【地方标准】 香蕉种苗检疫规程

2008-02-04
DB44/T463—2008
PlantOuarantine Rules for BananaPlantlets2008-05-04
广东省质量技术监督局
本标准的附录A、附录B是资料性附录。本标准由广东省农业厅提出并归口。本标准起草单位：广东省植物保护总站、华南农业大学资源环境学院。DB44/T463—2008
本标准主要起草人：陈忠南、周而勋、谢辉、周国辉、李小妮、吴仕豪、曹俐、任小平、李梅辉、杨媚、王琳、周春娜。
N范围
DB44/T463-2008
本标准规定了香蕉类种苗（包括组培苗和吸芽苗）在产地、调运（托运、邮寄、携带）和销售过程中的术语和定义、限定有害生物、种苗生产的检疫要求、现场检验、室内检验和疫情处理。本标准适用于香蕉类种苗（包括组培苗和吸芽苗）在产地、调运（托运、邮寄、携带）和销售过程中检疫性有害生物及限定非检疫性有害生物病害检疫和鉴定。O术语和定义
本标准采用下列术语和定义。
产地检疫
指植物检疫机构对植物及其产品（含种苗及其他繁殖材料，下同）在原产地生产过程中的全部检疫工作，包括田间调查、室内检疫、疫情处理、签发证书及监督生产者做好选地、选种和疫情处理工作。aKo
调运检疫
指种苗、繁殖材料和果实在调运（包括托运、邮寄、携带、销售等）过程中，实施检疫检验和签证。OKP
实验室检验
结合产地检疫和调运检疫，抽取一定数量的样品送回实验室进行检疫检验、检测。QKQ
指同一时间、同一发运地点、同一收货地点、同一品名（品种）、同一运输工具的全部应检物品。CKR
指同一包装的全部应检物品。
有害生物
任何对植物或植物产品有害的植物、动物或病原体的种、株（品）系或生物型。OKT
限定有害生物
包括检疫性有害生物或限定非检疫性有害生物QKU
检疫性有害生物
对受其危害的地区具有潜在经济重要性，但尚未在该地区发生，或虽已发生但分布不广并进行官方防治的有害生物
限定非检疫性有害生物
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种非检疫性有害生物，但它在供种植的植物中存在，危及这些植物的预期用途而产生无法接受的经济影响，因而在输入方境内受到限制。OKM
为确定是否存在有害生物或为鉴定有害生物而进行的除肉眼检查以外的官方检查。aKw
在一个地区内为确定有害生物的种群特性（或确定存在的品种情况）而在一定时期采取的官方程序。aKNO
植物检疫
旨在防止检疫性有害生物传入和/或扩散或确保其官方控制的一切活动。P限定有害生物
PKN检疫性有害生物
PN香蕉细菌性枯菱病菌2号小种［Ralstoniasolanacearum（Smith）Yabuuchietal.race2]PKKO香蕉镰刀菌枯菱病菌4号小种［Fusariumoxysporumf.sp.cubense（E.F.Smith）Snyderet Hansen race 4]
PKKP香蕉穿孔线虫[Radopholussimilis（Cobb）Thorne]PKKQ短体属线虫（Pratylenchusspp.）（非中国种）PKNKR根结属线虫（Meloidogynespp.）（非中国种）PKs黄瓜花叶病毒香蕉株系（Cucumbermosaicvirusbananastrain，CMV）PKO限定非检疫性有害生物
PKOKN香蕉束顶病毒（Bananabunchtopvirus，BBTV）PKCKO香蕉线条病毒（Banana streakvirus，BSV）Q种苗生产的检疫要求
QN检疫申报
香蕉种苗生产者在拟建香蕉苗圃前1个月，向当地农业植物检疫机构提交香蕉种苗检疫申报表（见表1)，经审核同意后，方可进行繁育香蕉种苗。种苗在出场前，应向当地农业植物检疫机构申请检疫。2
申报号：
申报日期：
申报者：
苗圃编号
联系人：
原种来源
植物检疫机构审核意见：
香蕉种苗检疫申报表
联系电话：
审核人（签名)：
预计生产
种苗数量
(株）
注1：本表一式二联，第一联由审核机构留存，第二联交申报者。注2：本表仅供当季使用。
QKO苗圃的选定免费标准bzxz.net
地址：
预计假植时间
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种苗生产
隔离条件
植物检疫专用章
年月日
QKCN选在无检疫性有害生物地区，袋装苗使用的土壤或基质需为山土或塘泥，并做好消毒处理，禁止携带检疫性有生物。
QKCKO在香蕉病毒病发生区，苗圃应有防虫网室：若无防虫网室，周围1.5km以上无香蕉类植物QKP香蕉脱毒组培苗生产要求
QKPKN选母本园选取优质、高产、整齐及无或少有害生物的蕉园。QKPKO种苗生产和检疫管理要求母本园无香蕉病毒病和香蕉枯萎病发生，土壤条件和肥水管理良好，病虫防治及时。园主积极配合。QKQ病毒血清检测
3代内的芽长出后，样品即送有资质的检测单位作病毒血清学检测（ELISA法）。主要检测香蕉束顶病毒（BBTV）和黄瓜花叶病毒（CMV）。对被检测为阳性的株号即予以淘汰，只保留阴性株号的样品，继续继代繁殖。
QKR苗圃防疫措施
QKRKN禁止携带未经消毒的香蕉种苗（包括组培苗和吸芽苗）进入苗圃：3
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QKRKO苗圃内使用的工具要新置专用，使用后要用10%漂白粉水溶液或1%次氯酸钠溶液消毒，用清水冲洗后晾干备用。
QKRKP严格防除香蕉蚜虫、切断传播途径QKRKQ进入苗圃的人员，需换穿已消毒的备用工作服和鞋。R现场检验
RN产地检疫
由当地农业植物检疫机构（县级以上，以下同）凭《香蕉种苗检疫申报表》进行产地检查，对香蕉类种苗（包括组培苗和吸芽苗）在苗圃生长期间，进行症状识别（见附录A）。在全面目测检查的基础上，用随机取样检查（取样不少手10），苗木在1万株以下查全部，1万株至10万株查30%，10万株以上查15%。将检查和抽样情况，详细填入《香蕉种苗产地/调运/销售检疫现场调查记录表》（见表2）。RKO调运或销售检疫
当地农业植物检疫机构对调运/销售的香蕉种苗要查验有关单证，核实产地、品种名称、数量、包装，对未经检疫或超过调运检疫有效期的种苗，苗木100株为一件，100株以下全部检查；100～10000株抽样检查6%~10%，10000株以上的按苗木总抽样检查3%~5%，抽样和调查情况填入《香蕉种苗产地/调运检疫调查记录表》（见表2）。香蕉种苗产地/调运/销售检疫现场调查记录表o
编号：
种苗生产/经营者：
调查面积/货物数量：
品种名称：
种苗来源：
症状描述：
发病率及分布情况：
初步判断：
送实验室检验样品采集及编号：备注：
审核人（签名)：
调查地点：
对应申报号：
种苗类型：
调查日期：
填表人（签名)：
植物检疫专用章
S室内检验
DB44/T4632008
SKN当现场发现疑似有限定有害生物的样本，又难以确切诊断的，将被害种苗、病残体及时送实验室确诊鉴定。
SKO香蕉种苗有害生物实验室检测方法见附录B检验结果填入《香蕉种苗实验室检验报告单》（见表3）。
P香蕉种苗实验室检验报告单
编号：
产地/调运/销售检疫调查记录表编号：对应申报号
品种名称
检验方法：
检验结果：
检验人（签名）：
审核人（签名)：
T疫情处理
样本号
送检人：
种苗类型
送检日期：
取样日期
取样部位
植物检疫专用章
年月日
在产地/调运/销售检疫及实验室检验过程中，发现带有本规程4条所列有害生物的，由当地农业植物检疫机构签发《植物检疫处理通知单》（见表4，生产/经营者应在当地农业植物检疫机构监督下进行疫情处理。处理后，经当地农业植物检疫机构检验，未发现本规程4条所列有害生物活体，鉴定为处理结果合格，处理不合格或无除害措施的，按植物检疫有关法律法规规定处理。编号：
对应申报号
品种名称
检验结果：
处理意见：
检疫员（签名）：
审核人（签名)：
Q植物检疫处理通知单
样本号
种苗类型
种苗生产/经营者
DB44/T4632008
取样日期
取样部位
植物检疫专用章
注1：第一联交种苗生产/经营者，第二联留植物检疫机构。U签证
农业植物检疫机构根据《香蕉种苗产地/调运/销售检疫现场调查记录表》和《香蕉种苗实验室检验报告单》的结果，签发《产地检疫合格证》和调运《植物检疫证书》。6
（资料性附录）
香蕉限定有害生物田间症状的识别DB44/T463—2008
^KN香蕉细菌性枯萎病菌2号小种［Ralstoniasolanacearum（Smith）Yabuuchietal.race2]AKNKN外部症状
香蕉细菌性枯萎病是维管束病害，香蕉各发育阶段均感病。幼年植株感病，迅速萎蕉而死亡，中间叶片锐角状破裂，不变黄。成株期感病，首先内部叶片近叶柄处变脏黄色，叶柄崩溃，叶片萎焉死亡，同时从里到外的叶片逐渐脱落、于枯，吸芽开裂，叶鞘变黑。感病植株若开始结果，果实停止生长，香蕉畸形，变黑皱缩。
AKNKO内部症状
感病假茎横切面可见维管束变绿黄色至红褐色，甚至黑色，尤其是里面叶鞘和果柄、假茎、根围及单个香蕉上均有暗色胶状物质及细菌菌溢。香蕉果肉最终当果皮开裂后形成灰色干腐的硬块。横切病香蕉假茎，在显微镜下观察，发现有菌溢现象。香蕉细菌性枯萎病很容易与香蕉镰刀菌枯萎病（即巴拿马病）的内部症状相混淆，诊断时必须仔细观察内部和外部症状结合病原菌的分离。巴拿马病最初发病是最老的叶片或最低的叶片开始发黄、萎蕉而变褐色，然后扩展至内部叶片，果实上无症状。而香蕉细菌性枯萎病往往是内部三张叶片变黄或淡绿色，后扩展至外；且果实上有症状。AKO香蕉镰刀菌枯菱病菌4号小种（Fusariumoxysporumf.sp.cubenseSnyder& Hansenrace4)
AKOKN外部症状
香蕉枯萎病又称为香蕉镰刀菌枯萎病、巴拿马病或黄叶病，是一种土传性的维管束病害。该病菌侵染香焦根系和假茎，堵塞输导组织，使病植株表现黄叶症状。病害先从下部较老的叶片开始发生，发病初期叶片边缘变黄并遂渐扩展至主脉：病叶叶柄在靠近叶鞘处容易折曲、下垂；有时假茎基部开裂。进行外部症状检查时，仔细检查香蕉苗是否具有上述症状。^KOKO内部症状
横切罹病香蕉假茎，可见维管束组织变成红褐色或暗褐色。对外表上表现为黄叶症状的香蕉苗，横切其假茎，如果维管束组织变成红褐色或暗褐色，病组织保湿后可见白色的菌丝体和病菌的分生孢子，经显微镜检查可初步确定为枯萎病（香蕉枯萎病菌的鉴定标准B.2.2.4）。AKP香蕉寄生线虫病
AKPKN田间为害症状
AkPKkN香蕉穿孔线虫（Radopholussimiiis）香蕉穿孔线虫是迁移型内寄生线虫，侵染香蕉根部，致使香蕉根表面产生红褐色略凹陷的斑痕，并出现边缘稍凸起的纵裂缝，将病根纵切开，可见皮层上有红褐色条斑，随着病害的发展，根组织变黑腐烂：香蕉地上部表现为生长缓慢，叶片小、枯黄，座果少，果实小，由手根系被破坏，固看能力弱，蕉株易摇摆、倒伏或翻莞，故香蕉穿孔线虫病文称为“黑头倒伏病”（blackheadtopingdisease）。7
AKPKNKO短体属线虫（Pratylenchusspp.）DB44/T463—2008
短体线虫是迁移型内寄生线虫，主要侵染为害香蕉的根部，导致根部形成长条形红色病斑，随着线虫在根内不断取食和移动，病斑逐渐扩大，原来的病区变黑，但边缘仍为红色。后期病斑易受土壤中次生病原物侵染，根部出现大面积组织坏死、腐烂。地上部则表现为生长矮化、调菱或死亡。AKPKNKP根结属线虫（Meloidogynespp.）根结线虫是固定型内寄生线虫，侵染为害香蕉苗根部导致其形成肿瘤，常称其为根结。根结初期一般为黄白色、表面光滑，以后逐渐变为黄褐色、表面粗糙。有时在根结上还可以长出不定须根，须根受侵染后又形成根结。地上部则表现为生长矮小、黄化等衰退症状。AKPKO田间采样
当田间香蕉苗的地上部有明显症状时，选择这些植株作为采样点；当田间香蕉苗的地上部无明显症状，采用棋盘式或平行跳跃式方法随机确定采样点，在1公顷～2公项的地块上，至少取20个～30个点。在取样点，采集香蕉苗的根和根际土壤。当根部有明显受害症状，采集病变的根和根际土壤；若根部无明显受害症状，则采集新根（或营养根）及其周围的土壤。每点取土壤100g左右，根组织50g左右，将各点士壤混合均后，倒去部分土壤，保留1000g作为1个士壤样本。采集的土壤和根样品置于塑料袋中，带回实验室立即分离；或保存在20℃～25℃室内，保湿、透气、避免阳光直射，但不要超过2周。
AKQ香蕉病毒病（黄瓜花叶病毒香蕉株系Cucumbermosaicvirus bananastrain，CMV）AKQKN黄瓜花叶病毒香蕉株系所致的香蕉花叶心腐病：症状主要为花叶，严重时叶片边缘变褐上卷心叶褐色腐烂。
AKCKO香蕉束顶病毒所致的香蕉束顶病：症状包括叶脉出现点线状或直线状的“青筋”，顶叶变小，叶片卷缩，叶缘上卷，叶色呈淡黄色，叶质硬脆。AKQKP香蕉线条病毒所致的香蕉线条病：症状多样，主要在叶片上出现点线状褪绿条纹或坏死条纹，有时叶脉肿大甚至坏死，部分品种叶片变小甚至完全没有叶肉。8
（资料性附录）
香蕉限定有害生物的实验室检测方法KN香蕉细菌性枯萎病的实验室检验KNKN田间标本的病原菌检查
_KNKNN仪器设备
光学显微镜及镜检用具。
KNKNKO适用范围
原种（组培外植体）、盆栽商品苗和吸芽种苗。_KNKNKP检查程序
用双面刀片取病健部，切成薄片，在显微镜下观察，可见菌溢现象。KNKO病原菌室内分离和检查
KKOKN仪器设备
光学显微镜，高压灭菌锅，恒温培养箱，酶联仪等。KNKCKO适用范围
田间症状及田间标本镜检仍不能确诊的病组织。KNKOKP操作程序
DB44/T463—2008
a)用自来水把病组织上的杂质冲洗干净，选取病斑的病健交界组织，经过表面消毒，用70%酒精消毒2S3S，0.1%升汞（或2%次氯酸钠溶液）2min和灭菌水洗过后，用培养血稀释分离法或平板划线分离法在含有TTC的酪蛋白陈葡萄糖（CPG）培养基分离，观察典型菌落，有粘性、有红色菌落。b）培养Ⅲ稀释分离法：取灭菌的培养Ⅲ3个，每个培养皿中加灭菌水0.5mL，切取约4mm见方的小块病组织，经过表面消毒和灭菌水洗过3次以后，移在第一个培养血的水滴中。用灭菌的玻棒将病组织研碎，静置10min～15min，使组织中的细菌流入水中（配成悬浮液），然后用灭菌的移植环从第一个培养血中移植3环到第二个培养血中，充分混合后再移植3环到第三个培养皿中。然后，将溶化的琼胶培养基冷却到45℃左右，倒在三个培养皿中。冷却凝固后，将培养血翻转，在适温下培养。培养皿用记号笔注明分离材料、日期和稀释编号。C)平板划线分离法：取小块病组织，经过表面消毒和灭菌水洗过2次以后，放在灭菌载玻片上的灭菌水中，用灭菌玻棒研碎。静置一定时间，用灭菌的移植环蘸取以上组织液在琼胶平板上划线培养：先在平板的一侧顺序划3条～5条线，再将培养血转60度，将移植环灭菌后，从第二条线末端，顺序划出3条～5条线。也有其他划线的形式，如四分划线和放射划线等。KNKCKQ香蕉细菌性枯萎病菌的鉴定标准香蕉细菌性枯萎病菌是青枯劳尔氏菌2号小种，该病原为非荧光群，rRNAII群，单极鞭毛，无色素，细胞积累PHB，不从蔗糖形成果聚糖，水解明胶弱，不水解淀粉和七叶苷，还原硝酸；硝化产气，40℃不生长；氧化酶阳性，精氨酸双水解酶阴性，不产酪氨酸酶，2%NaC1肉汤不生长。DNA中G+Cmo1%为66.5%一68%，接种香蕉或番茄有致病性，纯分离菌的生理生化指标见表B1，纯分离菌的9
生物型，在Hayward基础培养基上糖产酸情况及接种烟草反应情况见表B2，表B3。B.1青枯菌的主要生化指标
革兰氏染色
氧化酶试验
葡萄糖发醇
葡萄糖氧化
过氧化氢酶
明胶水解
海藻糖
甘露糖醇
山梨糖醇
半乳糖醇
纤维二糖
麦芽糖
主要侵染茄科
香蕉、大蕉
褐尾蕉
马铃薯、番茄
结果判定
0.5%Nacl忍耐性
2%Nacl忍耐性
4%Nacl忍耐性
还原硝酸盐
柠檬酸盐
淀粉水解
B.2香蕉细菌性枯萎病菌生化型的测定生化型1
生化型2
生化型3
生化型4
香蕉细菌性枯萎病菌小种的测定时间
10h~12h
接种烟草反应类型
无可见症状
暗褐色，周围黄色斑
导管褐色
叶片萎蔗，黄花
过敏性反应，接种组织明亮
组织变薄，透明，白色坏死斑
接种组织变黄
DB44/T463—2008
生化型5
与生化型关系
1，3，,4
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