【地方标准】 食品安全地方标准 食品中4-己基间苯二酚残留量的测定

浙江省地方
DB33/30072015
食品安全地方标准
食品中4-己基间苯二酚残留量的测定2015-09-10发布
浙江省卫生和计划生育委员会
2015-12-10实施
本标准为首次发布。
本标准的附录A为资料性附录。
DB33/3007
1范围
食品安全地方标准
食品中4-已基间苯二酚残留量的测定DB33/3007—2015
本标准规定了虾、蟹类水产品和果蔬中4-已基间苯二酚（4-HR）残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于虾、蟹类水产品和果蔬中4-己基间苯二酚的测定。2原理
用乙睛-二氯甲烷溶液提取样品中4-已基间苯二酚，提取液经氨基固相萃取柱净化、浓缩，残渣用流动相溶解，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量，3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙睛（CHCN）：色谱纯。
二氯甲烷（CH2Cl2）。免费标准下载网bzxz
3.3甲醇（CHOH)
3.4丙酮（CH,COCH3）。
3.5正已烷（CHi4）。
3.6乙腈水溶液（6+4，V/V）：量取60mL乙腈（3.1）和40mL水，混匀后备用。3.7甲醇-丙酮溶液（1+1，V/V）：量取50mL甲醇和50mL丙酮，混匀后备用。3.8乙腈-二氯甲烷溶液（7+3，V/V）：量取70mL乙腈和30mL二氯甲烷，混匀后备用。3.94-已基间苯二酚标准品：CAS136-77-6，纯度大于99.0%。3.104-已基间苯二酚标准溶液：准确称取100mg（精确到0.1mg）的标准品于100mL容量瓶中，用乙睛水溶液（3.6）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL标准储备液，贮存于0℃～4℃冰箱中密封保存，溶液有效期1个月。临用前，取此储备液，用乙水溶液（3.6）稀释成所需浓度的标准工作液。
3.11氨基固相萃取柱：500mg，3mL，或相当者。使用前用6mL甲醇丙酮溶液（3.7）和6mL正己烷活化。
3.12微孔滤膜：0.45μum，有机系。3.13氮气：纯度大于等于99.9%。4仪器
4.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。4.2天平：感量0.01g。
4.3分析天平：感量0.0001g。
4.4离心机：最大转速10000r/min。1
4.5旋涡混合器。
4.6旋转蒸发仪。
4.7固相萃取装置。
4.8氮气吹干仪。
4.9高速组织揭碎机。
5操作方法
5.1样品处理
5.1.1试样制备和保存
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从原始样品中取出代表性样品500g，虾去头、去壳、去附肢，取可食部分：蟹去壳、去鳃等取可食部分；果蔬去皮。用组织揭碎机捣碎混匀，均分成两份分别装入洁净容器中作为试样，密封并标识。将试样放入-18℃以下保存。
制样和试样保存过程中，应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化。5.1.2提取
称取5g（精确到0.01g）样品置于50mL离心管中，加入10mL乙腈二氯甲烷溶液（3.8），高速组织捣碎机匀浆2min，盖塞，旋涡混匀1min，超声提取10min，8500r/min离心5min，取上清液转入100mL旋转蒸发瓶中，重复上述操作一次。合并提取液于45℃旋发至近干，取7.5mL二氯甲烷分三次超声溶解，合并，待净化。5.1.3净化
将5.1.2中的待净化液转移至固相萃取柱（3.11）中。用6mL正已烷淋洗，将固相萃取小柱抽至近干，用6mL甲醇丙酮溶液（3.7）洗脱，流速不超过1mL/min，收集洗脱液。洗脱液于50℃用氮气吹干，残留物用1.0mL流动相溶解，过微孔滤膜（3.12），供液相色谱测定。5.2样品测定
5.2.1色谱条件
色谱柱：Clg柱，150mm×4.6mm（内径），5μuma)
流动相：乙睛+水（6+4，VIV）。b)
流速：1.0mL/min
柱温：35℃。
激发波长：280nm。
发射波长：310nm。
进样量：10μL。
5.2.2标准工作曲线的绘制
用流动相将4-已基间苯二酚标准溶液（3.10）稀释成为0.05μg/mL、0.50μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50μg/mL系列标准工作液，供高效液相色谱分析。5.2.3色谱分析
分别注入10μL4-已基间苯二酚标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按5.2.1色谱条件进行分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据4-已基间苯二酚标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录A。6空白试验
iiiKAoNhiKAca
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。结果计算
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样品中4-已基间苯二酚的残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。结果保留2位有效数字。X_(C-C,)×Vx1000
mx1000
式中：
X一一试样中4-已基间苯二酚的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)：C-一试样溶液中4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升(ug/mL)：Co一一空白试验中4-己基间苯二酚的含量，单位为微克每毫升(ug/mL)；m一一试样质量，单位为克（g)；V一一试样溶液体积，单位为毫升(mL)。3方法灵敏度、准确度和精密度
8.1灵敏度
本方法检出限为0.002mg/kg，定量限为0.010mg/kg8.2准确度
本方法添加浓度为0.010mg/kg~10mg/kg时，回收率为70%~110%。8.3精密度
本方法批内相对标准偏差≤10%，批间相对标准偏差≤15%。(1)
附录A
（资料性附录）
4-己基间苯二酚标准物质色谱图D1AB-280, EYF310(4HR2014-03-17W116C04-0401.DA.14-已基间苯二酚标准物质液相色谱图（1.0μg/mL）AB-80.-I-310(4HR801409-1)
A.24-已基间苯二酚海捕虾中加标色谱图（0.080mg/kg）TiiKAoNhiKAca
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A.34-已基间苯二酚花蟹中加标色谱图（2.0mg/kg）
200000-
150000
100000
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卷AEx.280nm.Em:320nm
A.44-已基间苯二酚苹果中加标色谱图（0.8mg/kg）5
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