【GB国家标准】 酶制剂生理活性评价技术规范

GB/T 39030—2020 酶制剂生理活性评价技术规范 Technical specification of physiological activity evaluation for enzyme preparations 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：江南大学、中国标准化研究院、北京萨姆伯科技有限公司。 本标准主要起草人：吴晓玲、传来、匡华、马爱进、王忠兴、刘丽强、徐丽广、马伟、郝帅。 1 范围 本标准规定了酶制剂生理活性评价基本要求、试验方法、消化促进率计算及结果表述。本标准适用于饲料和食品添加用脂肪酶制剂、蛋白酶制剂和碳水化合物水解酶制剂的生理活性评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定 凯氏定氮法 GB/T 6433 饲料中粗脂肪的测定 GB/T 15672 食用菌中总糖含量的测定 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 酶制剂 (Enzyme preparations) 从生物中提取、提纯加工后的具有生物催化能力的生物制品。注：本标准中的酶制剂特指添加到饲料或食品中提高饲料或食品消化率的生物制品，包括脂肪酶、蛋白酶或碳水化合物水解酶等酶制剂。 3.2 体外消化模型 (In vitro digestion model) 在生物体外采用动物或人体内相近的消化环境和消化酶系，模拟动物或人体内消化生理过程，体外评价酶制剂对底物消化生理活性影响的体系。 3.3 酶制剂生理活性 (Physiological activity of enzyme preparations) 酶制剂在动物或人体内消化生理环境中，受温度、pH、消化酶等因素影响表现出的对底物的消化能力。 3.4 胃模拟消化液 (Simulated gastric fluid) 模拟动物或人体胃液中的pH、温度、离子强度及胃蛋白酶浓度设置的消化液。 3.5 肠模拟消化液 (Simulated intestinal fluid) 模拟动物或人体肠液中的pH、温度、离子强度及胰酶浓度设置的消化液。 4 基本要求 4.1 按照相关法律法规和标准要求对样品进行接收、保管、交接、配制、回收、退还/销毁处理，并制定相应的管理制度和程序。 4.2 评价使用的仪器与设备种类、数量、性能、量程、精度应能满足评价的需要。 4.3 评价实验结束后，实验材料应进行无害化处理。 5 试验方法 5.1 试验设计 试验设计应符合表1要求。 表1 试验设计 项目 | 处理设计 | 重复次数 酶制剂选择 | 酶制剂产品 | 根据评价目标和评价需要选择一种或多种 处理设计 | 试样实验组、空白对照组 | 不少于3次 5.2 样品溶液制备 5.2.1 固体酶制剂 待测生物产品若为块状固体产品应进行粉碎或充分研磨处理，过0.25mm孔径筛。所检测固体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确称取（若所测酶制剂无使用说明，则准确称取50mg固体酶制剂），用水溶解，定容至100mL，配制成0.5mg/mL的工作溶液备用。 5.2.2 液体酶制剂 所检测液体酶制剂如果有使用说明，按其使用说明计算100g饲料或食品中所需酶制剂的量，并准确量取（若所测酶制剂无使用说明，则准确吸取50μL液体酶制剂），用水稀释成浓度为0.5μL/mL的工作溶液备用。 5.3 体外消化试验 5.3.1 试样实验组 准确称取3.0g食品模拟物（淀粉+鸡蛋白+豆油，质量比3:1:1）或饲料模拟物（玉米+麸皮+豆，质量比1:1:1），放入50mL具塞三角瓶中，加入1mL待测酶制剂样品溶液和8mL胃电解质溶液（参见附录A的A.2或A.3），用1mol/L盐酸溶液将pH值调至2.0并混合均匀，静置10min，加入1mL体外模拟胃液（参见A.4），混合均匀，在37℃生化培养箱内振荡消化(120次/min) 4h。之后，在胃模拟消化物中再加入9mL肠电解质溶液（参见附录B的B.2或B.3），用1mol/L氢氧化钠溶液调整pH值至7.0。加入1mL体外模拟肠液（参见B.4），混合均匀，在37℃生化培养箱内振荡消化(120次/min) 16h。 5.3.2 空白对照组 不加酶制剂试样，而其他处理与