【商检行业标准(SN)】 植物类病毒脱除处理规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2475—2010
植物类病毒脱除处理规程
Rules ofplantviroidselimination2010-01-10发布
数码份
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-07-16实施
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
植物类病毒脱除处理规程
SN/T2475—2010
中国标准出版社出版
北京复兴门外三里河北街16号
邮政编码：100045
网址www.spc.net.cn
电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印剧事
印张0.5
开本880×12301/16
字数8千字
2010年4月第一版
2010年4月第一次印刷
印数1-1600
书号：155066·2-20708
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院，本标准主要起草人：李桂芬、王仁睿、马洁、李明福、张永江、魏梅生。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。SN/T2475—2010
1范围
植物类病毒脱除处理规程
本标准规定了植物类病毒脱除处理方法。SN/T2475—2010
本标准适用于检验检疫行业、农业、林业对带有类病毒的植物繁殖材料的脱除处理。术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。2.1
类病毒脱除处理
viroidelimination
通过有效的方法，脱去植物带有的类病毒的过程。2.2
组织培养planttissueculture
在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体等繁殖材料，培养在人工培养基上，并在人工控制的环境中生长、分化、增殖至再生植株的过程。2.3
茎尖培养shootapicesculture
在无菌条件下剥取植物茎尖（顶端分生组织带1个～2个幼叶原基），在人工控制的条件下分化再生的方法。
低温处理lowtemperaturetherapy将植物或植物组织置于低温环境下（2℃～7℃），黑暗或光照条件下持续处理6个月以上来抑制类病毒增殖的方法。
无类病毒苗viroid-freeseedlings经过类病毒脱除处理过程和检测结果为阴性的再生种苗。3原理
3.1处理原则
针对检验检疫或生产中发现植物携带管制的类病毒，一般可进行销毁处理。如因植物珍贵或应客户需求，需针对管制的类病毒实施脱除处理。3.2植物类病毒脱除处理
针对植物类病毒在植物体内分布不均匀、低温能够抑制类病毒增殖的特性，设计在低温条件下对植物进行处理加上茎尖分生组织培养，以脱去植物类病毒。4仪器和用具
4.1仪器
4.1.1超净工作台。
4.1.2天平(0.001g)。
SN/T2475—2010
解剖镜。
光照培养箱。
高压灭菌锅。
pH计或pH试纸。
PCR仪。
分子杂交箱。
电泳槽。
4.2用具
4.2.1量筒。
4.2.2容量瓶。
4.2.3接种针。
镊子。
类病毒检测方法
生物学检测（指示植物法）。
5.2往返聚丙烯酰胺凝胶电泳retyrf-PAGE。5.3RT-PCR方法。
核酸杂交方法。
6类病毒脱除处理程序
植株的低温处理
将植株放在2℃～7℃条件下/在光照或黑暗条件下连续处理6个月以上。6.2材料剪取与灭菌
剪取经过低温处理的植株茎尖1此内容来自标准下载网
白来水冲洗30min，剥去外面的叶片。将茎尖置于超净工作台上，无菌条件下进行消毒：75%的乙醇浸泡10s，已灭菌的蒸馏水冲洗3次～5次；再用0.1%的升汞浸泡材料，滴人1滴～2滴吐温，消毒时间5min5min。将处理过的材料放人灭菌的培养皿中待用。6.3茎尖剥离与接种
h，用灭菌的蒸馏水冲洗3次～5次，每次将经过上一步处理过的茎尖放在解剖镜下，用已灭菌的解剖刀逐层剥去幼叶，直至出现顶端分生组织，将项端分生组织和毗邻的1个～2个幼叶原基切下，直立向上接种到适宜的固体培养基上。参见附录A。
6.4试管苗类病毒检测
用上述类病毒的检测方法检测试管苗，如果检测结果为阴性则初步定为脱类病毒试管苗，进行后期的扩繁和生根移裁，如果检测结果为阳性则不是脱类病毒试管苗，需要再进一步进行类病毒脱除处理。6.5试管苗的扩繁与生根培养
6.5.1试管苗的扩繁
检测结果为阴性的试管苗可接种到扩繁培养基上进行增殖。6.5.2生根培养
试管苗长至3cm～5cm时转至生根培养基进行培养。6.6试管苗的删化
将生长苗壮、有3片～5片叶的试管苗移至温室进行炼苗。2
6.7移栽
6.7.1过渡培养
SN/T 2475—2010
取出试管苗，洗净根部培养基，移人适宜的裁培基质中，刚移栽后的试管苗要避光，湿度：85%，温度：白天25℃～28℃，夜间15℃～18℃。避光保湿培养2d～3d后在正常的光照、温湿度条件下进行培养。
6.7.2移入土壤
过渡培养2周后，将生长苗壮的植株移人土壤。6.8移栽后植株的类病毒复检
移栽后的脱类病毒植株长到一定大小需要进行类病毒复检，若复检结果与第一次结果相同，均为阴性，则可认定为脱类病毒苗；若复检结果与第一次结果不同，为阳性，则该再生苗不是脱类病毒苗，需要进一步进行类病毒脱除处理。
6.9扩大繁殖
经过上述过程，进行两次类病毒检测的无类病毒植株作为健康母株，进行扩大繁殖，完成整个类病毒脱除处理过程。
SN/T2475-2010
植物种类
马铃薯
啤酒花
常见类病毒
马铃薯纺锤块茎类病毒
(Potato spindle tuber uiroid)附录A
(资料性附录）
常见植物的类病毒脱除方法
检测方法
①生物学检测（指示植物法)；
②往返聚丙烯酰胺凝胶电泳
return-PAGE;
?RT-PCR方法；
④核酸杂交方法
菊花矮化类病毒（Chrysanthe-
mum stunt tiroid)
菊花绿斑驳类病毒（Chrysan-
themum chlorotic mottle viroid)啤酒花潜隐类病毒（Hoplatent
viroid)
SN/T2475-2010
①生物学检测(指示植物法)；
②往返聚内烯酰胺凝胶电冰
return-PAGE;
③RT-PCR方法；
④核酸杂交方法
①生物学检测(指示植物法）；
②往返聚内烯酰胺截胶电泳
return-PAGE;
?RT-PCR方法；
①核酸杂交方法
类病毒脱除方法
低温处理结合茎尖培养：①马铃薯植株放在5℃条件下，每天给与16h，50001x的光照。处理时间为6个
月，剥取茎尖；②马铃薯块茎放在6℃～7℃、黑暗条件下，处理时间为6个月，剥取茎尖
低温处理结合基尖培养：马铃薯植株放在5℃条件下，每天给与16h，50001x的光照。处理时间为6个
月，剥取茎尖
低温处理结合茎尖培养；啤酒花植株放在2℃～4℃、黑暗条件下，处理时间为8个月以上，剥取茎尖
书号：155066·2-20708
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。