【地方标准】 羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程

ICS 65.020.30
CCS B 41

DB15

内蒙古自治区地方标准
DB15/T 2742—2022

羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定操作规程
Operating procedures for isolation and identification of sheep Mannheimia haemolytica

2022-07-29 发布
2022-08-29 实施

内蒙古自治区市场监督管理局 发布

前言

本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由内蒙古畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。

本文件主要起草人：张月梅、赵世华、宋越、白帆、王娜、戴伶俐、张帆、杨斌、刘威。

1 范围

本文件规定了羊溶血性曼氏杆菌分离与鉴定的操作方法。
本文件适用于羊及其产品中溶血性曼氏杆菌的分离鉴定。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1
溶血性曼氏 Mannheimia haemolytica, Mh
巴氏杆菌科曼氏杆菌属的微生物，球杆状或短杆状菌，两端钝圆，革兰氏染色阴性，典型两端深染，中间浅，单个或成双排列，无鞭毛，有荚膜，不形成芽孢。

4 操作步骤

4.1 方法概要

检验程序的流程示意图见附录A。

4.2 试剂和材料

4.2.1 除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682的超纯水。

4.2.2 普通琼脂绵羊血平板
称取牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠5.0g，磷酸二氢钾1.0g，琼脂15.0g，超纯水1000mL，混合，加热溶解，调pH至7.6，115℃灭菌15min，冷却至45℃时加入无菌脱纤维绵羊血50mL，并在无菌操作要求下倾注约20mL至无菌平皿中。加盖后于室温放至凝固。制备好的培养基平皿宜在2℃～8℃保存。

4.2.3 5%马血清的TSB
称取胰酪胨15.0g，大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g，氯化钠5.0g，超纯水950mL，混合，微热溶解，调节pH值为7.3，121℃高压蒸汽灭菌15min，冷却至约60℃时添加50mL马血清，混匀。制备好的培养基宜在2℃～8℃保存。

4.2.4 麦康凯琼脂培养基
称取蛋白胨20.0g，乳糖10.0g，牛胆盐5.0g，氯化钠5.0g，中性红1.0g……