【地方标准】 饲料中林可霉素的测定-高效液相色谱法

安徽省地方标准
DB34/T1032—2009
饲料中林可霉素的测定-高效液相色谱法2009-10-21发布
2009-10-21实施
安徽省质量技术蓝督局发布
DB34/T10322009
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由安徽省畜牧兽医局提出。前言
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。本标准起草人：明文庆、许世富、刘发全、丁在亮、汤春莲、陈文帮、张莉、刘红云、蔡东东。本标准首次发布。
http：//foodmate.net/1范围
饲料中林可霉素的测定一高效液相色谱法本标准规定了饲料中林可霉素的测定一高效液相色谱法。本标准适用于饲料中林可霉素的测定。2规范性引用文件
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下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法
3试样的制备
按GB/T14699.1采样，选取有代表性的饲料样品至少500g，四分法缩减至100g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用。4方法原理
试样中的林可霉素加入超纯水超声提取30min，过滤。滤液再过0.45μm的滤膜，以乙睛-水三乙胺（10：90：0.3，磷酸调pH值至3.5）为流动相，流速为1mL/min，波长214nm。用高效液相色谱仪(带紫外检测器)测定。5试剂与材料
5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682二级水的规定。5.2林可霉素对照品纯度≥98.0%。5.3乙睛（色谱纯)。
5.4三乙胺。
5.5林可霉素标准贮备液（0.5mg/mL）：准确称取25mg林可霉素对照品，用超纯水溶解并稀释至50mL量瓶中，贮存于0℃～8℃冰箱中，有效期30d。5.6林可霉素标准工作液：分别吸取林可霉素标准贮备液0.02mL、0.04mL、0.1mL、0.2mL、1mL、2mL于10mL棕色容量瓶中，用超纯水定容，标准工作液系列浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL，4℃保存，有效期7d。6仪器与设备
6.1分析天平，感量0.00001g和感量0.01g。6.2超声波发生器bzxZ.net
6.3高效液相色谱仪（配紫外检测器）。6.4涡旋混合器。
6.5饲料粉碎机。
6.6振荡摇床。
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分析步骤
7.1试样提取
称取样品10±0.05g，加入50mL超纯水超声提取30min，过滤。滤液再过0.45μm的滤膜，滤液上HPLC分析。
7.2色谱条件
色谱柱：Cis（5μm，4.6×150mm)：检测波长：214nm；
流动相：乙水-三乙胺（10：90：0.3），磷酸调pH值至3.5：流速：1.0mL/min；
进样体积：20μL。
7.3定量测定
林可霉素标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。8结果计算
8.1计算公式
结果按下式计算：
Cs× A×V×1000
Asxm×1000
式中：
样品中林可霉素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：林可霉素对照品的浓度，单位为微克每毫升（ug/mL）：供试品溶液峰面积：
对照品溶液峰面积：
加入提取液体积，单位为毫升（mL）：试样质量，单位为克（g）。
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9
检测方法灵敏度、准确度、精密度9.1灵敏度
本方法林可霉素的检出限为5.0mg/kg。9.2准确度
本方法回收率均为80%～110%。
9.3精密度
本方法的批内变异系数CV≤10%，批间变异系数CV≤15%。bttr
A.1林可霉素对照溶液色谱图
A.2样品中添加林可霉素色谱图
注：1——林可霉素
附录A
（资料性附录）
色谱图
林可霉素对照溶液色谱图
样品中添加林可霉素色谱图
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