【GA公共安全标准】 法庭科学生物体液中哌替啶及其代谢物气相色谱和气相色谱质谱检验方法

[CS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T1321—2016
法庭科学生物体液中哌替啶及其代谢物气相色谱和气相色谱-质谱检验方法GC and GC-MS examination methods for penthidine andits metabolite in biological fluid in forensic science2016-07-08发布
中华人民共和国公安部
2016-07-08 实施
本标准按照 GB/T 1.12009给出的规则起草。GA/T1321—2016
请注意本义件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任，本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SACTC179/SC1）提出并归，
本标雅起草单位:公安部物证鉴定中心北京市公安局法医检验鉴定中心。本标准主要起草人：工芳琳、何毅、张蕾萍乔静。1
1范围
法庭科学生物体液中哌替啶及其代谢物气相色谱和气相色谱-质谱检验方法GA/T 1321--2016
本标准规定「法庭科学生物体滚（血液、尿液、胃液等)中哌替啶及其代谢物去甲哌替啶的气相色谱(GC)和气相色谱-质谱(GC-MS)的检验方法。本标准适用于法庭科学生物体液中哌替啶及其代谢物去甲哌替啶的定性最分析。2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的虑用是必不可少的，凡是注日期的非用文件，仅注口期的版本适用于本文件：凡是不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。G13/16682一2008分析实验室用水规格和试验方法GA/T122静物分析名调术语
3术语和定义
GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件，4原理
以空白样品租添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物体液进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱法、气相色谱-质谱法检测，以保留时问（t）、质谐特征离子碎片峰和相对丰度作为定性判断依据；与平行操作的添加标准物质响应值比较，根据峰面积之比，用外标法或内标法进行定量分析。哌替啶在体内主要代谢为去甲哌替啶，其体内代谢途径参见A.1。5试剂、仪器及材料
5.1试剂
本标准所用试剂均为分析纯，试验用水为三级水（见GB/T6682一2008规定）：a）三氯甲烧
b）异丙醇。
三氯甲烷/异丙醇(体积比为3：1)混合溶剂。d）甲醇。
乙醇。
艺乙酯。
g）吡啶。
h）乙酸酐。
GA/T1321—2016
β葡萄糖醛酸苷酶。
饱和嵌酸钠溶液
k）10%NaOH溶液：称取氮氧化钠10g，用水溶解并定容至100mL1）1%HCl溶液：移取浓盐酸1.0 mE,用水稀释并定容至100 ml.stn）标准溶液：
1）1.0mg/mL标准物质液：分别称取哌替啶、么甲哌替啶、SKFs25（内标）标准物质各100.0mg100ml.容量瓶中，加人一定量醇溶解并稀释至刻度，混匀。分别配制成1.0 mg/ml.的哌咨啶、去甲喉替啶、SKF=2^标准物质溶液。密封，置下冰箱中冷冻保存。保存时间6个月。
0.1f1g/ml.单-标准.1.作游液：分别移取哌替啶、去甲哌替啶，SKFs25A标准物质溶液各2）
10.0rnL于100tmL容量瓶中，圳人甲醇稀释至刻度，混勾，分别配制成0.1tng/mL的哌替啶、去甲哌替啶、SKF:2i标准工.作溶液。密封、置丁冰箱中冷藏保存，保存时间3个月，
3）1.0mg/ml.混合标准物质溶液：分别称派替啶、去中哌替啶标准物质各00.0mg于同一个100 mL容量瓶，加定量中醇溶解并稀释至刻度，泥匀，配制1.0 mg/mL的派替啶，去甲哌替啶溉合标谁物质溶液，密封，置丁冰箱中冷冻保存。保存时间6个月。1）0.]mg/ml.混合标准T作溶液：移派替、去甲哌替啶混合标推物质溶液10.0tnL于100ml容鼠瓶中，加人甲醇烯释至刻度，混封，配制成0.1g/mL的混合标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷保存。保存时间3个月。试验中所用其他浓度的标准1.作溶液均用1.0mg/ml.的标准物质溶液用甲醇稀释得到5.2仪器和材料
仪器和材料包括：
a）气相色谱仪：配氮磷检测器(NPD)：b)
配电子轰击源（EI)的气相色谱-质谱联用仪；固相萃取柱：C1固相萃取柱或其他等效桂；涡旋拔荡器；
浓缩器，
电于天平：分度值为0.1mg和0.01g)
6检验
移液器；
离心机；
真益离心臂；
尖底玻璃试管。bZxz.net
6.1定性分析
6.1.1样品处理
6.1.1.1直接提取法
移取而液等样品2.0ml.～5.0mL于具盖离心管中（如采用内标法，则加人内标SKFs25标准物质1μg）加人10%Na0H溶液或饱和碳酸钠溶液约0.5mL，调节pH值在10～11之i，加入乙酸乙酯2
GA/T 1321—2016
或三氯甲烷6mL，振荡10min，以8000r/min转速离心10min，提取有机相；重复提取·次，合并两次提取的有机相于尖底玻璃试管中，在浓缩器上60℃下浓缩至干,残渣加人乙醇50μL～100μL定容,供仪器分析。
6.1.1.2腐败样品的提取（酸碱反提法）移取血液等样品2,0 mL～5,0mL于具盖离心管中(如采用内标法,则加入内标 SKFs5^标准物质1μg），加人10NaOH溶液或饱和碳酸钠溶液约0.5mL，调节pH值衣10～11之间，加入乙酸乙酯或二氯甲烷6mL，振荡10min，以8000r/min转速离心10min，提取有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相于尖底玻璃试管中,在浓缩器F:60C下浓缩至干,残渣加入1%HCl溶液3mL~-5mL溶解，经滤纸过滤于离心管中,加人 10%NaOH溶液调节 pH值在 10～11之间,加人乙酸乙酯或三氯甲烷 6 mL,振荡10 min,以8 000 r/min转速离心10 min提取有机相;重复提取-次,合并两次提取的有机相于尖底玻璃试管中，在浓缩器上60C下浓缩全干，残渣加入乙醇50L～[00μL.定容，供仪器分析。
6.1.1.3游离哌替啶及代谢物的提取移瑕尿液样品2.0 mL～5.0 nL于具盖离心管巾，加人【0%NaOH溶液或饱和碳酸钠溶液，调节pH值在1011之闸l.加人乙酸乙醋或三氯印烷6ml..振荡[0min，以8000r/min转速离心10min，提取有机相；重复提取次·合并两次提取的有机相下尖底玻璃试管中，在浓缩器上60℃下浓缩于残渣加人乙醇50uL～100±l.笼容.供仪器分析，6.1.1.4总哌替啶及代谢物的提取移取尿液样品2.0mL～5.0mL于具盖离心管中，加人一定量的3-葡萄糖醛酸白海浴液水解（3-葡萄糖醛酸苷酶使用说明参呢A.2),冷却后接6.1.1.1操作。6.1.1.5去甲骤替啶的提取
移取尿液样品2.0mL～5.0ml下只盖离心管中，按6.1.1.1操作，浓缩至干后加入吡啶50μL，乙酸100uL，于40℃~50℃下加热30mit衔生化，冷却后用空气或氟气吹十，残渣加人乙酸乙酯50 μL定容，供仪器分析：
6.1.1.6固相萃取法
移取证液等样品2.0mL~5.0mL于具盖离心管中，加人8mL水稀释.加人10%NaOH溶液，调节pH值在10～11之间，以8000r/min转速离心20min.取上清液过Ci:固相萃取柱（事先用甲醇5mL，水5ml.活化，控制流速为1.0mlL/min）用水5InL淋洗，真空抽吸30min或离心除去柱中残留水分；用三氟甲烷/异丙醇混合溶剂1rmL～6ml.洗脱，收集洗脱液在浓缩器上浓缩至干，残渣加人乙醇100μL定容，供仪器分析。
6.1.1.7空白样品和添加样品制备移取等量相同基质的空白样品3份，-份作为空白样品，另两份添加标准物质使其含量为1.0ug/mL，作为添加样品，混勾；按6.1.1相应步骤平行操作。6.1,2仪器检测
6.1.2.1气相色谱仪条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同性状样品实际情况进行调整：3
GA/T 1321---2016
色谱柱:DB-1 毛细色谱柱（或其他 100%-聚二甲基硅氧烷等效柱). 30 m × 0.32 mm X×a
注；I>B 1柱是 Agilent 公司产品的痴品名称,给出这-信息是为了方便本标准的使川者，并不是長示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效巢，则可使用这些等效产品：b）色谱柱温程：160℃保持3min，以20/min速率升湿至280℃.保持5min；c
进样口温度:280℃;
检测器温度：300C；
载气，氮气，纯度大99.999%
避样方式：分流逃样；
分流比:5: 1~50: 1 #
柱流量:1.0 rmL/trin~2.0 mL/mirl.6.1.2.2
气相色谱-质谱仪条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同性状样品实际情况进行调整：a）色谱柱:DB-5MS 毛绷色谱柱（或其他 5%一苯基-95%一中基聚硅氧烷效柱),30 rm ×0.32mmX0.25 μm;
注：DB-5MS性是Agilent公可产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标雅的使用者，并不是长示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。色谱柱温程：100保持2nmin，以30/min速率升温至280℃，保持17min；b）
进样口温度:280 ℃；
传输线温度：230；
离子源温度：200℃；
载气：氧气，纯度大于99.999为；g
柱流量:1.0 mL/min~2.0 mL/min;进样方式：分流进样；
分流比：5：1~50：1；
质最扫描范围：40am~450amu;
扫描方式：全扫描（SCAN）
记录与计算
记录各样品及标准物质平行进样2～3次中目标物的tR及峰面积值，按式（1)计算同收率。_A#×Wm×V×100%
式中：
外标或内标的回收率；
添加样品中标准物质或内标物峰面积平均值；W-标物质或内标物浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；V
添加样品的定容体积.单位为毫升（mL）；A—标准物质或内标物纯品的蜂面积平均值；M
添加样品中标准物质或内标物添加量，单位为微克（pg）。6.2定量分析
6.2.1样品萃取
移取血液等体液样品2.0mL～5.0mL两份：另取等量相同基质的空白样品两份，分别添加标准物4
GA/T 1321--2016
质（添加量应与案件样品粗测量相近），混匀，按6.1.1进行操作。若采用内标法，则加入内标SKFs25^标准物质1.0以g·按6.1.1进行操作，6.2.2仪器检测
按6.1.2进行检测。
6.2.3 记录与计算
6.2.3.1计算药物含量
6.2.3.1.1外标法
记录各样品-行进样2～3次中目标物的峰而积侦，按式（2)让算含晨：A作XM XV
AnXM XV
式中：
单位质量案件样品中目标物质的含最，单位为微克每毫升（+g/nL）；案件样品中目标物峰面积均值；M添一-添加样品中标准物质添加量，单位为微克（ug）；V
案件样品的定容体积，单位为毫升（mL)；A
添加样品中日标物峰面积平均值；M案件样品的取样量，单位为毫升（mL）；Ve
6.2.3.1.2
添加样品的定容体积,单位为毫升（mI)。内标法
记录各样品平行进样2～3次的目标物及内标物t和峰面积值，按式（3)计算校正因子，按式（4)诈算含量：
M标XAA
M丙XA标
式中：
式中：
校正因于：
添样品中日标物添加量，单位为微克（ug）；内标物峰面积平均值；
添加样品中内标物添加量，单位为微克（ug）；日标物峰面积乎均值。
W=f×A ×M
A丙×M￥
单位质革案件样品中国标物含量，单位为微克每靠升（u/mL）;校正因子；
案件样品中甘标物峰面积平均值；内标物添加量，单位为微克（μg）；内标物峰面积平均值；
案件样品的取样量，单位为毫升（mL.）。（3)
GA/T 1321--2016
6,2.3,2计算相对相差
记录两份平行操作的案件样品含量·按式(5)计算相对相差：RD-=IX:=××100%
式中：
RD一一相对相差（%);
X，、X：\两份案件样品平行定量测定的含量数值；x
…两份案件样品平行定量测定含量的平均值。7结果评价
7.1定性结果评价
7.1.1阴性结果评价
气相色谱分析中，如果案件样品卡出现与标准物质t相同的色谱峰，添加样品的回收率大于或等于60%.则阴性结果可靠。相关色谱图参见图B.1。如果添加样品中未出现与标物质t相同的色谱降或回收率小于下60%则阴性结果不可靠。应接6.1重新取检验
添加样品的添加含量小于1.0&/mL时，可不计葬间收率，则阴性结果按以下方式评价：a）如果案件样品未出现与标准物质t相同的色谱峰，添胍样品的色谱峰信噪比大于10，则阴性结果可靠；
bh）如果添加样品中末出现与标准物质相同的色谱峰或添加样品的色谱峰的信噪比小丁或等于10,阴性结果不可靠。成按6.1重新提取检验。7.1,2阳性结果评价
气相色谱分析的阳性结果需用气相色谱-质谱法确证。气相色谱-质谱分析中，案件样品出现与标准物质t相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对卡度一致，空样品无于扰，则阳性结果可靠。气相色谱-质谱分析中，如果空自样品中山现与标准物质（R相同的色谱锋，且质谱特征离子碎片及相对丰度一致，则阳性结果不可，应接6,1重新提取检验，相关质谱图参见图B.2、图B.3，7.2定量结果评价
如果案件样品中日标物含量的RD小于或等于20%，定量数据可靠，其含量按两份案件样品的平均值计算。如果案件样品中国标物含量的RD人于20%，定量数据不可靠。应按6.2重新提取检验，5
.1赈替啶的体内代谢途径
附录A
(资料性附录)
赈替啶代谢资料
GA/T1321—2016
哌替啶（度冷」）为人1合放的嘛。醉镇痛药，分了式CiHz,NO分子量247。哌替啶通过水解代谢为去甲哌替啶和去甲哌替啶酸。口服哌替啶12后，录中哌替啶含量约占7%，而去甲替啶约占12%，随时间的延长，代谢物的比例加大，哌替啶体内代谢途径见图A.1。ci.
眼替斌
大甲娠替啶
A.2β-葡萄糖醛酸苷酶的使用说明图A.1
顾替啶体内代谢途径
眼锦啶酸
去呢苷噬酸
尿样中哌替啶代谢物的水解可以用不同酶型的葡萄糖醛酸苷酶。不同酶型的3葡萄糖醛酸汗酶的使用条件，如配制方法，使用量、水解温度及时间、缓冲辫液和pH值等不一定相间。因此应按照产品出厂说明书进行配制和使用。
GA/T 1321—2016
附录B
（资料性附录）
哌替啶及去甲赈替啶相关图谱
赈替啶及去甲哌替啶相关色谱图和质谱图见图B.1~图B.3。1.606
4. 004手
4 810:1-
单min
图B.1哌替啶GC/NPD气相色谱图（眼替啶t=6.086minSKFs25atk=9.392min）Int.
图B.2娠替啶的质谱图
去甲哌替啶的质谱图
GA/T 1321—2016
o-.cll2 -cl
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。