【GB国家标准】 牛海绵状脑病诊断技术

中华人民共和国国家标准 GB/T 19180—2020 代替 GB/T 19180—2003 牛海绵状脑病诊断技术 Diagnostic techniques for bovine spongiform encephalopathy 2020-12-14 发布 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T 19180—2003《牛海绵状脑病诊断技术》。本标准与GB/T 19180—2003相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：一一增补了H·E组织病理染色法、免疫组织化学方法和免疫印迹方法的适用范围，删除了“也可用于其他动物的传染性海绵状脑病的诊断”（见第1章）；优化了临床症状的描述（见4.3）；优化了H·E组织病理染色法操作步骤（见5.1）和免疫组织化学方法操作步骤（见5.2）；一增补了免疫印迹方法（见5.3）。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。本标准起草单位：中国动物卫生与流行病学中心。本标准主要起草人：王志亮、刘雨田、孙成友、迟田英、宋芳芳、邹艳丽、于小静、吴晓东、王树双。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T 19180—2003。 引言 牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy, BSE）是由病毒引起的牛的一种慢性致死性神经性疾病，对动物和人构成较大危害。世界动物卫生组织（OIE）将其列为严重影响国际贸易的动物疫病之一，我国将其归为一类动物疫病。 我国现行《牛海绵状脑病诊断技术》（GB/T 19180—2003）系2003年6月4日由原国家质量监督检验检疫总局发布，2003年12月1日起实施。该标准仅包括临床症状、组织病理学、免疫组织化学等三种诊断方法，未包括陆生动物手册指定的另一种确确诊方法即免疫印迹。免疫印迹方法比免疫组织化学方法更灵敏，特异性更好。因此，免疫印迹方法是牛海绵状脑病诊断技术中一种更好的确诊方法，它能更好地服务于我国疯牛病的监测工作。 BSE分为典型BSE和非典型BSE。典型BSE是由于牛采食污染牛羊病毒的肉骨粉或者饲料而引起，非典型BSE为自然发生的一种散发性BSE。自然条件下，BSE经由消化道传播，未发现水平和垂直传播的证据。典型BSE的潜伏期一般为2年～8年，平均为4年～5年，多发于4～6岁的牛，2岁以下罕见，6岁以上明显减少。根据病原的分子量大小，非典型BSE又分为H型和L型。非典型BSE的平均发病年龄为11岁。BSE病程多为数月至一年，最终死亡。 大多数BSE病牛无典型临床症状，因此BSE的诊断应通过实验室检测来实现。BSE的病原是动物机体内脱蛋白的异构体，在病牛血清里检测不到BSE病毒抗体，所以血清学检测方法对于BSE来说是无意义的。目前，实验室诊断方法多以检测BSE病原为目的，包括免疫组织化学方法、免疫印迹方法、ELISA方法等，其中免疫组织化学方法和免疫印迹方法是OIE手册规定的BSE确诊方法。 BSE病牛的中枢神经被病毒侵害会出现海绵状空泡变性，在中枢神经保存良好且未发生自溶的情况下，应用H·E组织病理染色法可以观察到这些病变情况。OIE手册规定H·E组织病理染色法是确诊BSE的辅助方法，在使用免疫组织化学方法诊断BSE时应同时使用H·E组织病理染色法予以辅助确诊；在使用免疫印迹方法诊断BSE时，如果样品适合进行H·E组织病理染色，那么也应同时使用H·E组织病理染色法予以辅助确诊。 1 范围 牛海绵状脑病诊断技术 本标准规定了BSE的临床诊断、实验室诊断及综合判定技术要求。 本标准适用于BSE的诊断，其中临床诊断适用于BSE的监测和流行病学调查，H·E组织病理染色法适用于BSE中枢神经系统的病理诊断，免疫组织化学方法和免疫印迹方法适用于BSE的病原学诊断。 2 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BSE：牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy） H·E：苏木精伊红（Hematoxylin and eosin） HRP：辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase） PBS：磷酸盐缓冲溶液（Phosphate buffered solution） PK酶：蛋白酶K（Proteinase K） PVDF：聚偏氟乙烯（Polyvinylidene fluoride） SDS：十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate） TBST：等渗缓冲盐溶液（Tris-HCl buffered solution with