【地方标准】 鸡传染性疾病检测方法 第2部分：鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断技术

ICS 11.220
B41
备案号：49687-2016
DB21 辽宁省地方标准
DB21/T2592.2-2016
鸡传染性疾病检测方法 第2部分：鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断技术
Detection method of chicken infectious disease Part 2: Diagnostic technique of fluorescent RT-PCR for avian infectious bronchitis virus
发布：2016-03-18
实施：2016-05-18
辽宁省质量技术监督局 发布

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准《鸡传染性疾病检测方法》分为三个部分：
— 鸡传染性法氏囊病毒荧光RT-PCR检测方法；
— 鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断技术；
— 鸡马立克氏病实时荧光PCR检测方法。
本部分为第2部分。
本部分由辽宁省动物疫病预防控制中心提出并归口。
起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。
主要起草人：吴运谐、赵晓彤、薛树山、魏园园、石霖、李红魁、王宏燕、闫海滨、李井春、孙世宇、孙洪志等。

1 范围
本部分规定了鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR诊断所用的引物、反应程序、判定标准等技术要求。
本部分适用于禽类及其产品中鸡传染性支气管炎病毒的检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。

3 缩略语
IBV：鸡传染性支气管炎病毒
DEPC：焦碳酸二乙酯
PBS：磷酸盐缓冲生理盐水（phosphate buffered saline）
RNA：核糖核酸（ribonucleic acid）
dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸
RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应
Taq酶：Taq DNA聚合酶
Ct值：荧光信号达到设定阈值时的循环数

4 仪器与器材
4.1 荧光PCR扩增仪
4.2 高速台式冷冻离心机（≥12000g）
4.3 冰箱（2℃～8℃、-20℃、-70℃）
4.4 分析天平
4.5 组织样品研磨器
4.6 医用剪刀
4.7 镊子
4.8 微量移液器（1000μL、100μL、10μL）
4.9 吸头（对应规格）
4.10 1.5mL离心管
4.11 15mL离心管
4.12 0.5mL PCR反应管
4.13 医用棉签

5 试剂与材料
5.1 Trizol RNA抽提试剂（4℃～8℃保存）
5.2 氯仿（1℃预冷）
5.3 异丙醇（4℃预冷）
5.4 75%乙醇（-20℃预冷）
5.5 DEPC水：去离子水中加入0.1（内容未完整）

6 操作步骤
6.1 样品的采集、保存和制备
6.1.1 采样工具
6.1.2 样品的采集
6.1.3 样品的保存
6.1.4 样品制备

6.2 核酸的提取
6.2.1 裂解
6.2.2 离心
6.2.3 洗涤
6.2.4 干燥
6.2.5 溶解

6.3 RT-PCR检测
6.3.1 反转录反应体系
6.3.2 PCR反应体系
6.3.3 检测条件设置

6.4 结果判定
6.4.1 结果分析条件设定
6.4.2 质控标准
6.4.3 结果描述及判定

附录A（资料性附录）
附录B（规范性附录）：磷酸盐缓冲生理盐水配方、生物安全注意事项