【地方标准】 贝类中副溶血性弧菌检测 微滴数字PCR法

吉林省地方标准 DB22/T2911—2018《贝类中副溶血性弧菌检测微滴数字PCR法》于2018年11月12日发布，2018年12月30日实施。本标准由长春海关（原吉林出入境检验检疫局）提出并归口，起草单位包括长春海关（原吉林出入境检验检疫局验检疫技术中心）、吉林大学中日联谊医院和吉林农业大学。 本标准起草人包括：聂丹丹、聂海英、王宁宁、杜佳剑、曲辉、彭勃、王玮琳、刘金华、罗雁非、洪晓坤。 本标准的使用人员应具备正规实验室工作的实践经验，并采取适当的安全和健康措施，确保符合国家法规的相关要求。 1. 范围： 本标准规定了贝类中副溶血性弧菌的检测方法，采用微滴数字PCR法，涉及的内容包括试剂和材料、仪器和设备、样品准备、试验步骤及数据处理和防污染措施。该方法适用于贝类中副溶血性弧菌的快速定性检测。 2. 规范性引用文件： 以下文件对本标准的实施至关重要： GB4789.1-2016《食品安全国家标准食品卫生微生物检验总则》、 GB4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》、 GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》、 GB19489《实验室生物安全通用要求》、 GB/T19495.3《转基因产品检测核酸提取纯化方法》、 WS/T230-2002《临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用》。 3. 原理： 微滴式数字PCR平台通过微小油包水体系实现反应体系的分割，根据副溶血性弧菌的旋转酶特异性基因序列对贝类副溶血性弧菌进行鉴定。经PCR扩增后，依据泊松分布原理，通过阳性微滴的个数和比例计算出靶分子的初始数量或浓度，实现快速定性检测。 4. 试剂和材料： 4.1 裂解液：包含2%CTAB、10mmol/L Tris、1.4mol/L NaCl、20mmol/L EDTA等。 4.2 酚/氯仿/异戊醇（25:24:1，v/v/v）。 4.3 氯仿。 4.4 异戊醇。 4.5 无水乙醇。 4.6 异丙醇。