【国家标准(GB)】 牛冷冻精液

ICS 65. 020. 30
中华人民共和国国家标准
GB 4143--2008
代替GB/T 1113—198
牛冷冻精液
Frozen bovine semen
2008-06-27发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-01-01实施
规范性引用文件
术语和定义
种公牛
新鲜精液
冻精外观
剂型、剂量
每剂量冻精解冻店
精子活力
前进运动精了数
精子畸形率
4.5.4细菌数
5.1抽样检验方案
生产力轴祥检验
质量监督抽样检验
复检和仲裁抽样检验
抽样方法
6试验力法
解冻后每剂鼠精液
6.4检验分类
常规检验
型式检验
6. 5 检验项目
6.5. 1 常规检验
型式检验
?判定规则
常规现检验
型式捡验
7.3样检验对群休质量水乎的评定7.3.14产为拥群检验
7.3.2质罩监暨抽样检验
8标志、包装
8.1标志
GB 4143—2008
GB 4143—2008
8. 1.1昂种
8.2包装
附录A（规范性刚录）群休公4-冻精质量蓝督抽样检验程序A.1导言
A.2质量监肾抽样检验程序
确定监督总体.
确定冻精产品的质量特性
不合格品的分炎
规定监督质量水平
规定监臀检验等级·
检索监督抽样方案
抽取样本
检验样本
判断监督总休该群体公牛(冻精)是否可通过A. 2. 9
应用实候
蓝督拍择方案的通过概率与检验功效附录 B(规范性附录)
牛冷冻精液质量检验方法
样品的收集
捆样方案
B. 1. 2. 7
B. 1. 2. 2
R. 1. 2. 3
生产方灿样检验
质量监督抽样检验下载标准就来标准下载网
抽挣方法
B.1.2.4全部取样
B.1.3瑕样方法
B.1.4样品的保存
B.2剂量检脊
主要器材
检查方法
B.2.3计算
B.3精子活力检查
B.3.1主要器材
B.3.2检查方法
R.3.3计算
B.4每剂量前进运动精子数检查
主要器材
IB.4.2格查方法
精了崎形率的检查
主要器材
试剂配制
制片.染色、镜检、计算
B.6细菌数的检查
R. 6.1 主要器材
B.6.2培养基的配制
B. 6. 3 检查力法
B,6.1计算
附录C（规范性附录）种公牛的品种代号c.1　导言　
.2原则和方法
C.3种公牛品孙代号
CB 4143—2008
本标准中第 4章是强制性的,其余为推荐性。本标准与GB/T4113—1984相比主要变化如下：增加了适用对象（1984年版的引言；本版的第1.章第2段）；增加了规范性引用文件(见第2章)；增加了术语和定义，并有中、英文对照(见第3章)；增加了抽样（见第5章）！
增了试验方法（第6帝）；
增加了判定规则（见第7章)，
修改了规格与质量（1984年的第1章;本版的第4章）；修改了检查方法(1984 年版的第 3章;本版的附录 B);修改了种公牛品种代号(1981年版的5.2.2;本版的附录C);删除了牛冷冻液的制作程序利使用方法（1984年版的第2章和第4章）：GB 4143—2008
霜加广规范性能录群体公生冻精质量蓝替批样检验程序”（见5.1.2和附录A）；增加引用了GB/T15239—19946孤立批计数抽样检验程序及抽样表》,对于其中Ac——合格
—不合判定数的表述，现引用.GB/12828.1一2003≤计数抽样检验程序第1判定数,R
部分：按接孜质量限(AQL)检索的逐批检验样计划》中的表述，A一接收数,Re—拒收数d——样本的不个格数（见5.1.1和7.3.1)。本标推的附录 A,附录B 和附录 C均为规范性附录。本标雅由中华人民共和国农业部提出。本标准山全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标滩起节单位：农业牛冷冻精液质量监督检验测武中心(南京)、全国畜救医总站、农业部牛冻精液质监督检验测试中心（北京）本标证主要超章人：金穗华、徐芳、陆汉希张晓俊、刘长春、黄文佳、刘佳做。本标准托农业部牛冷冻精液质量监督检验测试中心(南京）负贡解释，1范围
牛冷冻精液
GB 41432008
本标推规定了牛冷冻精液的命名、技术要求，摘样、试验方法、判定规则和标志及包装。本标推适用于各品种牛的冷冻精液产品以简秘冻精2规范性引用文件
下列文件中的条款通过森标难的而成为本标准的察款的修收单（不包括期误的扇察
是否可使用这些文件的
GB/T 2828. 1-
计划(ISO 2859-1
GR/F 4789.
GB/T 5458
GB/T 1523
GB/T 1548
术语和定义
下列术语和
凡是日期的引用文件，其随后所有订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据睦标准达成协议的各方研究凡是不注日期的引用文件，具最新撬本适于本标准。群数抽
孤文指
产品质
龍用于本标
前进运动精智
progressi
存剂量精液
精子活力
在37℃环境下最望
进运动的
检验程学及批：
精我密急精子数的
精子畸形率：
abnormal
俯形精了总了数的鼠
细菌数 haieria cirunl
.percentage
每剂量精液经培养后观察到的细菌菌落数3.5
冷冻精液frozc cmcn
质量限（AQ）检索的逐批检验抽评序及抽样
经特殊方法处理的精液超低温冷冻后在邀氮中（·196℃)长期保存。4要求
4.1种公牛
应具有种用价值，外貌评价为特等或一等·体质健康，无遗传病.不允许有已发相的动物防疫法中所明确的二类疫病中的征何一种病。GB 4143--2008
4.2新鲜精液
色泽乳自色或淡黄色。精子活力65%，精子密度5×10°个/ml.精子嚼形率≤15%4.3冻精外观
细管尤裂痕,两端封口严密。
4.4剂型、剂量
细管冻精：微型0.18ml中20.40mL。4.5每剂量冻精解冻后
4. 5. 1 稍子活力
35%（即20.35），水牛230（即20,30)。4.5.2前进运动精子数
2800万个，水牛21000万个，
4.5.3精子畸形率
18%，水牛20%
4.5.4细菌数
800个。
5抽样
5.1抽样检验方案
5.1.1生产方抽样检验
生产方和使用方为质量保证概率把关，按照GB/T15239--1994中的第5章：采用LQ=8.0、模式A抽样方案检紫·次抽样方案，确定抽样公牛样本量。5.1.2质量监警抽样检验
质量监抽样检验按照GB/154821995中的第5章，该群体公牛为一监督总体，采用D。=10，选用第二检验等级的批样方案，确定抽检公牛的样本量，捆样检验程序见附录A。5.1.3复检和仲裁抽样检验
复检可根据原抽样方案确定，仲裁需抽检按照5.1.2规定的方案和7.3.2评定。5.2抽样方法
摘样法见.1.2.3和B.1.3。
6试验方法
6.1外观
用日测法，其结果应符合4.3的规定。6.2.剂量
检验按第B.2章的方法，其结果应符合4.4的规定。6.3解冻后每剂量精液
解陈方法及精了活力、前进运动精子数、精了畸形率、细菌数的检验按照第B.3章~第B.6章舰定的方法其结果应分别符合4.5.1、4.5.2.4.3.3.1.5.4的规定。6.4检验分类
6.4.1常规检验
对冻精的单项日检验悬型式捡验的部分，主要是在生产批人库前和销出站时的检验。6.4.2型式检验
对冻精全部项日检验，评定产品质量是否全面符合标准，也是在生方抽样检验，仆裁和质量监督抽样检验时选定项的检验。
6.5检验项目
6.5.1常规检验
本标准小1.3和4,5.1规定
6.5.2型式检验
本标难中 4. 3~4. 5 规定。
7判定规则
7.1常规检验
样品中任何一国检验术达到木标推中要求的规定，则判为不会格。7.2型式检验
样品中任何….项国检验木这到本标准中要求的规定，则判为不合格7.3抽样检验对群体质量水平的评定7.3.1生产方抽样检验
引用 GB/T 2828. 1-2003第 3 章中 Ac—一接收数R
拒收数，一
GB 4143--2008
不合格品数
生产方描样检验按照 GB/T 15239—1994 中 .11 的规定,通过对样本检验,若样本中不合格品数d≤Ac,则判可接收，样本中不合格品数dRc;则判不可接收。7.3.2质量监替抽样检验
接照GB/T15482—1995的规定，在样本中不通过判定数），则判为可通过，dr，则判为不可通过。群体公牛冻精质量监督抽样检验程序见附录A，8标志、包装
8.1标志
8. 1. 1品种
公牛的晶以代号表示：具体遵照谢录C的规定8.1.2内容
细管冻精应在管壁(或包装袋)上印制以下内容，并Ⅱ印制标识要清楚(a）牛产站名；
公牛品种；
公牛号：
d）生产日期或批次。
8.2包装
料管或灭菌纱布袋，每一包装量不得超过100 份GH 4143-2008
A.1导言
附景A
（规范性附最：
群体公牛冻精质叠监督插样检验程序本附录给出牛冷冻精液质量监督抽样检验程序。刘此特定对象产品，在质量监督时通过抽样检验是对在群公牛陈精质单评价。
A.2质量监督抽样检验程序
A.2.1确定监替总体
所确定的蓝督总体凝
的冻精为每一单位产
牛，监料总体中的产品是该群休中公《漆精），每头公牛一个生产批A.2.2确定冻精产品的质盒特性
冻精产品的质景符
A.2.3不台格品牌
按照标润规寇对衍精不合格占
A.2.4规定监质量脉平
按照5.1.2折督质量水
A,2.5规定监量腰等级
监督检验等，检验的功
A.2.6检素监量撑方案
在 (GR/T 15482-
1995表2
读山监督肾抽样方幕毅交处为箭之间时,使用其要
A.2.7抽取样本
根搬公牛样本鼠
A.2.8检验样本
者确定拒
方向，读
蓝督质鼠水部D所在行的相交处
方案。当藍督暴体量介于某两数按照4.4-·4.5中的
频具和附录B规定的检验方法及样品合格与到别准则，逐一检验样本中的衔一个样品，并统计龄辩态的不合格品数。浑（冻精是否可通过
4.2.9判断监督总体该群体公
根据监督质量水平和监督检整等级确定监督插释方案后.按（G7T15282--1995中5.9的规定检验样木结果在样本中不合格品数d不承不通过判定数姆r，则判该监督总休为不可通过，样术中不合格品数t小于不通过测定数，即α,购剂该蓝督总体为可通过，A.2. 10 应用实例
质量监督拥样检验评价有群50头公牛（冻猎）产品，用监质量水平110、第二监督检验等级的掘样方案，在装2中N=30的列和L,=5的行查衍所需抽样方案为n=42。从监督总体（该群公牛）中随机抽取1头公牛（冻精）样品检验，若其中不含格公牛（冻精）的数小于2，即心7，则判该样体公牛（冻精)可通过：若其中不合格公牛（陈精)的数不小于2.即r,则判该群体公牛（冻精)不通过。A.2.11监替抽样方案的通过概率与检验功效对监督拥样力案的通过概率与检验功效接照（B/T15482—1995中的第6章执行。附录B
（规范性附录）
牛冷冻精液质量检验方法
本附录给出了通用的牛冷冻精液质量检验力法。B.1抽样
B.1.1样品的收集
抽样：从变检单位精羧照存
按规定随机抽取样品。
送样：生产、使用单位将撼最的样品递至检验机构。B.1.2 抽样方案
B.1.2.1生产方抽样检验
按本标准 5.1.12
B.1.2.2质量监督轴样修验
样木数
按本标准5.1
B.1.2.3抽样方
按牛号顺序靠列
扯样人点
B.1.2.4全部联
对已授产的
B.1.3取样方
对确定取样舞公
B.1.4样品的优存
牛敢样。
从其深精
存放冷冻精快養温奔器质
样品浸在液氮中。
抽样登记单与样品
剂晕检查
B.2.1主要器材
小试管、剪刀。
B.2.2检查方法
样品时在
样品包
头数随机确
B/5458
GR 4143—2008
不得少丁2份）間冻精。
使用前经遗清漆后加入新鲜液氮，人保管样器，样鼎不允许脱离液氮，取三支细管冻精自然解冻底去两端：把精液倒火小试管内1.0ml，吸管准确吸取精液，并检测其精液量，
B, 2. 3 计算
三支冻精的剂盘卡均数为样品的剂量，按式(B.1)计算：Q= \i +n +n
武中：
一剂量值.单位为毫升(InL)；
-第一样品剂量，单位为毫Ⅱ（mL)：
ns一一第二支样品剂量,单位为毫升(mL)：第三支样品剂量：单位为毫升(mL）。B.1)
GB 4143—2008
B.3精子活力检查
B. 3. 1 主要器材
显微镜或电视显微装置、恒温永浴箱、5.0ml.或管、载破片或精滋性状板、盖玻片（18×18）、显微镜保温箱或恒温装置、滴管。
B.3.2检查方法
三支细管分别直接置丁3？℃水浴中解冻，收解冻三支混合后精液50L置于较玻.1加盖玻片，立即在裁物台温度保持38℃的情况下用200倍~400低显微镜观察活力，也可通过电视显微装置在荧光屏上观察活力：每样片观察3个视野，并应观察不同液层内的精子运动状态，进行全面郎定，B. 3. 3 计算
三个视野活方评价值的平均数按式(B.2)计算：M=n+ne+ne
式中：
活力；
第视野活力；
nz—第二.视野活力：
第三视野活力。
B.4每剂量前进运动精子数检查
B, 4. 1 主要器材
血球计数板、血色素管，1nL吸管、小试管、计数器，录微镜戒电视显微装置、滴管、3.0%氯化钠滋。
检替方法
细管精液用血色素管准确吸取20rI.邂冻精液（也可使用第B.2章已检查后的样品）.注人微有0.98m1.的3.0必創化钠溶液的试管内，混匀，使之放为50倍稀释的稀释精液。将备好的血球计数板用血盖片将计数室盖好，用小吸管吸取滴稀释精液于血盖片边缘，使精液白行流人计数室，均勾充满，不允许有气泡或厚度过人，然后在显微镜下或电视荧光屏上观察计数。B. 4. 3计算
a）每剂量中精了数=5个巾方格中的精子数×5（即计激室25个中方格的总精-了数）×10（1mm内的精子数）×1000（每毫升精被的精子数）×50（细普稀释倍数）×剂虽销上或可简化为：
每剂量中精了数=：个中方格精子效×250万（细管）×剂量值每样品观察上下两个计数室，坡平均值，如两个计数室计数结果误差超过5次，则应重检：h
每剂量中罩前进运动精子数按式(B3)计算：C- 5X 32
式中：
每剂显中前进运动精了数，单位为个：5—每剂量小精子数,单位为个;
m——活力,%。
B.5精子畸形率的检查
B.5.1主要器材
.(B.3)
显微镜.藏玻片、血球分类计数器、小吸管、蒸馏水、姬姆萨染料、磷酸、氯钠、磷酸氢二钠、甲醛、巾6
醇、H油，所用试剂为分析纯。
B.5.2试剂配制
a）磷酸盐缓冲液
磷二氢钠(NaH,PO.·2H,0)
磷酸氢钠(Na,HPO.·12IH,0)
双蒸馏水定容至100mniL：
b）中性福尔马林固定液
40%甲醛HCH(O(使用前经碳酸镁中和过源）磷酸二氢钠(NaH,PO.-2H,O)
磷酸氢二钠(NzHPO12H,0)
GB 4143—2008
用 0.89必氯化钠药 50.0 mL浴辉后加人 8. 0 mL 中和眉的甲醛,再加 0.89%氯化溶液定容至100,0 nl.
c）姬姆萨原液
姬姆萨染料
甘洲 『C,H,(OH),
甲醇(CH,OH)
66: 0 mL
姬姆萨染料放人研钵中加少量甘油充分研磨至无颗粒为正，然后将甘油全部例人并放入恒溫箱巾保温继续溶解1h，再加中醇充分溶解混匀：过滤后贮于棕色瓶中待用，些存时间越久染色效果越好。(）姬姆萨染液
姬姆萨原液
磷酸盐缓汁液
蒸馏水
现配现用，
B.5.3制片、染色、镜检、计算
精锨解冻见B.3，允许同时使用猜子活力检查解冻的样品）抹片：取解冻后精液一滴滴于载玻片一跳，用一边缘光滑的载玻片与有样品的载玻片足35°夹角：将样品闯匀地拖布]载玻片上，白然风干（约5 min）,每样品制作两个抹片。b)
固定:在已风干的抹片上滴上 1. 0 mL~2. 0 mL 中性福尔马林固定液，固定 15 min后用清水缓缓冲去固定液，吹十或自然风十。染色：将固定好后的抹片反打在带有平槽的有机玻璃面上，把姬姆萨染液滴于槽和抹片之间，让其充满乎槽并使抹片接触染液，染色1.5h后用清小經缓冲去染液,晾下待检。d）镜捡：将制备好的抹片在显微镜（400俯～500倍)下观察，每个抹片观繁200个以上的精了(分左、右两个区),取两片的平均值,两片的变异系数不得大于20,若超过成重新創片精了畸形率按式(I3.1)计算;
式中：
粘子畸形率，%；
A,--—畸爬精子数,单位为个;
一精子总数,单位为个，
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