【地方标准】 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法

ICS 备案号：28170-2010 四川省地方标准 DB51/T 1080—2010 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法 Determination of zearalenone in feeds High-performance liquid chromatography 2010-06-01发布 2010-07-01实施 四川省质量技术监督局 发布 前言 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口，由四川省质量技术监督局批准，由四川省饲料工作总站负责起草。 本标准起草人：柏凡、赵立军、李云、高庆军、魏敏、张静。 本标准的附录A为资料性附录。 1 范围 本标准规定了采用高效液相色谱法（HPLC）测定饲料中玉米赤霉烯酮含量的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定，检出限为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样经纯水提取、离心和过滤后，滤液经免疫亲和柱净化、浓缩处理后，用高效液相色谱仪-紫外检测器检测，通过外标法计算玉米赤霉烯酮含量。 4 试剂和溶液 除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T 6682一级水要求。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 氯化钠：分析纯。 4.4 提取液：乙腈+水=90+10（体积比）。 4.5 玉米赤霉烯酮标准品：含量≥98%。 4.5.1 标准贮备液：称取10 mg标准品，用乙腈溶解定容至100 mL，浓度100 μg/mL，2℃～8℃保存，有效期6个月。 4.5.2 标准工作溶液：由贮备液配制0.01、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/mL系列标准溶液，2℃～8℃保存，有效期1个月。 注意：接触玉米赤霉烯酮容器需用4%次氯酸钠处理；操作需佩戴手套并在通风橱中进行。 4.6 玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。 5 仪器与设备 5.1 分析天平（感量0.1 mg） 5.2 超声波清洗器 5.3 离心机（≥5000 r/min） 5.4 超纯水处理器 5.5 涡旋混合器 5.6 高效液相色谱仪（配紫外检测器） 5.7 氮吹仪 5.8 0.45 μm滤膜 6 试样制备 按GB/T 14699.1采样，按GB/T 20195制备实验室样品约1 kg，四分法缩分至约200 g，粉碎过1 mm筛，混匀备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 7.1.1 提取 称取20 g试样（精确至0.01 g），加入氯化钠2 g及提取液50 mL，超声提取20 min，离心后取上清液过滤。取1 mL上清液用蒸馏水稀释至10 mL备用。 7.1.2 净化 免疫亲和柱连接注射器后，上样1.0～2.0 mL稀释液，流速1～2滴/秒；用5 mL蒸馏水淋洗；用2 mL甲醇洗脱；50℃水浴氮气吹干；用流动相复溶至1000 μL，涡旋后经0.45 μm滤膜过滤上机。 7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱：C8柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）或同等性能柱 7.2.2 柱温：30℃ 7.2.3 流动相：乙腈+水+甲醇=46+46+8 7.2.4 流速：1.0 mL/min 7.2.5 进样量：50～100 μL 7.2.6 检测器：紫外检测器，检测波长274 nm 7.3 测定 按标准溶液与试样溶液进行测定，根据保留时间定性，外标法定量。当浓度超出线性范围时需稀释或浓缩后测定。 8 结果计算 试样中玉米赤霉烯酮含量X（具体计算公式见标准原文）