【YY医药标准】 医疗器械生殖和发育毒性试验 第2部分:胚胎发育毒性试验

ICS11.040.01
中华人民共和国医药行业标准
YY/T1292.2—2015
医疗器械生殖和发育毒性试验
第2部分：胚胎发育毒性试验
Test for reproductive and developmental toxicity of medical devices-Part 2: Prenatal developmental toxicity test2015-03-02发布
国家食品药品监督管理总局
2016-01-01实施
YY/T1292.2—2015
YY/T1292《医疗器械生殖和发育毒性试验》拟分部分出版，目前计划发布如下部分：第1部分：筛选试验；
—第2部分：胚胎发育毒性试验；本部分为YY/T1292的第2部分
本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会（SAC/TC248)归口。本部分起草单位：国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心、四川医疗器械生物材料和制品检验中心、中国医学科学院北京协和医学院新药安全评价研究中心。本部分起草人：赵增琳、刘成虎、邹文、梁洁、包捷。YY/T1292.2—2015
GB/T16886.3中给出的检测潜在生殖和发育毒性物质的试验方法均为经济合作与发展组织(OECD)《化学品测试指南》中规定的方法，但这些方法是针对化学品的特性制定而成，同时未给出详细的试验步骤，因此不适宜直接用于医疗器械或材料的检测。本部分参照OECD414试验方法的基本原则，并根据医疗器械或材料的特性对试验方法进行了适当的修改，规定了详细的试验步骤，可作为GB/T16886.3中生殖和发育毒性试验中的一项方法标准医疗器械或材料的生殖和发育毒性潜能对人类健康有十分重要的影响。特别是针对可吸收性医疗器械或含可沥滤物的医疗器械。GB/T16886.3中推荐下列医疗器械或材料，在缺乏排除生殖和发育毒性风险证据的情况下，应考虑进行生殖和发育毒性试验a）具有可能与生殖组织或胚胎（胎儿）直接长期或永久接触的器械（包括可吸收或可沥滤物质，如硅凝胶乳房植人物）；
b）储能医疗器械。
本部分提供受孕期间接触医疗器械对受孕母体和胚胎发育影响的一般性信息，其主要是对母体效应、死亡、结构畸形或胎儿发育改变的评价。本部分不包括功能缺陷的内容。由于受到试验样品制备以及试验方法确认等方面局限性的影响，在确定进行胚胎发育毒性试验之前，应充分考虑GB/T16886.1和GB/T16886.18的要求。应在评价医疗器械使用中引发胚胎发育毒性风险的基础上，对进行试验的决定予以论证。对可吸收性或含可沥滤物质的医疗器械，如果在吸收，代谢和分布研究方面有充分可靠的数据，或者医疗器械或材料浸提液中鉴别出的所有成分均无胚胎发育毒性时，就无需再进行试验。对医疗器械进行可接受的生物学风险评估后，如胚胎发育毒性的风险已被排除，则无需再进行试验。Ⅱ
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1范围
医疗器械生殖和发育毒性试验
第2部分：胚胎发育毒性试验
YY/T1292的本部分规定了医疗器械或材料胚胎发育毒性试验的方法。本部分适用于医疗器械或材料生殖和发育毒性试验2规范性引用文件
YY/T1292.2—2015
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T16886.1
医疗器械生物学评价第1部分：风险管理过程中的评价与试验GB/T16886.2医疗器械生物学评价第2部分：动物福利要求GB/T16886.3医疗器械生物学评价第3部分：遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验GB/T16886.12医疗器械生物学评价第12部分：样品制备与参照样品3术语和定义
GB/T16886.1，GB/T16886.3和GB/T16886.12界定的以及下列术语和定义适用于本文件3.1
发育毒理学developmental toxicology子代在出生前、围产期或出生后到性成熟阶段接触医疗器械所引起的机体发育毒性。主要包括：机体死亡、结构异常、生长改变和功能缺陷。发育毒理学通常指的是畸胎学。3.2
生长改变
alteredgrowth
子代器官、体重或大小的改变
异常（畸形）alterations（anomalies）发育过程中的结构异常，包括畸形和变异。3.3.1
畸形（主要异常）malformation（majorabnormality）被认为对试验动物有害的结构改变（可具有致死性），通常比较少见，3.3.2
变异（小异常）variation（minorabnormality）被认为对试验动物危害较小或无害的结构改变；可一过性出现并且对照组中出现频率相对较高。3.4
conceptus
从受精后到分娩前各发育阶段全过程衍化的受精卵数，包括胎膜及胚胎或胎儿。1
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植入（着床）implantation（nidation）囊胚与子宫内膜粘附，包括穿过子宫上皮并嵌人子宫内膜。3.6
embryo
任何机体的早期或发育阶段，尤其指受精卵长轴出现后直到所有主要结构形成之间的发育产物。3.7
embryotoxicity
胚胎毒性
对胚胎的正常结构、发育、生长和/或活力有害的毒性。3.8
胎儿foetus
在胚后期发育中未出生的子代。3.9
胎儿毒性
foetotoxicity
对胎儿的正常结构、发育、生长和/或活力有害的毒性。3.10
流产abortion
将未成熟的妊娠产物（胚胎或无活力的胎儿）从子宫中清除。3.11
再吸收resorption
已经植入子宫的孕体，随后死亡并正在吸收或已经吸收。3.11.1
earlyresorption
早期再吸收
没有可识别的胚胎或胎儿的植人证据。3.11.2
晚期再吸收
late resorption
具有外形退化改变的死亡胚胎或胎儿。3.12
未观察到有害作用的剂量水平no-observed-adverse-effectlevel;NOAEL没有观察到任何毒性效应的最高剂量水平。4主要设备
生物显微镜、体视显微镜、游标卡尺（百分尺）、病理检查器具等。5试验原理
通常情况下，将已经妊娠的动物给予供试物，给予时间从着床到预定处死的前一天。处死时间宜尽可能与正常分娩的时间接近，以避免由于早产导致试验数据的丢失。本部分不仅对生物体器官形成期进行观察（如啮齿动物一般5d～15d.家兔6d～18d），而且也能检查着床前，适宜时，整个妊娠期直到剖宫产前一天的影响。在处死妊娠动物后立即进行剖宫产，并检查子宫内容物，评价胎仔的软组织和骨骼的改变情况。
注：如采用植人方式，宜根据植人物的特性确定植人的频次和时间，以确保实验动物在整个实验周期中接触供试物，2
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6实验动物
6.1总则
YY/T1292.2—2015
所有的动物实验应在经国家认可机构批准并符合实验室动物福利全部适用法规的实验室内进行，并且还应符合GB/T16886.2的要求。6.2动物的种属和要求
常用的实验动物为大鼠或家免。正式试验前要将动物至少饲养5d以适应实验室环境。实验动物宜标明种属、品系、来源、性别、体重和/或周龄。试验开始时，动物的体重差异宜控制在最小范围，每只动物的体重不能超过同性别平均体重的土20%。宜将雌性动物与来自同一种属和品系的雄性动物进行交配，并宜避免近亲交配。
7样品制备
7.1根据GB/T16886.12的原则，制备试验样品。只要可能，医疗器械都应在“备用”状态下进行试验7.2对于储能医疗器械.应以动物全身接触为宜，使用剂量应为与人体生殖器官接触所预期剂量的倍数。
8试验步骤
动物的数量
试验组和对照组宜有足够数量的雌性动物，以保证在尸检时约有20只妊娠动物。每组不少于16只妊娠动物。妊娠动物的死亡率不得高手10%。8.2剂量水平的选择
8.2.1宜参考现有的毒理数据以及关于受试物或相关物质的毒代动力学方面的所有信息来选择相应的剂量范围以免造成过度的母体毒性反应。这些信息也可有助于确定剂量的频次8.2.2以最大耐受剂量或动物模型的生理限量作为动物接触的最大剂量，该剂量应为估计的人体最大接触剂量的倍数（以剂量的质量或表面积每千克受试者表示）。注：与典型的化学物生殖和发育毒性试验不同，多数材料可能得不出明显的剂量-效应关系，对于这些材料，可以考虑采用接触的最大剂量试验来判定是否存在毒性危害，但宜对试验所采用的剂量范围提供相应的支持性数据。8.2.3若认为试验样品可能对试验动物产生胚胎发育毒性时，宜至少设置3个剂量水平。除非受到供试物理化和生物特性的限制，否则所选择的最高剂量宜引起一些发育和（或)母体毒性（如临床症状或体重下降），但不引起死亡或严重损伤。宜至少有一个中间剂量组引起轻微的可观察到的毒性效应。最低剂量则不引起任何母体毒性或发育毒性。剂量水平的递减顺序宜能反映剂量-效应关系和未观察到有害作用的剂量水平（NOAEL）或接近检出限的剂量，而这一剂量可作为测试的基准值。递减剂量水平通常选择2倍～4倍间距为最佳，如果设置第4个剂量组，则可使用很大的组距（如，超过10倍）。虽然自的是确定母体的NOAEL，但是对没有确定此剂量水平的研究也是可以接受的，8.3动物处理
8.3.1宜根据器械的特点和预期临床使用部位采用原位接触法。对于难以模拟临床使用接触的器械，3
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宜对所选择的接触方式进行论证，8.3.2宜根据最近的个体体重对试验动物给予受试物。但在妊娠晚期宜对剂量进行适当的调整。如果实验动物出现了严重的、过度的毒性反应，宜将其以人道方式处死。如果有一些妊娠动物出现了严重的毒性反应，宜考虑终止该组试验。如采用灌胃法给液，宜使用胃管或合适的插管一次性给予。宜根据实验动物的大小来确定能一次给液的最大体积，每次给液量不宜超过1mL/100g体重，水性溶液最大体积可使用2mL/100g体重。当使用玉米油作为介质时，最大体积不宜超过0.4mL/100g体重。宜通过调整溶液浓度来减少受试物体积的差异，以确保所有剂量组的体积是相同的8.3.3通常情况下，宜从受精卵着床当天（例如交配后第5天）至剖宫产前一天对妊娠动物每天给予供试物。如果可获得的前期研究结果没有显示存在高潜在性的着床前吸收，则从交配当天至处死前一天给予供试物。宜注意妊娠期不适当的处理或应激可能会导致流产。为消除非处理因素导致的流产，宜避免对妊娠动物进行不恰当的处理以及来自外部因素如噪音等的应激作用，8.3.4宜使用平行对照组。平行对照组宜为假处理对照组或浸提介质对照组（如适用），除了不给予受试物以外，动物的处理方式与试验组完全相同。9结果观察
9.1临床体征
宜至少每天一次观察和记录动物的临床症状。宜在每天的相同时间观察，同时考虑在给予供试物后预期反应的高峰期进行观察。宜记录动物的情况包括死亡、濒死、相关的行为改变和所有明显的毒性效应。
9.2体重测量
实验动物宜当天称重，试验期间至少每隔3d一次以及处死当天对动物进行称重。9.3食物消耗量
宜每隔3d测量一次每笼孕鼠的食物消耗量并和体重测量同时进行。9.4户检
9.4.1宜在预期分娩的前一天处死妊娠动物。在处死前出现流产或早产征兆的动物宜被处死并进行肉眼观察。
9.4.2宜对试验结束时或在试验过程中死亡的孕体进行肉眼观察其所有结构异常或病理改变。宜优先在不知道试验组信息的前提下对剖宫产动物及其胎仔进行分析评价，以控制偏倚。9.5子宫内容物的检查
9.5.1宜在试验结束时或在动物死亡后立即取出子宫并确定怀孕状况。看起来未妊娠的子宫宜进一步检查（如啮齿类动物用硫化铵，家兔用Salewski染色或用其他可选择的适宜方法）以确定未受孕状态。
9.5.2宜称重包括子宫颈在内的妊娠子宫。在试验过程中死亡的动物则不宜进行妊娠子宫称重。9.5.3宜确定妊娠动物的黄体数。9.5.4宜检查子宫内容物中的胚胎数，死胎数和活胎数。宜对再吸收程度进行描述以便估计孕体死亡的相对时间。
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9.6胎仔的检查
9.6.1宜确定每只胎仔的性别和体重。9.6.2宜检查每只胎仔的外观变化，YY/T1292.2—2015
9.6.3宜检查胎仔的骨骼和软组织变化（如变异和畸形或异常）。优先（但并不是必需）对胎仔异常进行分类。如果进行了分类，宜对每一类别的分类标准进行详细的说明。宜着重检查生殖道以发现任何异常发育。
9.6.4对于啮齿类动物，宜对每窝大约一半的动物进行骨骼异常检查。同时可采用合适的连续切片法或仔细的大体解部法对剩余的动物进行软组织异常的检查。9.6.5对于非啮齿类动物，如家免，宜对所有的胎仔进行软组织和骨骼异常的检查。宜对这些胎仔的软组织异常进行仔细的解部检查，包括对内部心脏结构的进一步检查，以评价这些胎仔的身体。宜仔细解部一半胎仔的头部，采用标准的连续切片法或其他同样灵敏的方法检查软组织是否出现异常（包括眼晴、脑、鼻道和舌）。剩余的部分及其他胎仔宜采用与啮齿类动物同样的方法进行骨骼异常的检查。9.6.6附录A～附录C给出了胎鼠检查方法。10
数据分析
10.1数据应以表格的形式给出每只动物的数据并进行汇总，表中应显示试验开始前每组和每代动物数、试验过程中死亡或人道方式处死的动物数、死亡或人道方式处死时间、妊娠动物数、出现中毒症状的动物数以及所观察到的毒性症状的描述，包括毒性开始的时间、持续时间、所有毒性反应的严重程度、胎仔的类型以及所有窝相关的数据。10.2宜采用适宜的统计方法以窝为单位对数据结果进行评价。宜使用普遍接受的统计方法；统计方法的选择宜为试验设计的一部分，推荐的统计学方法有方差分析（ANOVA）和卡方检验（X）等。宜报告那些没有存活到规定处死日期的动物数据，这些数据可包括在相关联的组均值中。宜根据个体情况来判断来源于该动物的数据的相关性，以此为依据判断这些数据是包括于组均值中还是从组均值中剔除。
11结果评价
11.1宜根据观察到的效应评价胚胎发育毒性研究结果。评价宜至少包括以下信息：母鼠和胎仔的试验结果，包括：评价动物接触试验物质与发病率及其程度的相关性或不相a)
关性；
胎仔外观、软组织、骨骼异常等的分类标准；b）
适宜时，可参照历史对照数据来加强对试验结果的解释；c)
计算所有百分率或指标时所用的动物数：e
研究结果充分的统计学分析，适宜时，宜包括分析方法的详细信息，以便独立的评审人员/统计学家能对分析进行再评价或重新分析。11.2如试验证明受试物无毒性作用，宜考虑进一步研究确定受试物的吸收和生物利用度12
试验报告
试验报告宜至少包含以下信息：a）试验物质：
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物理性质及理化特性，如相关：识别信息，包括已知/已确定的CAS号；纯度。
b）介质（如适用）：宜对介质的选择进行论证。c）试验动物：
使用的种属和品系；
动物的数量和年龄；
来源、饲养条件和饲料等；
试验开始时每只动物的体重。
d）试验条件：
剂量水平选择的说明；
试验物制备方法的详细说明、浓度、稳定性和均勾度；给液的详细信息：
将饲料/饮用水中的受试物的浓度（ppm）转化为实际剂量[mg/(kg·d)，如适用：环境条件；
食物和水质量的详细信息。
试验结果：
母体毒性反应数据（按剂量），包括但不仅限于：试验开始时的动物数，存活的动物数，妊娠动物数和流产动物数，以及早产动物数；试验过程中动物死亡日期或动物是否存活到试验结束；宜报告未存活到预定处死期的动物数据，但不参与组间对比；观察到任何一只有异常临床症状动物的日期及其随后的病程；体重、体重变化和妊娠子宫重量，包括通过体重来矫正妊娠子宫的重量；食物消耗量和水消耗量（如果测量）；户检结果，包括子宫重量；
宜报告母体及其发育作用的NOAEL值。f）不同剂量组着床胎仔的发育情况，包括：黄体数；
着床数、存活数和存活率死胎数和再吸收数；着床前、着床后流失的数量和百分比。g）不同剂量组活胎胎仔的发育，包括：活胎数和活胎率；
性别比率；
胎仔体重，优先按性别和性别组合；胎仔外观、软组织、骨骼畸形及其他相关异常变化分类标准，如适用；
外观、软组织、骨骼异常的活胎和死胎总数及其百分比，以及各种畸形和相关异常变化的种类和发生率。
h）结果的讨论。
结论。Www.bzxZ.net
结果的解释
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胚胎发育毒性研究为了解多次接触某一试验物质对受孕动物的作用提供了信息。研究结果的解释宜与亚慢性、生殖毒性、毒代动力学及其他研究相结合。由于本试验重点观察了一般毒性和发育毒性终点，因此，试验结果可区分未出现一般毒性时的发育毒性和那些只在对母体动物有毒性的剂量水平才出现的发育毒性。
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A.1试验用水为蒸馏水
附录A
（资料性附录）
试剂配制
茜素红溶液：茜素红0.1g，氢氧化钾10g，蒸馏水1000mL，室温避光储存，透明液A：甘油200mL，氢氧化钾10g，蒸馏水790mL。透明液B：甘油与蒸馏水等量混合固定液（Bouins液）：苦味酸饱和液75mL，甲醛20mL，冰酷酸5mL，室温储存。A.5
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