【商检行业标准(SN)】 植物病毒脱除处理规程

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2485—2010
植物病毒脱除处理规程
Rulesofplantviruselimination2010-03-02发布
数码防伪
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2010-09-16实施
本标准附录A为资料性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中国检验检疫科学研究院。SN/T2485—2010
本标准参与起草单位：中华人民共和国云南出入境检验检疫局，华中农业大学，天赐花卉公司。本标准主要起草人：李明福、王仁睿、黄新、王国平、丁元明、潘利军、马洁。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1范围
植物病毒脱除处理规程
本标准规定了植物脱毒处理程序方法。SN/T2485—2010
本标准适用于检验检疫行业、农林业对带有病毒的植物繁殖材料的无毒无害化处理。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准
病毒virus
病毒是肉眼不可见，依赖于寄主细胞复制其基因组核酸外包裹着外壳蛋白的一类专性寄生的特殊微生物。
病毒脱除处理viruseliminat
应用物理、化学、生物学等方法，祛除植物所感染的病毒，使之无毒无害化的过程。2.3
组织培养planttissueculture
在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体等繁殖材料，培养在人工培养基上，并在人工控制的环境下生长、分化、增殖至再生植株的过程。2.4
茎尖培养
shootapicesculi
在无菌条件下剥取植物茎尖（顶端分生组织带1生的方法。
热处理thermotherapy
2个幼叶原基），在人工控制的条件下分化再植物材料置于适当的隔离设施（如：恒温恒湿箱、日光温室)中，在不同的高温条件下，持续处理一定的时间（几周或数月），以钝化植物中的病毒或降低其浓度、2.6
化学处理chemotherapy
在植物培养基中添加一定浓度的化学物质，抑制或干扰植物组织中的病毒复制或繁殖。3原理
3.1处理原则
针对检验检疫或生产中发现植物携带管制的病毒时，一般可进行销毁处理。如因植物珍贵或应客户需求，需针对管制的病毒实施脱除处理。3.2病毒脱除处理
针对植物病毒在植物体内分布不均匀、植物病毒复制过程需要特殊酶或物质参与，植物病毒外壳蛋白受热钝化等特点，设计茎尖组织培养、化学治疗和物理治疗，以脱去病毒。SN/T24852010
4仪器和用具
4.1仪器
4.1.1超净工作台。
天平（0.001g）。
4.1.3解剖镜。
光照培养箱。
恒温恒湿箱。
4.1.6高温灭菌锅。
4.2用具
4.2.1量筒。
容量瓶。
接种针或解剖刀。
镀子。
4.2.5pH计或pH试纸。
病毒检测方法
生物学检测（指示植物法）。
酶联免疫法。
5.3RT-PCR方法。
核酸杂交方法。
植物病毒脱除处理程序
病毒脱除方法
6.1.1材料剪取与灭菌
在超净工作台上剪取植株茎尖1cm～2cm，自来水冲洗30min，剥去外面的叶片，将茎尖置于超净工作台上，无菌条件下进行消毒：75%的乙醇浸泡10s，已灭菌的蒸馏水冲洗3次～5次，0.1%的升汞浸泡，加人1滴～2滴吐温，消毒5min～15min，已灭菌的蒸馏水冲洗3次5次，每次2min～3min。6.1.2茎尖剥离与接种
把经过上一步消毒处理后的茎尖放在解剖镜下，用已灭菌的接种针或解剖刀逐层剥去幼叶，直至出现顶端分生组织，将项端分生组织和毗邻的1个～2个叶原基切下，直立向上接种到适宜的固体培养基上。
6.1.3热处理结合茎尖培养
将供试材料放入恒温恒湿箱（温度范围：30℃40℃），日夜变温处理几天至几月。热处理后的材料按照上述茎尖剥离与接种步骤进行培养，参见附录A。6.1.4化学治疗结合茎尖培养
筛选对病毒有抑制作用的化学药剂，如病毒唑、硫脲嘧啶等，浓度常为10mg/L～30mg/L，添加到培养基中，培养一月至几月，然后再按照上述茎尖剥离与接种步骤进行培养，参见附录A。6.2试管苗的病毒检测
用上述病毒的检测方法检测试管苗，如果检测结果为阴性则初步定为脱病毒试管苗，进行后期的扩繁和生根移栽，如果检测结果为阳性则不是脱病毒试管苗，需要进一步进行病毒脱除处理。2
6.3试管苗的扩繁与生根培养
6.3.1试管苗的扩繁
检测结果为阴性的试管苗可接种到扩繁培养基上进行增殖。6.3.2生根培养
试管苗长至3cm～5cm时转至生根培养基进行培养。6.4试管苗的别化
将生长苗壮、有3片～5片叶的试管苗移至温室进行炼苗。6.5移栽
6.5.1过渡培养
SN/T2485—2010
取出试管苗，洗净根部培养基，移入适宜的裁培基质中，刚移栽的试管苗要避光，湿度：85%，温度：白天25℃～28℃，夜间15℃18℃。避光保湿培养2d～3d后在正常的光照、温湿度条件下进行培养。
6.5.2移入土壤
过渡培养2周后，将生长苗壮的植株移人土壤。6.6移栽后植株的病毒复检
移裁后的脱病毒植株长到一定大小需要进行病毒复检，若复检结果与第一次结果相同，均为阴性，则可认定为脱病毒苗；若复检结果与第一次结果不同，为阳性，则再生苗不是脱毒苗，需要进一步进行病毒脱除处理。
6.7扩大繁殖
经过上述过程，进行两次病毒检测的无病毒植株作为健康母株，进行扩大繁殖，完成整个病毒脱除处理过程。
SN/T2485—2010
病毒名
百合潜隐病毒LSV
黄瓜花叶病毒CMV
郁金香碎花病毒TBV
异名百合斑驳病毒LMoV
百合丛簇病毒LRV
菊花B病毒CVB
番茄不孕病毒TAV
菊花花叶病毒ChMV
马铃薯Y病毒PVY
马铃薯X病毒PVX
烟草花叶病毒TMV
黄瓜花叶病毒CMV
建兰花叶病毒CyMV
齿兰环斑病毒ORSV
马铃薯X病毒PVX
马铃薯Y病毒PVY
马铃薯A病毒PVA
马铃薯M病毒PVM
马铃薯S病毒PVS
马铃薯卷叶病毒PLRV
马铃薯顶病毒PMTV
蕈果裙绿叶斑病毒ACLSV
草果茎沟病毒ASGV
苹果茎痘病毒ASPV
苹果花叶病毒ApMV
苹果锈果类病毒ASSVd
附录A
（资料性附录）
常见病毒脱毒方法
马铃募
常见病毒脱毒方法
脱毒方法
热处理结合茎尖培养：热处理：40处理5d后剥取茎尖，茎尖带1个~2个叶原基，即0.2mm~0.5mm尽量少带邻近组织（1)热处理结合茎尖培养：盆裁苗在白天40℃、夜间30℃条件下处理10.d～20d。再进行剥取茎尖，茎尖带1个~2个叶原基。（2）化学药剂结合茎尖培养：在培养基上添加8-氮鸟嘌岭、硫脲嘧啶、病毒唑，浓度范围为_10_mg/L~20mg/L，培养4周后剥取茎尖化学药剂结合茎尖培养原球茎颠端分生组织先在病毒唑中浸泡/15min，然后转接到添加病毒唑的培养基上，浓度范圈为20mg/L~30mg/L，暗培养4周，转到不含病毒嚏的培养基中进行原球茎增殖（1）热处理绩合茎尖据养：将块茎放在25℃条件下发芽，当芽长到0.5cm~lcm后放置在光照培养箱内，进行热处理，白天36C、16h，晚上30℃、8h，处理时间为3周～4周，剥取茎尖。（2）化学药剂结合茎基尖培养：在培养基上黍加8-氮鸟票呤、硫原嘧啶、病毒唑，浓度范围为10mg/L～20mg/L，培养4周后剥取基尖（1）热处理结合基尖培养：a)盆栽苗热处理：在白天温度20℃～23℃，夜间13培养，待接穗发芽长出3片～5片叶时移人热处理箱内，首先在25℃～30℃下处理14d，然后将温度调至37℃±1℃，恒温处理28d,处理后剩取茎尖；b)组培苗热处理：37℃，培养30d;置32℃恒温培养箱培养1周，然后升温至37C热处理20d～50d后剥取茎尖；（2）化学药剂结合茎尖培养；培养基中分别添加板蓝根和病毒唑，浓度范围为10mg/L~40mg/L，培养6周后剥取茎尖病毒名Www.bzxZ.net
葡萄扇叶病毒GFLV
葡葡卷叶相关病毒GLRaVs
葡葡病毒A病毒GVA
葡萄病毒B病毒GVB
番茄环斑病毒ToRSV
李属坏死环斑病毒PNRSV
李矮缩病毒PDV
苹果视绿叶斑病毒ACLSV
樱桃卷叶病毒CLRV
樱桃小果病毒LChV
樱桃A病毒CVA
表A.1（续）
脱毒方法
SN/T24852010
（1）热处理结合茎尖培养：a）盆栽苗热处理：置于25℃～28℃下促其抽枝快长，待新梢长出2片～3片叶后，室温升至37℃～40℃，经30d~35d后，切取新梢顶端0.5mm~1.0mm;b)组培苗热处理：先预热处理（32℃)7d，蛋38℃夜22℃处理20d～30d，后剥取茎尖。（2）化学药剂结合茎尖培养：在培养基上添加8-氮乌嘌呤、硫脲嘧啶、病毒唑，浓度范围为10mg/L~20mg/L，培养4周后剥取茎尖(1)-热处理结合茎尖培养-通带是采用38℃作为处理温度，在37℃~38℃下处理2周～4周后剥取举尖。（2）化学药剂结合茎尖培养；在搭养基上分别添加2，4-二氧六氨三氮杂苯(DHT)和病毒唑，浓度范国为10mg/L30mg/L，培养四周后剥取茎尖
SN/T2485-2010
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
植物病毒脱除处理规程
SN/T2485—2010
中国标准出版社出版
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电话：6852394668517548
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印剧开本880×12301/16
2010年5月第一版
印张0.75
字数9千字
2010年5月第一次印剧
印数1—1600
书号：155066·2-20811
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