【地方标准】 农产品质量安全 北冬虫夏草代料瓶栽栽培技术规程

备案号：
辽宁省地
方标准
DB21/T1541-2007
农产品质量安全北冬虫夏草代料瓶栽栽培技术规程
2007-07-01发布
2007-08-01实施
辽宁省质量技术监督局发布
本标准由辽宁省农村经济委员会提出并归口。DB21/T15412007
本标准起草单位：大连珍草生物技术开发中心、辽宁省农业科学院食用菌研究所本标准起草人：陈平、苏君伟、孟昭武、邢瑛、黄磊、林文。1范围
DB21/T15412007
农产品质量安全北冬虫夏草代料瓶栽培技术规程本标准规定了北冬虫夏草代料栽培的产地环境、生产工艺、栽培技术管理、产品采收与包装等要求。
本标准适用于利用广口瓶或罐头瓶作为代料基质的容器来培养北冬虫夏草的方法。不适用于虫体栽培方式。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。B5749生活饮用水卫生标准
B/T14881食品企业通用卫生规范B11680食品包装用纸卫生标准
B9693食
食品包装用聚丙烯树脂卫生标准B9696
食品包装用聚乙烯树脂卫生标准3复合食品包装袋卫生标准
B9687食品包装聚乙烯成型品卫生标准NMIT391
绿色食品产品环境技术条件
3产地环境
北冬虫夏草栽培产地环境应符合NMIT391要求。4生产工艺流程
原料选择→培养料配置→装瓶（袋）→灭菌→冷却→接种→发菌期管理→转色管理→出草管理→加工→包装→储藏。
5栽培技术管理
5.1栽培季节
北冬虫夏草出草适宜温度为10℃～22℃，辽宁地区每年4月～5月及9月～11月是北冬虫夏草出草最佳季节。如果有空调设备或利用条件好的防空洞则一年四季都可栽培。5.2品种选择及菌种生产
5.2.1品种选择
应选择符合国家《食用菌菌种管理办法》规定的优良品种，并经过栽培试验证明该品种纯正、菌丝生长健壮、浓密有力，菌龄短、无杂菌、色泽正，转色快、出草快、出草整齐为优良品种。如果不转色或转色较浅的菌株很难长出子座，即使出草，产量也很低。菌种在生产前必须转接活化，充分保证其纯度和较强的活力，发现菌丝体有倒伏现象，要进行复壮后再使用。5.2.2菌种生产
根据不同生产季节，按NY528的要求，生产一级种（母种）及栽培用的菌种。1
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5.2.2.1固体菌种制作
5.2.2.1.1培养基配方
配方I：大米700g，玉米渣300g，葡萄糖5g，蛋白陈5g，蚕粉10g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，VB少许：
配方II：大米1000g，葡萄糖10g，蛋白陈10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g。5.2.2.1.2制备方法
选任一配方，将药品溶于水中制成营养液.然后每瓶加入大米30g～32g，营养液30ml～35m，用聚丙烯薄膜封口灭菌。采用常压灭菌100℃，维持时间8h～12h。采用高压蒸汽灭菌121℃～126℃，维持时间40mn~60mn。
5.2.2.1.3固体菌种接种
首先将环境、器具、工作服及人手做消毒处理。按照无菌操作将试管中的斜面菌种切割出一块迅速移入瓶（袋）内，然后封好瓶口或扎好袋口。一般每支斜面菌种可接4瓶一6瓶。摇动菌种块使其在培养基的料面上均匀滚过，这样发菌快，封面快。接种后把菌种瓶（袋）及时移入培养室的培养架上，贴上标签注明菌号与接种时间。5.2.2.2液体菌种制作
5.2.2.2.1培养基配方
配方I：玉米粉30g，黄豆饼粉20g，醇酵母粉10g，磷酸二氢钾1.0g，硫酸镁0.5g，蛋白陈0.5g，水1000nl，动物血液0.5%配方II：马铃薯煮汁1000l，煎糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B10mt，增产灵0.5ng
配方IⅢl：蛋白陈10g，天门冬酰铵1g，甘油30g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g，生长素1ml～5ml，水1000ml。
5.2.2.2.2制备方法
任选一配方，各组分经充分溶解后，在每个500ml容器瓶中（锥形瓶或罐头瓶）加入100nl～150ml溶液，然后分别用棉塞或聚丙烯薄膜封口。采用常压灭菌100℃，维持时间2h～4h。采用高压蒸汽灭菌121℃～126℃，维持时间20min～40min。5.2.2.2.3液体菌种接种
在无菌条件下，从经过活化的斜面菌种中挑取4块-5块黄豆粒大小的带有菌丝体的培养基，接入已灭菌的液体培养基瓶内，贴上标签，注明菌号与接种时间，移到摇床上培养。5.2.3菌种培养
5.2.3.1固体种培养
5.2.3.1.1培养条件
控制温度15℃~22℃，空气相对湿度50%~70%室内保持黑暗。5.2.3.1.2定期检查
在培养过程中的分别在第3天、第5天、第7天定期逐瓶检查，发现杂菌污染，即瓶内出现黑、红、绿等颜色或有异味、有积水，及时淘汰。5.2.3.1.3培养时间
15d～20d菌丝长满，即可做原种或栽培种使用。5.2.3.1.4菌种鉴别
菌丝初期洁白、粗壮，生长速率快，见光后容易分泌黄色色素，培养基表面气生菌丝较厚，即为正常菌种。
5.2.3.2液体种培养
根据生产规模采用不同的菌种制作方式。生产规模小，可采用固体菌种或摇瓶菌种。生产规模大，可采用深层发酵方式逐级扩大液体菌种的制作量，以满足生产的需要。2
5.2.3.2.1培养条件
DB21/T1541--2007
在25℃土1℃条件下，摇瓶菌种在摇床上震荡培养，室内光线要暗。采用往复式震荡培养机，震荡频率在100次/mn，如采用旋转式震荡机，则偏心距40mm频率为150次/min。5.2.3.2.2定期检查
接种后培养初期的第2天开始进行逐瓶目查，发现有菌液浑浊、菌丝迟迟不长或出现异味的即为污染菌瓶，随后在培养中期要抽样做平板培养和显微镜检查，以便及时发现有无细菌和霉菌的污染，观察菌丝活力。
5.2.3.2.3培养时间
培养5d～7d即为摇瓶菌种。
5.2.3.2.4菌种鉴别
菌液内布满北虫草菌球或菌片，菌液清亮，经纯度检查无杂菌污染，菌丝体重量达到一定比例（菌体重量g/液体积L）。
5.2.3.3发酵罐培养菌种
5.2.3.3.1培养方法
将已培养好经镜检合格的摇瓶菌种，在无菌条件下注入装有小玻璃球的无菌瓶中，进行剧烈震荡（振动频率为200次/mn），把菌丝体打碎制成种子悬浮液。5.2.3.3.2扩繁接种
按10%的接种量接入一级种子罐培养，在22℃土1℃条件下培养7d～10d，再由一级种子罐按10%种量压入二级种子罐，于相同条件下培养7d～10d后再压入三级种子罐，同样条件下培养7d～10d。然后压入发酵罐培养，罐与罐之间的容积比呈10倍放大关系。5.2.3.3.3扩繁条件
发酵罐培养一般采用自吸式发酵罐。要求罐温23℃～26℃，最适25℃土1℃：罐压0.4kg/cm20.8kg/cm；通气量0.5V/v~0.8V/v；搅拌条件为50L罐40r/mn~50r/mn；500L罐120r/mn~200r/mn：1000L罐200r/mn。培养7d~10d5.2.3.3.4转罐及放罐标准
逐级转罐和最后放罐之前，要求从培养罐内进行无菌取样，经镜检，菌种纯度、菌丝活力、菌丝体生长量都达到要求，才能作为菌种进行下一步培养。5.3：栽培场地及菇室建造
5.3.1栽培场地
栽培北冬虫夏草的场所，应选择地势平坦、通风良好、水源充足、水质洁净、远离畜禽舍、无污染、环境清洁卫生的地方。
5.3.2菇室建造
栽培北冬虫夏草可利用空闲房屋、日光温室、或塑料大棚做栽培场所。为提高栽培场所利用率，可采用符合卫生要求的材料制作摆放栽培瓶的培养架。5.4：原料选择、栽培容器及生产设备5.4.1原料选择
栽培北冬虫夏草，主要用大米、玉米、小米、小麦、高梁米等可食用粮食作为原料。这些粮食的选择要特别注意无公害，符合无公害食品的标准，并要求新鲜、无虫蛀。5.4.2栽培容器
栽培北冬虫夏草所需容器，有500ml或750ml广口瓶、罐头瓶、广口塑料瓶。5.4.3灭菌设备
灭菌设备有两种：常压灭菌锅或高压灭菌锅。常压灭菌锅可自行建选，其构筑材料必须符合相应的安全卫生要求。高压灭菌设备必须从具有“压力容器生产许可证”单位购买。5.5栽培料配方与配制方法
DB21/T1541—2007
5.5.1配方
配方I：大米100%（适合东北产大米）；一配方IⅡI：大米85%，玉米碴（15%（适合东北产大米）：一配方IⅢl:大米1000g蛋白陈10g，多维葡萄糖5g，多维豆奶粉10g，磷酸二氢钾1.5g硫酸镁0.75g，酵母膏5g，麸皮（煮汁)100g—配方IV：大米800g，玉米渣200g，煎糖20g.硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，酵母膏2g一配方V：大米900g，高粱米100g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，酵母粉5g，蛋白质少量。5.5.2卫生要求、灭菌方法及配制方法5.5.2.1卫生要求
上述配方任选其一，要求严格按配方配制，不许添加非配方成分：水质符合B5749标准，场所和工具符合卫生要求，防止有害异物的混入。封口塑料膜应符合B9693要求。5.5.2.2灭菌方法
一采用常压灭菌：配制时采用500m容器加入30g培养基后再加适量水，水量为培养基的1.5倍。采用750m容器加入50g培养基后再加适量水，水量为培养基的1.5倍采用高压灭菌：配制时采用500容器加入30g培养基后再加适量水，水量为培养基的1.2倍。采用750m容器内加入50g培养基后再加适量水，水量为培养基的1.2倍。5.5.3配制方法
加水前先用食用碱将水的pH值调至7~8，用少许水将药物溶解后再装瓶，装瓶后用0.04mm~0.05mm的聚丙烯塑料膜封住瓶口，外套橡皮圈。为了在后期增加补光效果，一般不用低压聚乙烯膜封口。5.6灭菌与接种
5.6.1灭菌
5.6.1.1菜用常压灭菌
当温度达到100℃时，要保持10h，再焖锅6h。5.6.1.2采用高压灭菌
当压力达到0.15mpa时，要保持1h，灭菌后的培养基不能呈糊状，基质要疏松，以利于菌丝生长。5.6.2接菌
5.6.2.1接菌前的环境消毒
接种室或接种箱在使用前要用空气净化器、紫外线或75%酒精消毒。超净工作台在使用前20分钟打开紫外灯杀菌：接种人员要穿干净的工作服，双手用75%的酒精棉球消毒：接种用具及菌种瓶表面用0.2%酒精溶液擦洗消毒，接种勺要在每换一个菌种瓶前都经灼烧灭菌；采用玻璃吸管接菌要预先包好与培养基同时灭菌，使用时每换一个菌种瓶就要更换一支吸管：接菌前还要准备好足够的经过杀菌处理的无菌水，接菌时采用三人一组进行操作，一人搬运，一人开盖、封盖，一人接菌。5.6.2.2固体菌种接种方法
在酒精火焰旁，打开菌种瓶口，用接种勺或接种铲将一块蚕豆粒大小的菌种块迅速移入培养瓶内，封口。并摇动菌种块使其在培养基的料面上均匀滚过。然后贴标签，置于培养室。5.6.2.3采用摇瓶菌种接种
培养好的摇瓶菌种应尽快使用，在1d～2d内使用完毕。以免长时间存放表面形成菌皮，菌种老化、活力降低，接菌过程要在无菌条件下进行，首先用无菌水将北冬虫夏草的液体菌种稀释3倍，然后进行接菌。接菌量为10m，用接菌勺或吸管尽量把菌种均匀的撒在料面上，以促进发菌快、出草均匀。5.6.2.4采用发酵罐菌种
要求有配套的液体菌种接种机及菌种的分装储运设备。液体菌种要求尽快使用，接菌后的栽培瓶要及时移入培养室，贴上标签，注明菌种编号、接菌日期。5.7发菌期管理
5.7.1发菌环境
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菌瓶接完菌后，即进入菌丝培养阶段，又称发菌培养。在此阶段培养环境要求避光、通风、保温、控制湿度。培养室在使用前要彻底清扫，用紫外线、空气净化器或75%精进行消毒。5.7.2温度控制
菌丝培养在6℃～30℃均可生长，5℃以下停止生长，适宜温度为15℃～25℃。当室温低于10℃时可采用电炉、暖气、士墙等适当的方法进行加温，接种后在18℃～20℃温度控制下经过24h，培养基表面形成无数的小星状菌落，4d～5d连片封面：液体种菌瓶6d～10d菌丝可布满培养基：固体菌种的菌瓶发满菌丝的时间为20d～30d。
5.7.3光照控制
在菌丝生长阶段不需光线，要求避光培养，当菌丝完全吃透培养料后，采用光照刺激使菌丝进入生殖生长阶段，光照强度为100LX～200LX采用阳光或日光灯均可，要求散射光，光照不宜直射，不能昼夜光照，长时间的连续光照会阻碍原基的形成。5.7.4湿度控制
瓶栽发菌期室内要保持65%75%的空气相对湿度。5.7.5通风管理
菌丝生长阶段呼吸量较少，室内通风次数可适量减少.根据室内所放瓶数而定。一般每天通风1次～2次，每次20mn～30min。通气的同时要注意室内温、湿度的保持。5.8出草管理
5.8.1转色管理
菌丝长满后及时散开菌瓶，增加光照，促进转色。每天进行10h～12h的持续光照，光照强度为100LX～200LX。光照不足可采用日光灯补光。转色初期温度控制在21℃左右，后期温度控制在23℃～24℃左右。相对湿度85%左右。同时在封口膜上扎通气孔或微微揭膜，增加瓶内的通气量。经过2d～3d即可完成转色管理。
5.8.2出草管理
5.8.2.1温度
形成子座的温度为10℃~24℃，最佳温度为16℃~22℃.要求有8℃左右的温差刺激。应尽可能保持温度在10℃～25℃之间。当温度低于10℃或高于25℃时不易形成子座。5.8.2.2湿度
子座生长阶段室内空气相对湿度为85%95%间，以减少栽培瓶内的水分蒸发，满足子座生长的需求。
5.8.2.3空气
在子座形成和生长阶段需要充足的氧气，结合控制温度、湿度，每天通风2次～3次，每次30mn5.8.2.4光照
在子座形成和生长阶段应保持光照强度200LX～500LX每天持续8h～10h，光照适宜，子座色泽金黄、品质好；光照较弱，其色泽趋淡、品质偏差。从接菌到栽培瓶内子座形成需要15d～20d；再经30d～40d子座成熟采摘。
6采摘加工包装和储藏
6.1采摘标准
当子座顶端开始膨大，有棒状黄色突起物出现时即可采收。采收要及时，否则会倒伏、枯萎、腐烂6.2采摘要求
采菇人员要身体健康，按卫生标准穿戴洁净的工作服、帽、口罩。在符合卫生标准的工作间内，套上乳胶手套用酒精消毒后，使用经过消毒的厨用不锈钢夹伸入瓶内，从虫草的根基部拨拔取虫草，剔除破裂、变色等不合格的北虫草，放在洁净的食品专用箱内码放整齐。6.3加工
DB21/T1541—2007
6.3.1加工
将采收后的北虫草及时晾干或烘干。烘干温度宜在30℃～40℃。过高温度会破坏其中的酶活降低北虫草的品质。阳光下晒干会使北虫草的颜色变淡。晾干要在晴朗的天气，避开阴雨天气，否则北虫草子座易变褐、变黑甚至霉烂。晾干或烘干的北冬虫夏草的含水量经检测应在13%以下。6.3.2干制工艺流程
修剪分离子座→分级→上筛一→烘拷→喷洒黄酒→回软整形→包装。6.3.2.1分级
根据子座的长短与粗细分成4个等级：特等品：子座长80mm以上，粗细均匀，色泽金黄，有光泽；-等品：长70mm80mm金黄色，棒头尖圆如球，无白色碎末和剪边皮货二等品：长60mm~70m色红黄，上粗下细，边皮剪的粗细均匀，无米粒杂质；三等品：长50mm以下，有皮渣及破碎物，子座纤细，色泽较淡。6.3.2.2上筛
将分级的子座均匀的撒在烘盘上。6.3.2.3烘烤
无论采用何种干燥设备，在烘烤时一定要掌握好温度、排湿、倒盘及烘烤时间。6.3.2.4喷酒黄酒
出盘时的含水量略低于产品要求的含水量，通过冷却、喷洒黄酒、回软整形达到产品要求的含水量标准。
6.4包装
6.4.1包装环境wwW.bzxz.Net
应符合B/T14881要求。
6.4.2包装材料
纸质包装材料应符合B11680；塑料袋、塑料膜包装材料应符合B9693、B9696、B9683、B9687要求。
6.4.3包装方法
小袋包装外装纸盒一般为25g或50g的小袋包装，常用聚乙烯袋或聚丙烯制成小袋，每10袋装在一个纸盒中，也可用涂料玻璃纸袋和复合薄膜包装袋，纸盒包装、塑料盒包装。6.5储藏方法
6.5.1包装材料
应选择防潮性、气密性和坚固性均优的包装材料。6.5.2包装袋内气体
采用抽真空或充氮等方法，延长保藏时间。6.5.3干燥放置
在密闭储藏容器内放入一些生石灰、硅胶、无水氯化钙等干燥除湿剂。6.5.4产品保存
选择低温、避光、干燥、卫生场所保存。6
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