【地方标准】 转基因玉米中cry1A基因定性检测 PCR法

ICS65.020.20 B05 备案号：54204-2017 DB22 吉林省地方标准 DB22/T2527-2016 转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法 Qualitative detection for cry1A genes in genetically modified maize PCR method 2016-12-09发布 吉林省质量技术监督局发布 2017-03-01实施 前言 本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林省农业科学院。 本标准主要起草人：李飞武、邵改革、夏蔚、闫伟、董立明、李葱葱。 1 范围 本标准规定了转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法的术语和定义、原理、试剂或材料、试验条件、仪器设备、样品、试验步骤、结果分析与表述及检出限。 本标准适用于转基因玉米MON810、MON89034、Bt11、Bt176、Bt506、C0030.3.5、双抗12-5转化体及其衍生品种的植株、籽粒及以玉米为唯一原料的玉米初加工品中cry1A基因的普通PCR定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T672 转基因植物及其产品检测通用要求 农业部1485号公告-4-2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA提取和纯化 农业部1861号公告-3-2012 转基因植物及其产品成分检测 玉米内标准基因定性PCR方法 农业部2031号公告-19-2013 转基因植物及其产品成分检测 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 zss/lb基因 zss/lb gene 3.2 cry1A基因 cry1A gene 编码苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）Cry1A杀虫晶体蛋白的相关基因。 4 原理 根据转基因玉米中cry1A基因保守序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期330bp的DNA片段，判断样品中是否含有cry1A基因成分。 5 试验条件 常温条件下进行。 6 试剂或材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682规定的一级水。 6.1 琼脂糖。 6.2 10g/L溴化乙锭（EB）溶液：称取1.0g溴化乙锭溶解于100mL水中，避光保存。警告：溴化乙锭具有致癌性，操作需佩戴手套并妥善处理废液。 6.3 10mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液。 6.4 500mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（pH8.0）。 6.5 1mol/L Tris-HCl溶液（pH8.0）。 6.6 TE缓冲液（pH8.0）。 6.7 50×TAE缓冲液。 6.8 加样缓冲液。 6.9 DNA分子量标准（100bp～1000bp）。 6.10 dNTPs混合溶液。