取柱（150mg/6mL，混合型强阴离子交换反相柱，填料为含亲水基团的聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物上键合季铵基团，或相当者）。4仪器和设备
高效液相色谱仪：带紫外-可见光检测器。4.2
天平：感量分别为0.1mg和1mg
恒温水浴锅。
涡旋混合器。
超声波发生器。
高速离心机。
固相萃取装置。
氮吹仪。
粉碎机。
5分析步骤
5.1试样制备
液态样品摇匀待提取；基质均匀的半固态样品和粉状样品直接待提取；其他样品需匀浆或粉碎均匀待提取。制备好的试样于0℃～5℃保存，尽快测定。5.2试样提取
5.2.1液体、半固体试样（含乳半固体除外）称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加人盐酸溶液（2.0mol/L)40mL，旋紧盖子，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000r/min离心5min，上清液转移至50.0mL容量瓶中，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化。5.2.2固体、含乳半固体试样（调制乳粉除外）称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加人盐酸溶液（2.0mol/L)40mL，旋紧盖子，摇匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000r/min离心5min，上清液转移至100mL容量瓶中，残渣加人盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，常温条件下，重复提取1次，合并2次提取液，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化。5.2.3调制乳粉
称取2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加人盐酸溶液（2.0mol/L)40mL，旋紧盖子，摇2
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匀，置于沸水浴中加热30min，取出冷却至室温后，振荡5min，超声5min，5000r/min离心5min，上清液转移至250mL容量瓶中，残渣加人盐酸溶液（2.0mol/L）40mL，常温条件下，重复提取2次，合并3次提取液，用水定容至刻度，经适量脱脂棉过滤，待净化5.3试样净化
固相萃取柱使用前依次用6mL甲醇、6mL水进行活化，保持柱体湿润，取过滤液25.0mL通过活化后的固相萃取柱（150mg/6mL），依次用12mL水和6mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，真空抽至柱体近干，用磷酸甲醇溶液（2%）6mL进行洗脱，收集洗脱液，于40℃水浴下氮吹浓缩至近干，加人2.00mL磷酸水溶液（0.1%）复溶，涡旋混匀，12000r/min离心5min，取上清液待进样。5.4
空白试验
除不加试样外，按5.2和5.3与试样同时处理。5.5仪器参考条件
色谱柱：Cl：（4.6mm×150mm，5.0um）或性能相当者；流动相：A为磷酸水溶液（0.1%），B为磷酸乙腈溶液（0.1%），洗脱梯度程序见表1；5.5.2
柱温：40℃；
流速：1.2mL/min;
检测波长：494nm
进样量：10μL。
表1梯度洗脱程序
6标准曲线的制作
流动相A
流动相B
将标准系列工作液分别注人液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积响应值为纵坐标，绘制标准曲线。胭脂红酸标准溶液的色谱图参见附录A中图A.1。试样溶液的测定
将试样溶液注人液相色谱仪中，根据保留时间定性，变化范围应在士2.5%之内，峰面积定量，根据标准曲线得到待测液中胭脂红酸的浓度。3
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分析结果的表述
试样中胭脂虫红（以脑脂红酸计）含量按公式（1)计算。X=
×V×2.00 ×1 000
m×25.0×1000×1000
式中：
试样中胭脂虫红（以胭脂红酸计）的含量，单位为克每千克（g/kg）；待测试样中胭脂虫红（以胭脂红酸计）的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；试样提取液的定容体积，单位为毫升（mL）；分取提取液净化后的定容体积，单位为毫升（mL）；换算系数；
试样的取样量，单位为克（g）；分取提取液的体积，单位为毫升（mL）；计算结果保留3位有效数字。
精密度
在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。8其他
.（1）
本方法的检出限为：当称样量为2g时，液体及半固体试样（含乳半固体除外）中脑脂虫红（以脑脂红酸计)检出限为0.006g/kg，固体及含乳半固体试样（调制乳粉除外）中胭脂虫红（以胭脂红酸计）检出限为0.01g/kg，调制乳粉中胭脂虫红（以脂红酸计）检出限为0.03g/kg。本方法的定量限为：当称样量为2g时，液体及半固体试样（含乳半固体除外）中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.02g/kg，固体及含乳半固体试样（调制乳粉除外）中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.04g/kg，调制乳粉中胭脂虫红（以胭脂红酸计）定量限为0.1g/kg。nv
0. 004手
附录A
标准物质液相色谱图
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胭脂红酸（10.0mg/L）在494nm下的液相色谱图图A.1
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