【地方标准】 畜禽肉及肉制品中牛羊猪鸡鸭源性成分定性PCR检测方法

DB42/T1591-2020 畜禽肉及肉制品中牛羊猪鸡鸭源性成分定性PCR检测方法 Detection of bovine, ovine, caprine, pig, chicken and duck derived materials in meats and meat products of livestock and poultry by qualitative polymerase chain reaction (PCR) method 湖北省市场监督管理局发布 2020-07-07，实施 2020-11-07 前言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意，本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由华中农业大学提出，由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位为华中农业大学、武汉市动物疫病预防控制中心，主要起草人为刘榜、王文君、付明、周翔、陶利文、刘祖红、王小康、张庆德、阮征。本文件实施中的疑问可咨询湖北省农业农村厅，联系电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com。对本文件的修改意见及建议可反馈至华中农业大学，联系电话：027-87282038，邮箱：xys@mail.hzau.edu.cn。 1 范围 本文件规定了牛（普通牛、瘤牛、耗牛和水牛）、羊（绵羊和山羊）、猪（家猪和野猪）、鸡、鸭源性成分的定性PCR检测方法。适用于上述动物的肉及肉制品中源性成分的定性PCR检测。 2 规范性引用文件 下列文件通过文中的规范性引用构成本文件必不可少的条款： - GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 - GB/T 19495.2 转基因产品检测实验室技术要求 - GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范 - 食品分子生物学检测术语和定义 注：注日期的引用文件，其指定版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 根据牛、羊、猪、鸡和鸭的物种特异性序列，设计特异性引物，对待检样品提取的DNA进行PCR扩增。依据扩增特异性片段的结果，判断样品是否含有牛、羊、猪、鸡和鸭源性成分。 5 试剂和材料 5.1 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GL/T 602的要求。 5.2 琼脂糖。 5.3 GelRed核酸染料，可根据需要选择其他效果相当的核酸染料作为核酸电泳的染色剂。 5.4 10 mol/L氢氧化钠溶液：在160 mL水中加入80.0 g氢氧化钠（NaOH），溶解后冷却至室温，再加水定容至200 mL。 5.5 0.5 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液（pH 8.0）：称取18.6 g EDTA-Na，加入70 mL水中，再加入适量氢氧化钠溶液（5.4），加热至完全溶解后冷却至室温，用氢氧化钠溶液（5.4）调pH至8.0，加水定容至100 mL。在103.4 kPa（121℃）条件下灭菌20 min。 5.6 1 mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（pH 8.0）：称取121.1 g三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶解于800 mL水中，用盐酸调pH至8.0，加水定容至1000 mL。在103.4 kPa（121℃）条件下灭菌20 min。 5.7 5 mol/L氯化钠溶液：称取29.22 g氯化钠（NaCl）溶于80 mL水中，加水定容至1000 mL。