【地方标准】 医用供体猪 病原微生物监测技术规范

DB51/T3183-2024 医用供体猪病原微生物监测技术规范
发布日期：2024-07-19
实施日期：2024-08-08
发布单位：四川省市场监督管理局

前言
DB51/T3183—2024
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件由四川省经济和信息化厅提出、归口并解释。
本文件起草单位：中国测试技术研究院生物研究所、成都中科奥格生物科技有限公司、四川省医学科学院·四川省人民医院、四川泰康医院、南京医科大学附属苏州医院、海南医学院第二附属医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、空军军医大学第一附属医院、成都达硕实验动物有限公司、成都爱迪眼科医院、四川省机械研究设计院（集团）有限公司、四川省实验动物学会医用猪专业委员会。
本文件主要起草人：周李华、邢向阳、陈璐、潘登科、叶德萍、邓绍平、蒋子敬、李巅远、张玉兰、王毅、陈刚、杨恒钰、窦科峰、田伟、钟浩、李鑫、姚晓明、刘明东、庄瑛、莫玲。

1 范围
本文件规定了医用供体猪生产过程中的代孕母猪、医用供体猪，饮水和日粮，隔离器，使用物品等医用供体猪及其物品的微生物学监测技术要求。本文件适用于医用供体猪生产和交付过程中微生物质量控制。基因修饰动物的病原微生物监测可参考本文件。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 14926.1 实验动物沙门菌检测方法
GB/T 18448.1 实验动物体外寄生虫检测方法
GB/T 18448.6 实验动物蠕虫检测方法
GB/T 18448.10 实验动物肠道鞭毛虫和纤毛虫检测方法
GB/T 18648 非洲猪瘟诊断技术
GB/T 19915.6 猪源链球菌通用荧光PCR检测方法
GB/T 34750 副猪嗜血杆菌检测方法
GB/T 36789 动物狂犬病病毒核酸检测方法
NY/T 564 猪巴氏杆菌病诊断技术
NY/T 573 动物弓形虫病诊断技术
NY/T 1186 猪支原体肺炎诊断技术
SN/T 0762 猪圆环病毒检测方法
SN/T 1181 口蹄疫检疫技术规范
SN/T 1247 猪繁殖与呼吸综合征检疫技术规范
SN/T 1446 猪传染性胃肠炎检疫规范
SN/T 1698 伪狂犬病检疫规范
SN/T 1919 猪细小病毒病检疫技术规范
SN/T 2472 日本乙型脑炎检疫技术规范
SN/T 2702 猪水泡病检疫技术规范
SN/T 2708 猪圆环病毒检疫技术规范
SN/T 3307 口岸食源性疾病腺病毒PCR检测方法
SN/T 3972 猪流感病毒病检疫技术规范
SN/T 3741.1 国境口岸鼠类携带病原体检测方法第1部分：致病性钩端螺旋体PCR检测方法
SN/T 3954 国境口岸尼帕病毒RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法
SN/T 4235 猪戊型肝炎检疫技术规范
SN/T 4748 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎检疫技术规范
SN/T 5196 猪轮状病毒感染检疫技术规范
WS/T 269 布鲁氏菌病诊断
YY/T 1596 甲型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 医用供体猪 (medical donor pigs)
通过生物工程技术获得，用于提供医疗用途的活器官或生物材料制备的低免疫原性猪及群体。

代孕母猪应外观健康、无异常，未注射猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗；应排除经胎盘垂直传播的疾病，包括猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病等。病原筛查方法参照 NY/T 679 和 SN/T 1919 执行。筛查应在胚胎植入前1周完成。

5 微生物监测
5.1 采样
5.1.1 采样管的准备
宜采用自带无菌拭子的无菌螺帽盖采样管。也可自制带螺帽盖离心管和棉签作为采样工具。采样管应在保质期内且包装完好。宜经过环氧乙烷灭菌处理，或提前进行高温高压灭菌处理。采样当天放入屏障设施的传递窗内，并紫外灭菌30min及以上。
5.1.2 采样管转入隔离器
在确保医用供体猪饲养隔离器递通道内部密封罩密封状态下，取下传递通道外侧密封罩，将无菌采样管放入传递通道，密封外侧密封罩。新鲜配制1.5%～2.0%的过氧乙酸从传递通道外侧密封罩上的消毒孔，对传递通道内部空间进行喷雾落毒。喷雾时间不宜低于5min。消毒完之后密封消毒孔，等待30min及以上。通过医用供体猪饲养隔离器手套，从隔离器内部取下传递通道内侧密封罩，将无菌采样管移入隔离器内，重新罩上传递通道的内侧密封罩。
5.1.3 样本采集
5.1.3.1 肛拭子采集
采集时将灭菌的棉拭子插入动物肛门中，采取直肠粘液或粪便后，立即将拭子放入采样管内的无菌纯水中，并旋紧螺帽盖。
5.1.3.2 粪便标本采集
猪只自然排便后，挑取约3g～5g的粪便标本，放于采样管中，并旋紧螺帽盖。
5.1.3.3 鼻拭子采集
用灭菌的棉拭子采集鼻腔分泌物，取分泌物后，立即将拭子浸入采样管内的无菌纯水中，并旋紧螺帽盖。
5.1.4 采样管转出隔离器
取下传递通道内部密封罩，将采样管转移至隔离器的传递通道内部，罩好内部密封罩，再打开隔离器传递通道的外部密封罩，将采样管取出，重新罩上外部密封罩。按照5.1.2的要求对传递通道进行再次消毒。
5.1.5 样本保藏
样本应尽快进行检测，在24小时内检测的样本可置于2℃～8℃保存；24小时内无法检测的样本则置于-80℃或以下保存（如无-80℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。应设立专库或专柜单独保存样本。

5.2 检测方法
医用供体猪的病原微生物检测按表1所列方法进行。
表1 病原微生物检测目录
- 非洲猪瘟病毒：GB/T 18648
- 口蹄疫病毒：SN/T 1181
- 日本乙型脑炎病毒：SN/T 2472
- 伪狂犬病毒：SN/T 1698
- 猪传染性胃肠炎病毒：SN/T 1446
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒：SN/T 1247
- 猪流感病毒：SN/T 3972
- 猪水泡病病毒：SN/T 2702
- 猪瘟病毒：SN/T 0762
- 猪戊型肝炎病毒：SN/T 3954
- 猪圆环病毒：SN/T 5196
- 尼帕病毒：SN/T 4748
- 甲型流感病毒：YY/T 1596
- 猪细小病毒：NY/T 1919
- 猪腺病毒：参见附录A
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒：参见附录A
- 猪巨细胞病毒：参见附录B
- 布鲁氏菌：WS/T 269
- 猪巴氏杆菌：NY/T 564