【国家标准(GB)】 茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法

ICS 67.140. 10
中华人民共和国国家标准
GB/T8313—2008
代替GB/T8313—2002
茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法
Delermination of total polyphenols and catechins content in tea(1SO14502-1/2:2005,Determination of substances characteristicofgreen and black teaPart l: Content of total polyphenols in teaColorimetric method using Folin-Ciocaltcu rcagcnt/Part 2:Content of catcchins in green teaMethod using high performanceliquidchromatography,MOD)
2008-05-04发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
数码防伪
2008-10-01实施
GB/T8313—2008
本标准修改采用ISO145021：2005<福林酚（Folin-Ciacalteu）试剂比色法测定茶叶中茶多酚总量》和IS014502-2：2005《高效液相色谱法测定绿茶中儿茶素》。本标准与ISO14502-1：2005和ISO14502-2：2005的技术内容相同，主要差异为：供试液制备时用玻璃棒充分搅拌均匀湿润代替用混匀器搅拌均匀湿润，增加实用性；标准结构上稍有调整，即将两项标准合并为一项，将IS014502-2：2005作为本标准的方法一，将ISO14502-1：2005作为本标准的方法二。本标准是对GB/T83132002《茶茶多酚测定》的修订。本标准与GB/T83132002的主要差异为：以7o%甲醇提取茶叶中的茶多酚、Folin-CiocalteuPhenol试剂显色、没食子酸（GA）作标准工作曲线定量茶多酚总量。
本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。本标准主要起草人：周卫龙、徐建峰、许凌。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T83131987,GB/T83132002
1范围
茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法
GB/T8313—2008
本标准规定了用高效液相色谱法（HPLC）测定茶叶中儿茶素类含量和用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量的方法。
本标准适用于茶及茶制品中儿茶素类及茶多酚含量的定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T8302茶取样
GB/T8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定方法一茶叶中儿茶素类的检测——IIPLC法3原理
茶叶磨碎试样中的儿茶素类用70%的甲醇溶液在70℃水浴上提取，儿茶索类的测定用Cs柱、检测波长278nm、梯度洗脱、HPLC分析，用儿茶素类标准物质外标法直接定量，也可用儿茶素类与咖啡碱的相对校正因子RRFs（ISO国际环试结果）（见7.2）来定量。4仪器
分析天平：感量0.0001g。
4.2水浴：70℃±1℃
4.3离心机：转速3500/min，
4.4混勾器。
4.5高效液相色谱仪（HPLC)：包含梯度洗脱及检测器（检测波长278nm）4.6数据处理系统。www.bzxz.net
液相色谱柱：Cg（粒径5μm250mmX1.6mm）。5试剂
本标准所用水均为重蒸馏水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。5.1乙腈：色谱纯。
5.2甲醇。
5.3乙酸。
5.4甲醇水溶液（体积比）：7+十3乙二胺四乙酸（EDTA）溶液：10mg/mL（现配）5.5
6抗坏血酸溶液：1Cmg/mL（现配）。5.6
GB/TB313—2008
5.7稳定溶液：分别将25mLEDTA溶液（5.5），25mL抗坏血酸溶液（5.6）.50mL乙腈（5.1）加人500HL容量瓶中，用水定容全刻度，摇匀5.8液相色谱流动相
5.8.1流动相A：分别将90mL乙睛（5.1）、20mL乙酸（5.3）.2mLEDTA（5.5）加人1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，溶液需过0.45uμm膜。5.8.2流动相B：分别将800mL乙睛（5.1）20mL乙酸（5.3）2mLEDTA（5.5）加人1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液需过0.45um膜。5.9标准储备溶液
5.9.1咖啡碱储备济液：2.00mg/mL5.9.2没食子酸（GA)储备溶液，0.100mg/ml5.9.3儿茶素类储备溶液：+C1.00mg/mL，+EC1.00mg/mL，+ECC2.00mg/mL，+EGCG2.00mg/ml.,+ECG2.00ng%ml
5.10标准工作溶液：用稳定落液（5.7)配制。标准工作溶液的浓度：食子酸5pg/mL～25g/ml，哦啡碱50ug/ml~150μg/mL、+C50μg/mL~150ug/ml+EC50μg/mL--150μg/mL+EGC100μg/ml100μg/mL~400μgML/ECG50μg/mL200mz/mL.6操作方法
6.1取样
按GB/T8302的规定
6.2试样制备
按GB/T830B
6.3测定步骤
的规定
6.3.1干物质含量测定
按GB/T8303规定。
6.3.2供试液的制备
300ng/mL1EGCG
2（精确到0.0001g）均匀磨碎的试样（6.2）于10mL离心管中，加人在70℃6.3.2.1母液：称取
中预热过的70%甲醇落液4)5mL，用玻璃棒充分搅排均匀湿润，立即移人70℃水浴中，浸提10min（隔5min搅拌一次），度提后却至室温，转人离心机在3500r/min转速不离心omin，将上清液转移至10mL容量瓶，残渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10mL，摇匀，过0.45μm膜待用(该提取液在4℃下可至多保存24h）。6.3.2.2测试液：用移液管移取母液（6.3.2.1)2mL至10mL容量瓶中.用稳定溶液（5.7)定容至刻度，摇勾，过0.45um膜，待测。6.3.3色谱条件
流动相流速：1mL/min。
柱温：35℃。
紫外检测器：=278nm，
梯度条件：
100%A相保持10min
15min内由100%A相--68%A相32%B相+
68%A相、32%B相保持10min
100%A相
6.3.4测定
GB/T8313—2008
待流速和柱温稳定后，进行空白运行。准确吸取10L混合标准系列工作液注射人HP1.C。在相同的色谱条件下注射10μL测试液。测试液以峰面积定量。7结果计算
7.1计算方法
7.1.1以儿茶素类标准物质定量，按式（1)计算：AxfmxVxd×100
儿茶素含量（%）=
式中：
所测样品中被测成分的峰南积；mrX10Xm
所测成分的校正因（依度/峰面积，浓度单位*g/mL”）样品提取液的体积，单位为毫升（mL）：稀释因了（通常为2mL稀释成10mL，则其稀释因子为5)；样品称取量单位为克（g)，
样品的一物质含量，%
以咖啡碱标准物质定量，按式（2）计算S
式中：
儿茶素含量（%）=
AXRRFsdXVXd
ScrXmX10Xm
麟测成分相对于咖啡碱的校正因了Soat
睡啡碱标准曲线的斜率（降面积/浓度，浓度单位“/mL”)7.2儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表见表1。
RRFstd
表！儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表GA
7.3儿茶素类总量计算公
见式（3)。
儿茶素类总量（%）
7.4重复性
EGC含量+C含量+EC含量+EGCG含量+ECG含量3）同一样品儿茶素类总量的两次测定值相对误差应10%，若测定值相对误差在此范围，则取两次测得值的算术平均值为结果，保留小数点后两位。方法二
8原理
茶叶中茶多酚的检测
茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂氧化茶多酚中OH基团并显蓝色，最大吸收波长入为765nm，用没食子酸作校正标准定量茶多酚。9仪器
9.1分析天平：感量0.0C1g。
9.2水浴：70℃±1℃
GB/T8313—2008
9.3离心机：转速3500r/min
9.4分光光度计。
10试剂
本标准所用水均为重蒸馅水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。10.1乙腊：色谱纯，
10.2甲醇。
10.3碳酸钠(NazCO)。
10.4甲醇水溶液（体积比）：7+3。10.5福林（Folin-Ciocalteu试剂10.610%福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂（现配）：将20mL福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂（10.5)转移到209mL容量瓶中，用水定容并摇勾。10.77.5%Va.CO,（质量浓度）：称取37.50g土0.01gNa.C0，（10.3）加适量水溶解，转移至500mL容量瓶中，定容至刻度，摇（室温下可保存1个月）。10.8没食子酸标准储备溶液(1000g/mL）：称取0.110g土0.001名没食子酸（GA，相对分子质量188.14），于100mL容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀（现配）。10.9没食子酸工作液：用移液管分别移取1.0,2.0.3.0.4.0,5.0mL的没食子酸标准储备溶液（10.8）于100mL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇勾，浓度分别为10,2030，40，50g/mL11操作方法
11.1供试液的制备
11.1.1母液：按6.3.2.1制备。
11.1.2测试液：移取母液（11.1.1)1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。11.2测定
11.2.1用移液管分别移取没食子酸工作液（10.9）、水（作空白对照用）及测试液（11.1.2)各1.0mL于刻度试管内，在每个试管内分别加人5.0mL的福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂（10.6），摇勾。反应3min~8min内，加人4.0mL7.5%NaCO.溶液（10.7）.加水定容至刻度、摇匀。室温下放置50min。用10mm比色、在765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度（A）。11.2.2根据没食子酸工作液（10.9)的吸光度（A)与各工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线12结果计算
12.1比较试样和标准工作液的吸光度，按式（4)计算：式中
茶多酚含量（%）=SLOPEm×m×10×mlAXVXa
样品测试液吸光度，
样品提取液体积，10mL；
稀释因子（通常为1mL稀释成100mL，则H稀释因子为100）：SLOPEsd
没食子酸标准曲线的斜率；
样品干物质含量，%：
样品质量，单位为克（g）。
12.2重复性
同一样品的两次测定值，每100多试样不得超过0.5多，茗测定值相对误差在此范围，则取两次测定4
值的算术平均值为结果，保留小数点后一位。13
注意事项
GB/T8313—2008
样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于50g/mL浓度的没食了酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配制高浓度没食了酸标准工作液进行校准。5
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