【国家标准(GB)】 预混合饲料中d－生物素的测定

ICS65.125
华人民共利国国家标准
GB/T17778--2005
找G6/1177731999
预混合饲料中d-生物素的测定
Dctcrmination of d-hiotin in premix2005-09-05发布
中华人長共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-02-01实施
元标准点GBT17773
31999预我料中生物获均测定的修股，本标准与前版相比工要发术内容变化如下：补充了“高效获相色谱法”，井规定其考件裁法。GB/T17773—2005
在“分光光度达\中“试样济较的提取”增加，月水光深解的步案；在“谢定\中月光度拍一阶导数的降关值“代萃原“项光也\1999
本标准自实施之月起：代G3/工17773本标准由全国悔料工业标准化技术委员会提口归口本标准起草单位：国家划料质盘监督始验中心（或没）。本标雅主要车人钱册，回文，场林，场先卒1范围
预混食饲料中d-生物素的测定
GB/T17778—2005
本标准规定「用分光光变仅和高效波相色培仪测定预混合饲料中生物素含或的两种方拉。本标准规定的行法-和法2证用d生哟获含盘人十1.0m/kg关复合预混合间料、维生素混合词料的测定。提取减的浓度范围为2.g/mL~20.C\g/nl..2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引而成本本标睡的条款，小是注口册的引用文物，其后所右的梦改单（不包循药误的内穿）或参订版均不送用于本标准，然而，效费根据本球理达成协议的各方究足否可惊用这些文件的虽新版木，儿卡不性口期的引片这件其展新战本道用干木标准：GB/T6692分析实验案刀水规格机试方运（ne1SO3696：1937）GB/11539.1饲料深洋
3方法t——分光光度法
3. 1原理
用乙停水榨液将试样中d-生物需提取山来，蔬教乙醇萨液中-生物索和4-下冠状肉样游尘式橙色化合物，在定总固内献色深茂与山生物素金应成正比。3.2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仪使用确认为分析纯的试剂。水合GB/工6K2三级水的规定3.2.1无水乙醇，
3.2.2乙醇深波将体积的乙醇与11体积的凝3.2.3酸-乙酸转薇：将？送积的成酸与达积的无心乙醇湿句，3.2.44二中氨函肉桂催七水乙路腋：26/T.3.2.5d-牛物素标准馨减
3.2.5.1标准端备滤：准确称取J.1000gd-牛构系标注凸群锌十人.停客液（5.2.2>11，定量转人100ml容量瓶中，用乙醇水培缓稀至刻度，，此波1.mL告d-生物素1.rg.3.2.5.2标准工作乘：谢确格收d-生物素标非储各穿液（1.2..1)\30)ml.干5rT变量册11,加么醇溶淡稀释刻度，说句。此泌二,00 ml.含d牛物求23,03.3仪器与设备
3.3.1分光光度有一阶导数动能）。3.3.2实牢用缸户波提取器，
3.3.3分析人平：虑量.0I1g。
3.4计样的制备
接GBT.1539.1规定方法采样.选例杆品至少5006.同分法缩减至1，它路，通对0，12等，混勺，装入密闭容器中，保存备用.3.5分析步需
3.5.1试样落液的提取
称欧推生案混料约2g摘拥至(0001）点合创游将约g~1g销确至.0：1.笠干磨乎底联，人F00.水置超声波提取3.3.2）轻r0in后，年人23m.乙率1
GH/T 17//8--2035
（3.2.1卢22mn，益后度称算0m.穿里临中用元不乙醇（2，3.1)彩释至别度，过满，奔去开好的19.余F作为试样提取液。
3.5.2观是
3. 5. 2. 1 标准T作由统均终制精码收u生物案标准T作渡（3.2.5.2>0.W、1.00、2.33、5.60、10.00ml.下2mJ.容基液小，办加醇率微（3.2.2210.0n.00.8.25.000.00人硫7.率夜3.2.3)114-二甲然年肉桂醛无水乙醇降液(3.2. 4>2ml.:起勾，穿温下放骨1h.压无水乙醇(2.2.1)烯烯至度。用1.80用分光扫猫吸的导数制索与20知16m处吸光度的一价导数的呼差值的标准」作血线：3.5.2.2特铺爱取2.5.1提取减0.0CmT。下25ml.容量瓶中，加入究酸乙醇落浓（3.7.3））iml.死1-甲氢基肉杜醛无水乙降落液1.2.1)2mI.抢,室温下效胃11.月无水乙醇3.2.1:格整至刻展，月1.0ce:包mEcm580mx处月分光度什意520nm和515am然吸光资的一阶数节峰关消，在际泄工作曲线上查得试详求收液中生物来的含盘。3.6分析造巢的计其和表述
3.6.1式详中-生物索的告风安(1>H算Ym
武样中l-生物素的含，单位为每干克（/k)：标准也浅上咨得测定试拍提服微中生物款的质量，单位改克武样法是，单为克
议测定此受取试件提取波体积，单垒动毫功（品：试样带表液总体积年位为受)。
3.5.2母心试样两份试料逃灯平行测定，以其算术平均值为测正结果，保留二性有效数了3.7精密度
3. 7. 1 量复性
在至反条性一病得的两次独让测试结未的扭对们差现实如表正，以大二划实的相偏差的有还不超过为的提。
兰湖事含早g/xg
3. 7.2再现性
和对端31
存再理详条件下获供的两次独测战续果片测定佳的绝刘差随不大十我？中所求的值，以大干2中路对差值的情况.小难注5治为前券表2
-索R）
4方法2——高效液相色谱法仲裁法4.1原理
GB,T17778—2005
试樟中的中个物素用水提取将过法心后的试样落赖证人高效波相色谱仪中进行分离，月装外检器测定，外标法让算山-土物索内含量。4.2试剂和材料
除非另有说明，本病所用试与为分析纯，为类水，色满刀水为去离子水，符合（3/621-级旧水现定
4.2.1：2=胺五艺龄(TFA）
4.2.2低7酸济液.3.05环体积分效,用氧化液[(Na0H)=521/试节rH至2.54.2.3d坐物案标准落液
4. 2. 3. 1 d-生物紊标准储备箱被:准确称取(1. 11: :1 :I-生物素熔解于水中,定尽转人 11) -1l. 容瓶中r.用水程释至测境。此液l.ccral.含d-生物素1.Gcmg。4.2.3.2d生物案标准T作措策：准确量浪d小物标难筛备落率1.oml. -bomL容感地中,而永都释第刻度：比液1.00mL青d物京20.UJ。4.3仪器、设备
4.3.1实验室超产波提取器：
4.3.2高效满相么诺仅，配有紫外或二极必册车长测器。4.年运样制备
同分光光度法3.小，
4.5分析好媒
4.5.1试样溶注的提取
称取维生帝预派何料药确至.M1、夏合项泥饲料约精确至,」g置10m签域就小（若预混合均料中金在矿题质，加人0.1gDTA）人分之二体积的莱水，在罐波收器（4.3.超提取20品冷却后月水定容至划座：效没过45法膜，为上机：4.5.2测定下载标准就来标准下载网
4.5.2.1高效游相色谱需性
色增#：长250nt内价4.6m.效度5m的C村流动相：85%mL甄之.够穿液！4.2.2)加15mL2脏（色谱纯！。流动拍流速：1.Um:/mi.
进样体积；21T.,
检器：紫外或一极短牌检例%+快用皱长21U2m。4.5.2.2定盖刷定
落高效液相色谱议说叫书调错端离作微。向色陷书注人标准1.作滤（4.2.3.2及试详提取浓【4,5.1],得到色谱哗面积的吗应值,联标准落液啡面识的平均悄定量计草，标准工作满应在分折的末分别进样，件品多时，分许中间应拥入乐洋工作商应正降时间，4.6分析结果的计算和表述
4.6.1试样中t-生物素的含量按式/7计算S xvxr-xv
我中：
一试样中d生物来的含量，单位为毫克每千克r/k)X
试准危止，单位为克g）；
GHT17778—205
邦准工作液呼面取：
比祥进渡华心
标准工作液变，单位为谢克每毫（增mL；标准工作来进样体,单位为谢升(L！：民准我限两进栏体单货为设止（上！试样提成获点体只，单位为壶升（）4.6.2舟个试详收两份试科进行平行测定，以其算术平均倪为测完结果，保三使有效数牢，4.7精密度
4.7.1重复性
在再性条件下以得的两次独文划试结果的相刘确差规定如表3，以人于规定的相别偏差的情况不趋过为前积，
dt物票含点(nxkg)
4.7.2再规性
相对偏长%)
在再现亲件下非得的两次独立试洁果的测定值的绝对素值不大于装4中所示的使，以人十表中所列绝意值的标说不超过了以为前提，表4
1-4物水合量:imr/r:
绝别差直（）
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