【行业标准】 粮油检验 粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 超高效液相色谱法

ICS67.040
中华人民共和国粮食行业标准
LS/T 6127—2017
粮油检验
粮食中脱氧雪腐镰刀菌
烯醇的测定
超高效液相色谱法
Inspection of grain and oils-Determination of deoxynivalenol in grains-Ultra-highperformanceliquid chromatography2017-10-27发布
刮瓷层声点病
国家粮食局
2017-12-20实施
本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。
本标准山全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC270)归口。LS/T6127—2017
本标准起草单位：国家粮食局科学研究院、吉林省粮油卫生检验监测站、安徽国家粮食质量监测中心、北京农业质量标准与检测技术研究中心。本标准主要起草人：谢刚、李丽、黎睿、叶金、王松雪、徐振斌、胡斌、崔华、吴宇、辛媛媛、陆安祥。1范围
粮油检验粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定超高效液相色谱法
LS/T 6127—2017
本标准规定了粮食及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇超高效液相色谱法测定的原理、试剂与仪器设备、分析步骤、结果计算等内容。本标准适用于粮食及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。本标准方法脱氧雪腐镰刀菌烯醇的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T602化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB/T5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682
2分析实验室用水规格和试验方法3原理
经过水提取试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇，免疫亲和柱净化、富集后，用超高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。
4试剂与仪器设备
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中一级水的要求4.1试剂
甲醇(CHOH)：色谱纯。
2乙睛（CH.CN)：色谱纯。
聚乙二醇（相对分子量8000）：分析纯。4.1.4乙睛+水（10+90）：取10mL乙腊（4.1.2)加人90mL水其他试剂符合GB/T602的要求。
4.2标准品
4.2.1脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品：纯度≥99%；或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.2.2标准储备液：准确称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品（4.2.1)1mg（准确至0.01mg），用乙腈溶解并定容至10mL，配成浓度为100mg/L的标准储备液，一20C避光保存。4.2.3标准工作液：根据使用需要，准确移取适量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品储备液（4.2.2），用流动相定容至10mL，分别配成浓度为0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L的标准工1
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作液。4℃避光密封保存，有效期一周。材料与仪器设备
脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫亲和柱4.3.2
当者。
定性滤纸：g12cmWhatman4号，或性能相当者。玻璃纤维滤纸：g9cmWhatmanGF/A，或性能相当者。滤膜：0.22um孔径，有机相。
注射器：10mL。
离心管：50mL。
三角瓶：250mL。
量筒。
高速粉碎机。
高速均质器
氮气吹干
速6500r/min~24000r/min。
天平：感量0.1g和0.01mg。
≥5000r/mir
多用振荡器振游频率150次
压力泵。
试验筛1mm孔径
液相色谱柱：C18
mm，填料粒径17μm）,或性能相内径2.
超高效液相色谱仪色括超高效液相色谱仪超高压液相色谱仪和超高速液相色谱仪，配备PDA或紫外检测器和数据处现系统色谱参考条件：
：C18柱（4.3.17
色谱柱：
流动相：4
：乙睛（4.1B水等度洗脱
mL/min
流速：0.1
紫外检测波长：218.gm。
进样量：10uL
柱温：25℃。
分析步骤
扦样与分样
按GB5491执行，在采样过程中，注意防止样品污染。5.2样品制备
5.2.1提取
样品用高速粉碎机（4.3.9）粉碎，过1mm孔径试验筛（4.3.16），混合均勾后，取有代表性样品不少于500g，供检测用。准确称取25g（m，精确到0.1g）充分混勺的试样，置于均质杯或250mL三角瓶中，加人5.0g聚乙二醇（4.1.3）和100mL(Vi）水，高速均质提取2min，或者使用调速多用振荡器（4.3.14）振荡提取30min，用定性滤纸（4.3.2）过滤或转移25mL的提取液于50mL的离心管中，于5000r/min2
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离心5min。再用玻璃纤维滤纸（4.3.3)过滤或于7000/min离心10min，滤液或离心液备用。5.2.2净化
将免疫亲和柱（4.3.1)与10mL注射器（4.3.5）下端连接，准确移取2.0mL(V，）滤液于注射器中，将空气压力泵（4.3.15)与注射器另一端连接，调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱，直至空气进人亲和柱中，用5mL水淋洗亲和柱，流速为1滴/s2滴/s，弃掉全部流出液，抽干免疫亲和柱。准确加入1.0mL(V)甲醇（4.1.1)洗脱，流速为1滴/s，收集全部洗脱液于样品瓶中，于55℃下氮气吹至近干，准确加入1mL(V)乙睛/水溶液（4.1.4)溶解残渣，涡旋混合30s，过0.22um滤膜（4.3.4），作为待测样液备用。
注：对于脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量不超过免疫亲和柱的吸附容量。由于不同厂商提供的亲和柱操作程序可能有所不同，实际操作时，请参照免疫亲和柱厂商提供的操作说明和程序使用。5.3标准曲线的制作
小菌烯醇标准工作液（4.2.3）由低到高注入快速高效液相色谱仪进行分析，以脱氧雪腐脱氧雪腐镰
镰刀菌烯醇浓度为横坐标，相对应色谱峰峰面积为纵坐标，建立标准工作曲线，5.4试验溶液的测定
待测样液（5.2）中待测化合物的可应值应在标维曲线线性范围内，浓度超过线性范国的样品则应重新按5.2进行处理符合要求后再进样分析。待测详液中脱气雪腐镰力菌烯醇的农度为1。液相色谱图
详见附录A
5.5空白试验
不称取试武样，度5.2的步骤做幸实鉴5.6平行试样
子析得到空自试样中持测物的度为Co。按5.2的步骤，对同一试样进行平行试验测定。6结果计算
试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量按式（1)(c1-c)xV
其中：
式中：
试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C
样液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为毫克每升（mg/L）；空白试验脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，单位为毫克每升（mg/L）；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；最终样液所代表的试样质量，单位为克（g)；试样称取量，单位为克(g)；
·（1)
......2)
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样品提取液总体积，单位为毫升（mL）；V通过亲和柱的样品提取液体积，单位为毫升（mL）。计算结果表示到小数点后两位。精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。附录
（资料性附录）
脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液超高效液相色谱图脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准溶液超高效液相色谱图见图A.1。0.004
脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准谱图
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LS/T 6127-2017
中华人民共和国粮食
行业标准
粮油检验粮食中脱氧雪腐镰刀菌超高效液相色谱法
烯醇的测定
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