【国家标准(GB)】 姜及其油树脂 主要刺激成分测定 HPLC法

ICS 67. 220. 10
KAONrKAca-
qLE-ei-ac-ec-ae-Ceraac-CEC-Neca-iiikAoNrKAa中华人民共和国国家标准
GB/T 22293—2008/ISO 13685:1997姜及其油树脂
主要刺激成分测定
HPLC 法
Ginger and its oleoresins-Determination of the main pungentcomponents-Melhod using high-performance liquid chromalography[IS0 13685:1997,Ginger and its olcoresinsDetermination of the main pungent components(gingerols and shogaols)---Method using high-perforrnance liquid chromatography, ID2008-08-12发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
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2009-03-01实施
TKAONiKAca=
quE-ei-aC-eC-ae-Ceraac-CEC-Neca-iKAoNrKApaGB/T22293-2008/ISO 13685:1997本标雅等同果用ISO13685：1997《姜及其油树脂HPLC
主婴刺激性成分（姜醇莉美）测定法》（英文版）。本标雅等同翻译ISO13685：1997。为便于使用，本标准做了下列编辑性修改：）“本国际标准”-词改为本标准；b）用小数点“，”代替作为小数点的这号\”：c）将ISO13685中的部分脚注和警示语融人本标准条文中。本标准的附录 A、附录 B,附录 C、附录 D、附录E均为资料性附录。本标准由中华全国供销合作总社提出。本标准山中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院归口本标雅起草单位，中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院。本标雅主要起草人：陈荣张卫明1范围免费标准下载网bzxz
姜及其油树脂
HKAONKAca-
qE-ei-ac-eC-ae-Craac-CEC-Neca-niKAoNhrKAaGB/T22293-2008/1S0136851997
主要刺激成分测定HPLC法
本标准规定了测定于姜及姜油树脂中姜醇、姜酚(简写为L61G,8|G、[10-G、[6-S,[8]-S.10/S)的反相HPLC测定方法。
本标准适用于干姜和姜油树脂中姜醇、姜酚的测定，注：姜醇和姜酸化学结构式参见附录A，2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标雅的条款，凡是注期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准然而，鼓励根据本标准述成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本：凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用」本标准，GB/T12729.3香辛料和调味品分析用粉末试样的制备（GB/T12729.32008.ISO2825：1981.MOD)
GB/T12729.6香辛料和调味品水分舍量的测定（蒸馏法）（GB/T12729.62008,ISO9391980,NEQ)
3原理
在常温、常压下，用甲醇萃取于姜粉中的刺微性成分，减压浓缩萃取物，所得浓缩液直接用反相HPLC法进行分析。用王酸香草酰胺(NVA)作外标进行定量。4试剂
分析纯试剂，除特别说明外，均用HPLC级纯水。4.1 外标
王酸香草酰胺（NVA)的熔点为42-~41C之间，在本标准规定条件下，用HPLC分析时，得到单一色谱峰（出峰时间在3min～8min之间，峰面积至少为总面积的98%）。4.2溶剂
4.2.1甲醇.HPLC级。
4.2.2甲醇：分析纯。
4.2.3 乙腈:HPLC级。
4.2.4冰乙酸。
通用实验室仪器，其他仪器如下5. 1色谱仪
可用了HPLC分析的色谱仪，其配置如下：2）进样系统：能准确进样20的样品：b）固定波长（280nm）紫外检测器：GB/T 22293—2008/1S0 13685:1997HKANKAca-
qUE-ei-aC-eC-ae-Ciaac-CEC-Nca-iiKAoNiKAac）具有基线饺正功能、灵敏度为 0,25 .u.f.s--0.5 =.u.1.s,能精确测量峰而积的记录仪或积分仪。
5. 2 不锈钢柱:230 mm×4. 6 mm,内充填 5 μmCa(ODs)5.3旋转式真空蒸发器：
5.4真空过滤器。
5.5FH型微膜过滤器孔径C.5um.用于有机溶剂：5. 6 HA 型微膜过滤器:孔径 0. 45 PILL,用于含水溶剂。5.7移液管：容量20ml..
5.8巴士德吸管。
5. 9容量瓶:5 ml.、25 rml.、10g mL5.10
圆底烧瓶：100mL
分析天平:感量士0.
6 样品的制畜
6. 1 干姜
是方法将平姜研磨成粉，能进！m孔格的篇，粉状样品水分合屋的测定按按 GB/T 12729
GB/T12729.6的部是行。
6.2姜油树脂
取样前应将美活荒分搅拌均匀
7检测方法
7.1VVA标准落预的配制
g的NVAC4..溶手里醇（4&中，稀释至100mL，年10℃下保存该溶称取 ℃. 1 g主
液（浓度约1.0mgmL）
使用时将原液（5mL和10mL分别稀释室25ml.）用甲醇箱释来配制标准浴液(约 0. 2mg/ml/D)/实际浓度
7.2 NVA 样品溶液的配制
7.2.1 干姜
称圾1.000g姜物手mL容量瓶中加甲醇至刻厂，盖上后剧裂振摇2h后再次剧烈振摇，然后放置12h以上，用吸管吸2ml.上层清液（不能愈皮底部沉淀）.放人100mL随底烧瓶（5.10）中，用旋转式真空蒸发器于40水上浓缩至2mL。用巴士德吸管(5.8)转套浓疆夜及冲洗用的甲醇至50 mL.容量耗(5. 9)中,用甲醇(1.2.2)稀释至刻度，盖好容量瓶后删烈握播，制带两份华取物（一份浓缩另一份不浓缩用于HPIC分析。对饰，-样品：均制备萃取物一式两份，以\mg7mL标明实际浓度7.2.2姜油树脂
称坡0.500g姜油于100mL容量瓶(5,9)中证明准确质量：用甲醇(4.2.2)筛至刻度，盖好片刷烈振摇，对每个样品均制备两份溶液，以“mg/mL\标明实际浓度。7.3色谱分析
7.3. 1流动相(乙睛与含 1%乙酸的水除气前的比例6535)用真空过滤装置（s.4)将520mL乙睛（4.2.3)经FH型微膜过滤器过滤，将水和冰乙酸按91(体积比)的比例混合，将此混合液280 ml1.经HA型微膜过滤器(5.6)过滤到已过滤的乙睛资液中；将流动相在磁力揽排下减压(压力30 kPa)除气5 min然后将流动相转移至色谱仪贮液池中，设定流速为1.0 ml/tmit.
7. 3.2响应因子的测定
调整记录仪/积分仪直至进样时基线不波动，此时开始记录积分信号（通常为进样后3nin)，将检2
HKANrKAca-
qE-ei-ac-ec-ae-Ceraac-CEc-Neca-inikAoNhrKAsaGB/T 222932008/IS0 13685: 1997测器和记录仪调节至合适灵敏度：每份NVA标准溶液重复选样20IL，记录运行时间为NVA保留时间(通常为 1 min~-5 min)外加 ^ min 范围内的色谱图(参见附录 B),每份标准液至少进样三次。标明各个色谱图上的NVA的峰面积,计算不同NVA浓度下(约0.2mg/mL和0.4mg/ml.)的平均峰面积，按式1)计算NVA的响应因子：AVAX100
式中·
NVA的浓度，单位为毫克每毫升（mg/ml)：在相应浓度下NVA的平均峰面积。+( 1)
为了确保线性，两个浓度下测得的Kv值相差不得大于2%，标准曲线参见附录C。然后按式(2)--式(7)分别计算每个姜醇和姜盼的K值：294.38
KEGKxva X
= A X 1. 003
式中：
同理：
姜醇-［6]的相对分子质量
NVA的相对分了质量，
KaeKw X1.099
K-GKAX1.194
Ki51 =Knva X0.942
KT$ = KNa X1.037
Krte's = KnvA X 1. 133
7.3.3样品分析
7. 3. 3. 1 干姜
将各个浓度下按7. 2.1制备的萃取物注人色谱仪+按7.3.2调节仪器,将记录时间延长至17 Imin 按保留时间顺序记录得到67G:「87-G,6-S和10-G相应的峰面积(典型色谱图参见附录D)。化合物[87S和I10S通常在干美中很少出现，而保留时间接近于NVA的[6-G峰，在色谱阁中通常是最高的。
对于样品而言.其浓缩举取物给出的[61-G峰的面积大于浓度为C.4mg/mL的外标物NVA的峰面积,将按7.2. 1得到的米浓缩萃玻物注人色谱系统，采用色谱图来测定[61G。7.3.3.2姜油树脂
将由7.2.2制备的各姜油树脂溶液导人色谱系统，仪器调节同 7. 3.2.维持更长的操作时间(约40 min),按保留时间长短顺序记录得到对应于6]-G、LB1-G、6-S,[10]-G、[8]-S,L10]S 的峰面积(典型色谱图见附录D)：
[6]-G和[G7-S通常是最高的色谱峰,[67-G的保留时间接近于NVA峰,对于[6G峰面积大于浓度为0. 4 mg/ml.的标准NVA峰面积的样品，制备并间色谱系统中导入合适稀释度的溶液便可利用色谱图测定[6]-G。8结果表示
按式（8)分别计算干姜和姜油树胎中姜醇和姜酚的浓度，其样品中6G的含量X以质量分数计数值以%表示：
X-AaexKua
-（8)
CB/T 222932008/1SO 13685:1997式中．
Ar51-t——样品色谐图中[S]-G的峰面积;KaG
［6]-G 的响应因子
-KAoNrKAca
qE-ei-ac-ec-ae-Ceiaac-cEc-Neca-iikAoNhrKea样品溶液中干姜或姜油树脂的浓度.单位为克每毫升(mg/iml.)。9蛋现性
相同操作者，用同样的仪器在同一实验室，在较短的时间间隔内，用相同的测定材料和测定方法，测得的两个平行结果之间的绝对误差不得大于2%（千美以「61G的误差为参照：姜树脂以|61G或[6]-S的误差为参照】。
注实验室问测定结果参见附
附录A
(资料性附录）
姜醇和姜酚化学结构
姜醇化学结构
图A2姜酚化学结构
KAONKAca-
qUE-ei-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-niKANrKApaCB/T 22293--2008/IS0 13685:1997CH
GB/T 22293-—2008/ISO 13685:1997相烂强度
附录B
（资料性附象）
NVA典型色谱图
图B.1NVA典型色谱图
KANirKAca=
qUE-i-aC-eC-ae-Ceraac-CEC-Neca-iniKAoNr KAa15h
附录C
(资料性附录）
姜醇、美酚标准曲线
TKAONKAca-
qUE-ei-aC-eC-ae-Ciaac-CEC-Neca-iiKAoNiKAaGB/T22293-2008/ISO13685:199704
姜醇、美酚标准曲线
GB/T222932008/IS013685:1997
相对强度
（资料性附录）
姜醇、姜酚典型色谱图
图1I.1姜醇、姜酚典型色谱图
rrkAoNirKAa=
qUE-i-aC-eC-ae-Craac-CEC-Neca-KAoNirKAcaUT
as chaim
实验室
平均值
坂大偏差
实验室
平均彼
最大偏差
实验室
平均值
最大偏差
附录E
（资料性附录）
iKAoNirKAca
qUE-ei-aC-eC-ae-Cciaac-CEC-Neca-iiKAoNiKaGB/T 222932008/ISO 13685:1997姜油树脂不同实验室测定结果
测定1:用二氧化碳（CO,)萃取的姜油树脂L10]-C
L10]-G
总姜酵
测定1:姜油树脂A
总芸尊
测定 1:姜油树脂 B
总姜醇
[10] s
[10】s
总姜酚
总姜的
总姜酚
GB/T22293-2008/I5013685:1997表E.4
实验室
平均值
最人偏差
实验室
平均值
最大偏筹
［6]G
FYKANKACa=
qLE-i-aC-ec-ae-Ceraac-CEC-Neca-inikANrKApa测定2:用二氧化碳(CO2)萃取的姜油树脂[107G
[10] G
总姜醇
测定2:姜迪树脂C
总要醇
Lio]-s
[101-S
总姜酚
总姜酚
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