【GA公共安全标准】 法庭科学血液中地西泮等十种苯骈二氮杂草类药物气相色谱-质谱检验方法

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T 1322—2016
法庭科学血液中地西泮等十种苯骚二氮杂草类药物气相色谱-质谱检验方法GC-MS examination methods for ten henzodiazepines including diazepamin hlood in forensic science2016-07-11发布
中华人民共和国公安部
2016-07-11实施
标准按照GB/T1.12009给山的规则起常。GA/T1322—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责低。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会葬物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并，
本标准起草单位：上海市公安局物证鉴定中心、公安部物证鉴定中心。本标准主要起草人：梁晨、涨荣、汪蓉、工芳琳、于忠山１范围
法庭科学血液中地西泮等十种苯狱二氮杂草类药物气相色谱-质谱检验方法GA/T1322—2016
术标准规定了法庭科学血液巾架辨二氮杂:草类药物的气相色谱-质谱(GC-MS)检验方法本标准适用丁法庭科学血液甲地西泮，奥沙西泮、氯氮草、唑仑、阿普唑仑、硝西泮、艾司唑仑、氯硝西泮，劳拉西泮，咪达噗仑10种苯二氮杂节类药物的定性定量分析。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。丸是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682·2008分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名间术话
3术语和定义
GA/T 122 界定的术语和定义适用于本,文件：4原理
以空向样品和添加样品作对照，按平行操作的要求、对面液样品进行提取、净化及浓缩后，采用气相色谱-质谱法进行检测，以保留时间（t）、质谱特征离子碎片峰和相对丰度作为定性判断依据；与-行操作的添加标准物质响应值比较，根据峰面积之比，用内标法进行定量分析，5试剂及材料
本标准所用试剂均为分析纯，试验用水为三级水（见GB/T66822008规定）：a）甲醇。
b）米，
c）乙酸乙酯。
乙醚。
正已烷。
二鐵甲烷。
g）氨水。
h）1.0mol/LNaOH溶液：称取氢氧化钠20.0g，加人一定量水解并稀释定容至500mL。2%氨水5为甲醇溶液：移取氨水2.0mL和甲醇5.0mL于100mL容量瓶+，加人水稀释至刻i
，混匀。
5%甲醇溶液：移取甲醇5.0m.于100t1L容量瓶中，加人水稀释至刻叟，混勾。i
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k）标滩溶液：
1）1.0mg/ml.标准物质溶液：分别称取地西泮、奥沙西泮、氯氮节、唑仑、阿普唑仑、硝西浮、艾司唑仑、氯硝西泮、劳拉西泮、咪达唑仑、多沙普仑（内标）、SKF^（内标）标准物质10.0tng置于10mL容量瓶中，加一定量甲醇溶解并稀释至刻度，混勺。分别配制成1.0mg/mL的地西泮、奥沙西泮、氮氮草、三唑仑、阿普唑仑、硝西浮、艾司唑仑、氯硝四泮、劳拉西洋，咪达唑仑、多沙曾仑（内标）、SKF.25（内标）标准物质溶液，密封，置于冰箱中冷冻保荐，保存时间12个片
2）0.lmg/mL标准工作溶液：分别移取1.0mg/ml.的地凹泮，奥沙西浮、氯氮单，三唑仑、阿曹唑仑、硝西拌、义司唑仑、氯硝西泮、劳拉西泮、咪达仑、多沙酋仑（内标）,SKFs5^（内标)标准物质溶液1.0ml.于10ml.容量瓶中，加人甲醇稀释至刻度，混勾，分别配制戒C.1mg/mL的地西泮、奥沙西洋、氮氮草、三唑仑、阿普唑仑、硝西泮、艾司唑仑、氯硝西泮，劳拉西泮，咪达仑、多沙普仑（内标）SKF525（内标)标准F作辫液，密封、置于冰箱中冷藏保存：保存时间6个月，试验中所用其他浓度的标准T作落液均由1.0mg/ml.的标准物质溶液用甲醇稀释得到。3）1.0mg/ml.氛代化合物标准物质落液：分别称取尔代地西洋及其他氛代化合物标准物质10.0 mg置于10 mL容量瓶,加：定甲醇溶解并稀释至刻疫，混匀，分剂配制成1.0 mg/mL的代地西半及其他氛代化合物标准物质溶液。密封，置下冰箱中冷藏保存。保存时叫6个月。试验中所用其他浓度的代化合物标雅.作溶液均出1.0mg/mL的氛代化合物标灌物质液用甲醇稀释得到。1）固相举取柱：OasisHLB杜或等效固相举取柱，注：（asisHILB柱足Waters公司产品的商品名称，给这一信息足为了方便不标准的使用者，并不品表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，卿可使川这些等效产品。6仪器和设备
仪器和设备包括：
相色谱-质谱联用仪：配电子囊击源（EI）；）
b）电子天：分度值为0.01mg；
离心机；
涡旋振荡器；
浓缩器；
移液器；
具盖离心管及滴管等实验器材；g）
h）pH试纸：范围1~14。
7、操作方法
定性分析
7.1.1样品处理
7. 1.1. 1
液液萃取
移取血液样品1.0mL～2.0mL，加入代地西浮（内标）标准物质500ng，混勾；另取等量的7.1.1,1,1
空自血液样品两份，一份作为空户样品，习一份加人筑代地西评（内标）标准物质500ng，也可选用多沙2
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普仑或SKFs25A作为内标，并加入0.1mg/ml的标准【作溶液10μL，混勾，作为添加样品，待检。7.1.1.1,2取 7.1.1.1.1待检样品，分别加人 1.0 mol/1. NaOH溶液 0.5 mL,调节至 pH大于 10,加苯/乙酸乙酯（体积比为1：1）混合游剂（或乙醚、正已烷/二氯甲烷（体积比为5：3）混合溶剂）5mL，振荡 3min，以8000 r/min转速离心5 min.提取有机相;重复提取一次，合并两次提取的有机相,在浓缩器上 60℃ 下浓缩至干,残渣加人中孽100 μL定容,转移至进样瓶内,供仪器分析。7.1.1.2固相萃取
取7.1.1.1.1待检样品，分别加入水1.0mL～2.0mI.稀释后过H1B柱(HLB柱依次用甲醇1mI及水1mL预淋洗活化和平衡），控制流量为0.5ml./min~1.5mL/min，待检液流完，依次用2头氨水5%甲醇溶液1mL、正己烷1nL.5%甲醇溶液1ml.淋洗，将HLB柱3000r/min离心3min或用氮气吹干水分后，用二氯甲烷1mL洗脱，收集洗脱液在浓缩器上60℃下浓缩至十,残渣加人甲醇100μl定容，转移至进样瓶内·供仪器分析，7.1.2仪器检测
以下为参条件，可握抛不同品牌仪器和不同样品等实际情说进行谢整a）色谱扯：DB-5MS毛细色谱柱（或其他5%一苯基-95%二甲基聚硅氧烷等效柱），30mK0.25tnmX0.25m
注：DB-5MS毛细也谱件足Agient公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用着.非不是表对该产品的认可。如果其他等效产品具有相间的效果，则可使用这些等效产品，色谱柱温程：100C保持1min，以20℃/min速率升温至280℃，保持20min；b)
进样几温度：260℃：
传输线温度：280℃；
离子源温度：230℃；
载气：氨气，纯度大于99.999%！g）
柱流景;1 mI/min~-2 mL/nin;
溶剂延迟：3min;
进样方式：分流进样，分流比：5：1～50：1质量扫描范围：40amu~500amu
k）扫描方式：全扫描（SCAN)或选择离了监测(SIM）。7.1.3记录和计算
记录各样品平行进样2～3次的目标物及内标物和峰面积值.按式（1)计算回收率：R =AnXWaXV± × 100 %
式中：
—内标的同收率；
添加样品中内标物峰面积均值；A
内标物浓度，单位为微克每毫升（g/ml.)；V
一添加样品的定容体积.单位为毫升（mL）：At
内标物纯品的峰面积平均值：
添加样品中内标物添加量，单位为微克（ug）。7.2定量分析
7.2.1样品处理
移取血液样品1.0mL～2.0ml.两份；另取等量的空白血液样品两份，分别加人苯阱二氮杂：草类药3
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物标准物质（添量应与样品粗测量相近），并加人相应的氛代化合物（内标)500标难物质，混勾。按7.1.1进行操作。
内标应音选被定量化合物相的荒代化合物，如果不能得到该充化化合物，可选用多沙著伦或SKFA做内标。
7.2.2仪器检测
按7.1.2迹行检测。宠离子参见附录A中.4。7.2.3记录与计算
7,2.3.1计算药物含量
记录各样品日标物及内标物峰面积平均值，按式(2)和式(3)计算校正因子和含显：M标×A丙
式中：
校正因子；
添加样品中目标物添加量，单位为微克（ug）；内标物峰百积平均值：
添加样品中内标物添加量，单位为微克（μg）；白标物峰面积平均值
fXAnXM
A内×M样
单位质量案件样品中目标物含量，单位为微克每毫升（ug/mL）；校正因子；
案件样品中目标物峰面积平均值：内标物添加量，单位为微克（ug)；内标物平均峰雨积；
案件样品的取样量,单位为亳升（mL），7.2.3,2计算相对相差
记录2份平行操作的案件样品含量，按式(1)计算相对相差：Ix,-xal
相对相差（%)；
X：、X。一网个案件样品平行定量测定的含量数值；x
8结果评价
两个案件样品平行定量测定含量的平均值。8.1
定性结巢评价
阴性结果评价
如果案件样品未出现与标准物质t相同的色谱峰，添加内标的回收率大于或等于60%，删阴性结4
果可靠：
如添加内标的间收率小于60%，则阴性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。GA/T 1322—2016
本标准的检测限：奥沙西泮、劳拉西浮，硝西泮和氯硝西泮为200ng/ml；艾司唑仑、阿普唑仑和三挫仑为50ng/mL：地西泮、氯氮单咪达唑仑为20ng/mL8.1.2阳性结果评价
如果案件样品出现与标准物质相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对半·致，空白样品无干扰，则阳性结果可靠，
如果空自样品中山现与标准物质tR相同的色谱峰，且质谱特征离了碎片及相对丰度一致，则阳性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。相关图谱参见图A.1～图A.14。8.2定量结果评价
如果案作样品中月标物含量的RD小于或等于20%，定量数据可靠，其含显按2份案件样品的平均值让算，如果案件样品中月标物含量的RI)大于20%，定最数据不可靠。成按7.2重新提取检验，5
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A.1方法回收率
附录A
（资料性附录）
相关实验数据和图谱
本方法中药物色括内标在添加量为！g/mL的恤样中叫收率均大于60%。A,2关于氯氮草的说明
氯氮草在气相色谱中常转化为去氧氯氮：草（desxyehlordiazepuxide）。A,3总离子流图
卜种苯辨二氮杂草类药物及内标的总离了流图见图.1。10.6.32
8000 C00
6 000 000
4000 000
3 000 000
IIc. Izds.d.dala ins
图A.1于种苯二氮杂草类药物及内标的总离于流图A,4保留时间及质谱特征离子
十种苯聯二.氮杂草类药物及内标的保留时闻、质谱特征离子见表A.1。6
Time--
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表A.1十种苯珊二氮杂草类药物及内标的保留时间、质谱特征离子表药物名称
奥沙西洋
劳拉西萍
地西洋
去氧氮氮草
咪达璇仑
硝西洋
氮氮草
氯硝西洋
多沙普仑
可哗仑
阿普峨仑
三唑仑
注：*丧示定母离了。
A.5质谱图
参考保阐时问
-F种苯辨二氮杂草类药物及内标相关质谱图见图A.2～图A.14。100
[uainlahi Diazepam
193205
图A.2地西泮质谱图
质谱特征离子
85 *99.165
205*.239,268
239*.274,302
256 * ,283,221
282 *+229,165
310+325
253 *, 280,206.231
282*299.241
28 314,234
109 *,378,347
259 * +291,205.239
279 *308,204
313 * 312.238.279
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(inainilih) oxazcpam
Imainlib) Chlordiazerkixide
图4.3奥沙西洋质谱图
uu-410
氟氮草质医
(Truuinlib) 3E F-I,4-Tenzodiazepin-2-amine, 7-chloro-N-mcthyl-5-phenyl图A.5
177190
44 221wwW.bzxz.Net
去氧氯氮草质谱图
241253
(rnin)
395161
Irmain!ib! Treazulor
(mainlib) Alprarolam
153177
115126
三唑仑质谱图
阿普唑仑质谱图
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2030405060709090[0010120130140150160170180190200210220230240250260270280290[mainlib) Nitraz:pam
图A.8硝西泮质谱图
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30 40 50 60 70 80 90 00113 120 130 140 150 L60 L70180 [9G 200 210 220 230 240 250 26U 270 280290300 310Imainlioj k.s13zol:ur
( muinlib) Clonaze pam
I mainilih Ltrazcpam
艾司唑仑质谱图
氯硝西洋质谱图
蓝山22
劳拉西洋质谱图
rtanin)
i(min)
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