【国家标准(GB)】 铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定

ICS67.040
中华人民共和国国家标准
GB/T21234—2007
铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定Determination of sodium iron(I)ethylenediaminetetraacetate,trihydrate(NaFeEDTA·3H2O)inironfortifiedsoysauce2007-10-29发布
中华人民共和国卫生部
中国国家标准化管理委员会
2008-04-01实施
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。GB/T21234—2007
本标准由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、佛山市海天调味食品有限公司负责起草。本标准主要起草人：霍军生、黄建、魏峰、黄文彪、于波、孙静。1
1范围
铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定本标准规定了铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠（NaFeEDTA）的测定方法。本标准适用于铁强化酱油中乙二胺四乙酸铁钠的测定。GB/T21234—2007
本标准第一法的检出限为0.030μg/mL，当取样为2.5mL时，最低检出浓度为6.0μg/mL，最佳线性范围为0.2μg/mL~20μg/mL。第二法的最低检出限为0.24μg/mL，当取样为3.0mL时，最低检出浓度为40μg/mL，最佳线性范围为4.0μg/mL~24μg/mL。第一法高效液相色谱法
2原理
铁强化酱油试样，经甲醇沉淀后，过滤，稀释，用反相离子对高效液相色谱法将乙二胺四乙酸铁钠中的FeEDTA-与试样中的杂质分离，经紫外检测器254nm波长处检测，根据色谱峰保留时间定性，标准曲线法峰面积定量。
3试剂
本方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸罐水或同等纯度水。3.1甲醇：色谱纯。
3.240%四丁基氢氧化铵水溶液（TBAOH)。3.3甲酸稀溶液：将88%甲酸用水稀释10倍进行配制。乙二胺四乙酸铁钠标准物：纯度（以NaFeEDTA·3H，O计）≥99.0%3.4
3.575%甲醇溶液：将体积为750mL的甲醇加到体积为250mL的水中，混匀。3.6乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液：准确称取乙二胺四乙酸铁钠标准物0.1g，置人50mL棕色容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，此溶液浓度为2000μg/mL。于冰箱中避光保存，推荐15日内使用。
3.7乙二胺四乙酸铁钠标准中间溶液：准确吸取乙二胺四乙酸铁钠标准储备浴液2.50mL，置于50mL棕色容量瓶中，用75%甲醇浴液定容，摇勺，此溶液浓度为100μg/mL。于冰箱中避光保存，推荐15内使用。
3.8乙二胺四乙酸铁钠标准使用溶液：分别吸取乙二胺四乙酸铁钠标准中间溶液1.0mL、2.0mL、4.0mL6.0mL、8.0mL、10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇勾后，即得到乙二胺四乙酸铁钠标准系列，分别含NaFeEDTA3H,0为2.0μg/mL、4.0μg/mL、8.0μg/mL.12.0μg/mL、16.0μg/mL、20.0μg/mL。临用时配制。4设备与仪器
4.1实验室常用设备。
4.2高效液相色谱仪：具有紫外检测器。4.3酸度计。
GB/T21234—2007
5分析步骤
5.1试样处理
吸取铁强化酱油试样2.50mL，置于50mL棕色容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，摇匀。于避光处静置50min后，滤纸过滤，吸取滤液5.00mL，置于50mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，用0.45um滤膜过滤，即得试样液，供仪器测定用。5.2高效液相色谱分析
5.2.1色谱条件（参考条件）
5.2.1.1分析柱：ZorbaxC柱4.6mmX150mm，5μm。5.2.1.2流动相：吸取40%四丁基氢氧化铵水溶液3.25mL，置于烧杯中，加水130mL，再用甲酸稀溶液将pH调至3.30，将此溶液转移至1000mL容量瓶中，加125mL甲醇，用水稀释至刻度，摇勾，脱气后使用。
5.2.1.3紫外检测器检测波长：254nm。5.2.1.4进样量：20μL。
5.2.1.5流速：1.0mL/min。
5.2.2标准曲线的制备
分别用3.8中的标准使用溶液20μL进行HPLC分析，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，或计算回归方程。
5.2.3试样分析
取试样液20μL进行HPLC分析。
5.2.3.1定性：与标准品色谱峰的保留时间比较定性。5.2.3.2定量：在实验条件下，对试样液进行测定。取其峰面积平均值从标准曲线上查得或根据回归方程计算其含量。
6结果计算bZxz.net
试样中乙二胺四乙酸铁钠含量按式（1）计算：XXx
5×1000
式中：
X——试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量，单位为旁克每毫升（mg/mL）；X，由标准曲线上查到的乙二胺四乙酸铁钠含量，单位为微克每毫升（μg/mL）；Vi一一试样液定容体积，单位为毫升（mL）V-一试样的体积，单位为毫升（mL）计算结果保留三位有效数字。
7精密度
在重复条件下获得的两次重复测定结果的相对差值不得超过算术平均值的10%。8分离色谱图
铁强化酱油试样液中的分离色谱图见图1。2
.（1)
9原理
FeEDTA
16.0018.00
图1铁强化酱油试样液中的分离色谱图第二法比色法
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乙二胺四乙酸铁钠在酸性溶液中（pH<0.5）中完全解离，游离的Fe+与显色剂硫氰酸铵（NHSCN）反应生成红色络合物，该络合物在含有乙醇或丙酮的有机溶液中较为稳定，于波长480nm处有最大吸收，且吸光度与浓度成线性关系，利用可见分光光度法，通过与未酸化处理的试液做空白比对，计算乙二胺四乙酸铁钠含量。而其他铁营养强化剂，Fe+与显色剂NHSCN生成无色络合物，FeJ+与显色剂NH,SCN在酸化或未酸化溶液中都同样生成红色络合物，可比对扣除。10试剂
本方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水。10.1乙二胺四乙酸铁钠标准物：纯度（以NaFeEDTA·3H.O计）≥99.0%。10.275%甲醇溶液：将体积为750mL的甲醇加到体积为250mL的水中，混匀。10,3过硫酸铵。
10.4无水乙醇。
10.5盐酸溶液：量取盐酸500mL，加水稀释至1000mL，摇匀。10.615%硫氟酸铵显色剂：称取硫氰酸铵75g，置500mL容量瓶中，加水250mL，浴解后加丙酮75mL，用水稀释至刻度，播匀。10.7丙酮-水溶液：于500mL容量瓶中，加75mL丙酮，用水稀释至刻度，摇勺。10.8乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液：准确称取乙二胺四乙酸铁钠标准物0.1g，置人50mL棕色容量瓶中，用水洛解并稀释至刻度，摇匀，此溶液浓度为2000μg/mL，于冰箱中避光保存，推荐15日内使用。
11仪器
11.1实验室常用设备。
11.2可见分光光度计。
GB/T21234—2007
12分析步骤
12.1标准曲线的制备
准确吸取乙二胺四乙酸铁钠标准储备溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL分别置于50mL容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，摇匀。精确吸取稀释后的不同浓度标准溶液5.00mL分别置于50mL容量瓶中，加水5.00mL，加显色剂15.0mL，用无水乙醇定容，摇勺，以水为空白调零点，在入=480nm处分别测定其吸光度A。再分别精确吸取不同浓度标准溶液5.00mL于50mL容量瓶中，加盐酸溶液5.0mL，加显色剂15.0mL，用无水乙醇定容，摇匀，即得不同浓度的标准溶液，NaFeEDTA·3H,0浓度分别为0μg/mL、4.0μg/mL、8.0μg/mL、12.0μg/mL、16.0μg/mL、20.0μg/mL、24.0μg/mL。以水为空白调零点，在入=480nm处分别测定其吸光度A。计算不同浓度△A=A一A。，以浓度为横坐标、AA为纵坐标绘制标准曲线或计算线性回归方程。12.2试样处理
精密吸取铁强化酱油试样3mL，置于50mL容量瓶中，加75%甲醇浴液稀释并定容，于避光处静置30min后，滤纸过滤，取滤液5.00mL四份，分别置于四个50mL的棕色容量瓶中。试样液1配制：在其中一个容量瓶中加水5.00mL，过硫酸铵0.100g，15%硫氰酸铵显色剂15.0mL，加无水乙醇定容，摇勾。试样液2配制：于另一个容量瓶中加盐酸溶液5.00mL，过硫酸铵0.100g，15%硫氰酸铵显色剂15.0mL，加无水乙醇定容，摇匀。试样液3配制：于另一个容量瓶中加水5.00mL，过酸铵0.100g，加15.0mL丙酮-水溶液，再用无水艺醇定容，摇匀，
试样液4配制：于另一个容量瓶中加盐酸液5.00mL，过硫酸铵0.100g，加15.0mL丙酮-水溶液，再用无水乙醇定容，摇匀。12.3测定
于入=480nm处测定试样液1、2、3、4的吸光度，分别为A#、A#、AtAgt。注：由于Fe+与硫鼠酸铵生成的红色络合物对光、热不稳定，试验应在30℃以下并避光操作，13结果计算
试样中乙二胺四乙酸铁钠的吸光度值按式（2)计算。A=A#-A#-(At-A）
式中：
A#—试样液2的吸光度值，
A#试样液1的吸光度值；
A试样液4的吸光度值
A+——试样液3的吸光度值。
·（2）
根据△A值，从标准曲线上得到测定试样液中乙二胺四乙酸铁钠含量X，（ug/mL），供计算试样中乙二胺四乙酸铁钠含量用。
试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量按式(3)计算。X-X.V
5X1000
X一一试样中乙二胺四乙酸铁钠的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；（3）
X，—由式（2）计算后从标准曲线上得到的乙二胺四乙酸铁钠含量，单位为微克每毫升（μg/mL）；4
V一试样液定容体积，单位为毫升（mL）；V一一试样的体积，单位为毫升（mL）；计算结果保留三位有效数字。
精密度
GB/T21234—-2007
在重复条件下获得的两次重复测定结果的相对差值不得超过算术平均值的10%5
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