【水产行业标准(SC)】 对虾肝胰腺细小病毒诊断规程 第3部分:新鲜组织的T-E染色法

1CS 65.020.30
中华人民共和国水产行业标准
SC/T 7203.3-2007
对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第3部分：新鲜组织的T-E染色法Diagnostic Protocols for Hepatopancreatic Parvovirus Diseaseof Penaeid Shrimp-
Part 3: T-E Staining Method With Fresh Tissue2007-06-14 发布
2007-09-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7203《对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程分为三个部分：一第1部分：PCR检测法；
-第2部分：组织病理学诊断法；-第3部分：新鲜组的T-E染色法
本部分为SC/T7203的第3部分。
本部分的附录A为规范性附录。
本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。SC/T 7203.3—2007
本部分出全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。沐部分主要起草人：黄健、杨冰、陈爱平、宋晓玲、史成铋、杨丛海、魏琦。1范围
对虾肝胰腺细小病囊病诊断规程第3部分：新鲜组织的T-E染色法SC/T 7203.3—2007
SC/T7203的本部分规定了诊断对虾肝胰腺纫小病毒病新鲜织织的T-E染色法的原埋、试剂与材料、仪器设备操作步骤和结果判定，本部分适用于在现场或实验室对感架对虾肝胰腺细小病毒（HepatopancreallicParvrvinus，HiPV)的对虾个体进行快速诊断。不适于对病毒的非感染性携带的标本进行诊断以及对宿主进行组织病理学评价
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过术标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据不标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。汛是不注口期的引用文件，其最新版本适用于木标谁，SC/T7202.1--2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法SC/T7203.2—2007对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第2部分：组织病理学诊断法3原理
3.1对虾肝胰腺细小病毒病的病原和病理学特征见SC/T7203.2—2007（对虾肝胰腺细小病毒病诊断规程第2部分：组织病理学诊断法）中3.1的规定。
3.2技术原理
台盼蓝含有…个弱碱性基团和一个强酸性团，其弱碱性基团可与核酸相结合，血强酸性基团的存在，使台盼蓝与弱酸性染料伊红互泥而不发生沉淀。因此，台份蓝与伊红的混合液既能一次性池使新鲜纽织的细胞核染上蓝色，又能将细胞质染上红色。4试剂和材料
4.1除非另有说明，在分析中仪使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水。4.2T-E染色液按附录A的规定执行。5仪器设备
5.1解剖刀。
5.2尖头馒子。
5.3医用剪刀，
5.4载玻片。
5.5盖皱片。
5.6光学显微镜：带高悟镜(40×）和油镜（100×）。5.7吸水纸，
SC/T7203.3—2007
5.8滴管。
检测步骤
6.1采样
样品采集要求见SC/T72U2.1--2007（斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法)附录B。
6.2样品处理
对虾糖虾幼体取3尾5尾活体，在载玻片上用解剖刀整体切碎；仔虾及休长小于3cm的幼师，取其头胸部，在载玻片上用解刀切碎；对虾体长大于3I时，揭开其头胸甲，以尖头镊子取出一小块肝胰腺纽织，在载玻片上撕碎涂探，稍惊干。6.3染色
在组织浆.上滴加2滴T-F架色液，混匀，常温放置染色3min~5min6.4制片观察www.bzxz.net
益上盖片，再覆上数层吸水纸，轻压以吸去多余染，除去吸水纸，在高倍镜或油镜下观察。7结果判定
7.1正常的对虾肝腰腺细胞经TE染色，可观察到肝胰腺细胞呈球形，形态较大，细胞质较肥人，为红色；细胞核较圆，为蓝到紫色；核内着色均匀，可见染色质和核仁：卵胞质品破碎，有些只可见到监色的裸露细胞核
7.2感染HPV的对虾肝胰腺细胞核内，包休多呈圆形或卵圆形，数日多为1个;包涵体着色较深,边滑界线清晰，与核膜或沿化的染色质之间有一空白区间，内部呈均一效密的蓝紫色到紫红色。7.3结果可疑时，补充组纠病理学诊断汰或PCR检测法进行结果确认，2
T-E染色液
台盼蓝
伊红Y(水溶性)
室温贮存。
【规范性附录】
试剂配方
SC/T 7203.3—2007
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