【农业行业标准(NY)】 桑蚕一代杂交种检验规程

NY/T 327- 1997
蚕种的生产和销售一直都由国家和省区统一管理，但是对于蚕种质量及其检验全国至今尚无一个统一的标准。随着市场经济发展，蚕种的省际间、国际间的流通日益频繁，由于没有统一的质量检验标准，各省区的检验方法各异，给蚕种质量的管理带来不便。因此，有必要制定一个统一的质量检验标准来规范蚕种的质量检验。
本标准的附录A和附录B均为标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部农业司、中国农业科学院蚕业研究所、浙江农业大学、浙江省蚕种公司、江苏省蚕种管理所、四川省蚕种管理总站、山东省丝绸总公司、广东省丝绸集团公司。本标准主要起草人：冯家新、沈兴家、许明芬、潘恒谦、叶夏裕、李奕仁、张国平。本标准委托中华人民共和国农业部农业司负责解释。597
中华人民共和国农业行业标准
桑蚕一代杂交种检验规程
The testing rules for F,hybrid eggs of silkworm(Bombyx mori. )1范围
NY/T 327—1997
本标准规定了桑蚕一代杂交种质量检验的检测项目、检测基本要求和结果报告。本标准适用于柔蚕代杂交种的检验。2引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。NY326—1997桑蚕—代杂交种
3定义
本标准采用下列定义。
3.1良卵率
一定数量的蚕卵中，良卵粒数占蚕卵总粒数的百分比。3.2简化催青
丙2-戊2胚胎（催青第1天至第4天）保护温度22℃，相对湿度75%~~80%，自然感光；戊3-已5胚胎（第5天到第10天）保护温度25.5~26℃，相对湿度80%，每日感光18h，孵化前一日遮暗。3.3实用孵化率
调查蚕卵样本中，最大二日孵化的蚁蚕头数占良卵总粒数的百分比。3.4杂交率
调查样本中，标明品种的一代杂交种蚕头数占调查总头数的百分比。3.5母蛾微粒子病率
指带微粒子孢子的母蛾占制种批（段）母蛾总数的百分比。实际检验中按照规定的要求对母蛾进行抽样检验，以检出的微粒子病蛾集团数来衡量。3. 6 微粒子病卵率
带微粒子孢子的蚕卵占制种批蚕卵总数的百分比。实际检验中按照规定的要求对成品蚕种进行抽样检验，以检出的微粒子病卵集团数来衡量。4检验项目
4.1母蛾微粒子病检疫（见附录A）4.2成品质量检验
4.2.1外观检验。
4. 2. 2 卵量检验。
4.2.3良卵率检验。
中国人民共和国农业部1997-12-19批准：598
1998-05-01实施
4.2.4实用孵化率调查。
4.2.5杂交率调查。
4.2.6微粒子病卵率检疫（备检项目）。5检验规则
按制种批抽样检验。
6检验方法
6.1母蛾微粒子病检疫
见附录A。
6.2成品质量检验
6.2.1报检
NY/T 327---1997
越年种在浴消后，即浸种和冷浸种在制种结束后，将品种、批次、数量、用种季别、人库地点等报指定的质检部门检验。
6.2.2抽样
6.2.2.1划批：按制种批划分。
6.2.2.2地点：各蚕种冷库或浸酸点。6.2.2.3时间：即浸种和冷浸种在浸酸后抽样，复式冷藏越年种在中间感温期间抽样，单式冷藏越年种在试催青前抽样。
6.2.2.4方法：在3个以上的样点，以盒（张）为单位随机抽取。6.2.2.5数量：每制种批散卵种10盒以上，平附种10张以上。6.2.2.6样卵保存条件：同原制种批。6.2.3检验
6.2.3.1检验流程(见图1)。
制种批
外观检验
卵量检验
留样备查
每盒良卵数
良卵数良卵率调查
实用孵化率调查
杂交率调查
微粒子检验
图1检验流程
6.2.3.2外观检验：检验散卵种的盒、箱和装盒、装箱的质量，平附种的卵面情况等。6.2.3.3卵量和良卵率检验：将散卵种样卵逐盒称量，同时每盒抽样卵2.00g共20g，混合后平分成两份，其中一份供调查用，另一份留样备查。平附种从抽得的10张样卵中随机抽取两张，其中一张供调查用，另一张留样备查。
散卵种称取3个1.00g样卵，平附种取三个20cm2蚕连纸的样卵，分别调查良卵粒数和不良卵粒数,取平均数。按式(1)计算良卵率、每盒(张)良卵粒数。样卵良卵粒数、
良卵率(%)=
样卵总粒数
散卵种的每盒良卵粒数=平均每克良卵粒数每盒平均重量克数平附种的每张良卵粒数=20cm2良卵粒数×20.(1)
（2）
（3）
NY/T 327--1997
6.2.3.4实用孵化率调查：
a）试催样卵：散卵种从6.2.3.3调查用过的3.00g样卵中称取两个1.00g样卵。平附种从样张中取两个20cm2连纸的蚕卵。
b）试催时间：复式冷藏越年种中间感温后进行，单式冷藏越年种用种前进行，浸酸种漫酸后进行。c）试催条件：春期按简化催青标准催青；夏秋期催青开始第1天到第4天24℃C保护，其他条件与简化催青标准相同。
e）调查计算：样卵孵化后，逐日统计孵化卵数，按式(4)计算实用孵化率。实用孵化率(%)一最大三是品群化卵数、调查卵总数
（4）
6.2.3.5杂交率调查：散卵种从样卵中称取0.50g，平附种从样张中框取10cm2连纸的蚕种进行催青、饲养，不得淘汰各龄迟眠蚕和弱小蚕，统计纯种头数，按式（5)计算杂交率。杂交率(%）=遇查总头数一纯种头数×100.调查总头数
6微粒子病卵率检疫：见附录B。6.2.3.6
7数据修约
卵粒数取整数，百分率按数字修约规则保留两位小数。签发合格证书
对合格蚕种签发合格证书，其格式见表1。表1桑蚕一代杂交种质量检验合格证书检验编号
品种名
制种时间
数量，盒或张
良卵率，%
母蛾微粒子病率,%
外观质量
检验日期
检验单位
(盖章）
生产场名
用种时间
平均每张良卵数,粒
实用孵化率，%
成品卵微粒子病率,%
检验人员（签名）
签证人员（签名）
发证日期
.....(5)
NY/T327—1997
附录A
（标准的附录）
母微粒子病检疫
生产一代杂交种的母蛾实行抽样检验。抽样方案与允许病蛾集团数，系根据NY326的规定，即：病蛾率小于0.5%、判别信赖度大于98.5%（风险率小于1.5%),按统计学原理设计而成。A1母蛾抽样
A1.1制种批和母蛾检疫批的划分凡同场、同品种、同季、同一条件下生产的蚕种作为一制种批，可按制种批抽样袋蛾送检，也可以在同一制种批下分日、分户、按张袋蛾送检。A1.2抽样袋蛾
按表A1、表A2规定的数量随机抽取母蛾样本，装人蛾盒（袋）。蛾盒（袋）上标明生产场名、品种名、批次、峨盒号；采用分段、分户、按张袋蛾的，应注明日、段、户、张号。表 A1 桑蚕一代杂交种母蛾微粒子病检疫抽样装盒规定与合格标准表（散卵种）制
毛种数
25以下
76～100
101～150
151～250
251~500
501~1000
1 001～1 500
1 501～2 000
2 001~～2 500
25013000
3001~3500
35014000
4001~4500
4501~5000
5001～5500
5501～6 000
6001~6500
6 501~7 000
7 001~7500
7501~8000
8001~8500
8 501~9 000
9001~9500
母蛾数
1000以下
1001~2 000
2001～3000
30014000
4 001~6 000
6 001~10 000
1000120 000
20 001~-40 000bZxz.net
40 001~60 000
60 001~80 000
80 001100 000
100 001~120 000
120 001 ~140 000
140 001~160 000
160 001~180 000
180 001~200 000
200 001 ~220 000
220 001~240 000
240 001~260 000
260 001~280 000
280 001~300 000
300 001~~320 000
320 001~340 000
340 001~360 000
360 001~380 000
第一样
本，盒
第二样
本，盒
抽样率
允许病蛾集团数，个
第一样本
第一，三样
毛种数
9501~～10 000
NY/T 327—1997
表A1（完）
第一样
母蛾数
380 001~400 000
毛种按40蛾折合1张，每个蛾盒装30蛾。2母蛾数不满570蛾者，按实际蛾数装盒。本，盒
第二样
本，盒
抽样率
允许病蛾集团数.个
第样本
第一，二样
3先检第样本，检出的病蛾数≤Ci为合格，>C，为不合格，>Ci而≤C2时再检第二样本，第一和第二样本合计检出的病蛾集团数≤C为合格，>C,为不合格。如因毛种折算基数（邸不按40蛾折合张），制种批级差划分不同等，需要改变抽样方案，必须符合病蛾率小于0.5%、判别信赖度大于98.5%的设计要求，并报农业部审查同意后方可进行。表A2桑蚕代杂交种母蛾微粒子病检疫抽样装盒规定与合格标准（平附种）无微粒子
蚕种率，%
病蛾率
无微粒子
蚕种率，%
病嫩率
省级蚕种管理部门同意，生产和使用平附种的省(区),采取此标准。2每一制种批（户）按每一大张一盒抽样，每盒25只母蛾。制种批（户）不足30大张时，应随机抽够30盒。3
无微粒子
蚕种率，%
病蛾率
判别蚕种合格与否，以制种批（户）为单位，若该批(户)蚕种的病蛾率≤1%,即无微粒子蚕种率≥78%，应判为4
合格蚕种,但检出有微粒子孢子的应整张(4 张)润汰;若病蛾率1%,即无微粒子蚕种<78%,该批蚕种判为不合格蚕种，整批淘汰。
同一批(户)分日制种时，若以批计算病蛾率<1%,而其中一日病娥率≥2.74%,应淘汰当日蚕种和其他检出有5
微粒子孢子的蚕种；若批病蛾率合格，而每日的病蛾率<2.74%，则只需沟汰检出有微粒子孢子的蚕种。602
A2母蛾干燥处理
NY/T 327—1997
A2.1母蛾盒分批收集，顺序排列，摊放于通风干燥的室内，袋蛾5天后烘蛾；即浸种可在5天后送检。A2.2烘蛾温度不得超过71℃。
A2.3每蛾干燥程度以蛾头胸干燥，胸腹部稍软为宜。A2.4烘干的母蛾要及时清理捆扎，妥善保管，及时送指定的检验单位检疫。A3 母蛾盒验收
填写送检母蛾盒清单一式二份（见表A3），双方签字后备存。严格查验，凡蛾盒填写不清，批号、盒号错乱，批袋蛾盒数未达要求的及有发毒、虫蛀、鼠咬、烘焦和其他不符合规定的，检验单位应拒收，该批种作不合格种处理。
桑蚕一代杂交种送检母蛾清单
场名：
品种名
制种型式
越年种
生产数量
即漫种
冷浸种
估计净种
估计净种
估计净种
送检蛾盒数
A4检疫方法
集团磨蛾检疫。
A4.1检疫程序
1.本表一式两份随同蛾盒送检疫单位验收，其中一份经验收盖章后返回生产单位。
2.即浸种母蛾每日送检冷浸种和越年种在全部制种结束后一次
送检。
抽样编号→拆盒投蛾→注液磨碎→静置过滤一→离心沉淀→振荡取样一→制片镜检一→复检一→记载结果。
A4.2操作步骤
A4.2.1抽样编号：按要求抽取第一样本（包括苗、末蛾)进行编号A4.2.2拆盒投蛾：按每盒母蛾为一集团投蛾。拆开蛾盒检查袋蛾情况，若符合条件，则将母蛾全数投人磨蛾杯内，撕下蛾盒上写有批号的盖纸连同编号，随磨蛾液传递，避免错乱；若该盒母蛾未装满，则不予以镜检并作记载，再从第二样本中抽补。A4.2.3注液磨碎：在磨蛾杯中如注0.5%碳酸钾（或0.5%碳酸钠）溶液80~~90mL、磨碎后取出（如磨蛾转速为8000r/min，蘑蛾时间应不少于90s）。A4.2.4静置过滤：静置2min后，将蛾液倒人有过滤材料的漏斗内过滤，禁止用棒搅动，加水校正离心管液量。
A4.2.5离心沉淀：离心沉淀3min（3000r/min），倒去上层清液，在沉淀物中加人1%～2%氢氧化钾溶603
液1ml
NY/T 327--1997
振荡取样：离心管内液体经振荡后，每管取4个样本。A4.2.6
A4.2.7制片镜检：按规定将上述4个样本制2个镜片标本，用600倍以上显微镜两人对检，每人检两个样本，每个样本观察不少于5个视野，若对检结果不一致，应复检确认。A4.2.8记载结果：将镜检结果准确填人镜检单（见表A4），有微粒子孢子者用“十”，无微粒子孢子者用“—”。
表A4桑蚕一代杂交种母蛾检疫单年
有微孢子蛾号
检验蛾数
清洗消毒
生产场名
品种名
初检员
检验时发现微粒子孢子，立即用盐酸或1%有效氯漂白粉液对污染用具浸消30min后，用清水冲A5.1
洗干净备用。
A5.2检验室工作人员要更衣、换鞋人室。A5.3检验室每天用含有效氟1%漂白粉液洗消用具及地面；每周定期对用具、门窗、地面及室外环境进行清理、消毒。
A6合格标准与签证
A6.1合格标准
见表A1、表A2。
A6.2签证
检验单位向生产单位出具蚕种母蛾检验证书（见表A5)，并按合格蚕种数量配发“蚕种检验合格证”。
生产场名
抽样盒数
微粒子病率,%
B1抽取样卵
表A5桑蚕一代杂交种各场批母蛾检验情况表品种名
有微粒子盒数
检验组别
附录B
（标准的附录）
成品卵微粒子病检疫
在6.2.3.3供调查的份（10g）样卵中，其中3g已用于实用孵化率、杂交率等的调查，其余7g则用于微粒子病卵率的检验。
B2检验方法
NY/T 327--1997
B2.1将上述7g样卵分别装入7个小棉纸袋中，每袋1g卵。粘贴在硬质纸上，标明生产场名、品种名、批次、数量。
B2.2将上述活性化的蚕种置于29℃，相对湿度85%以上的环境中催青。待孵化的蚁蚕在高温多湿中自然死亡（4天)后进行检验。
B2.3根据制种批的大小和第-、第二样本数量的要求（见表B1）,将每一纸袋的死蚁放于17～18个乳钵孔中（根据克卵粒数而定），每孔约100头蚁蚕即一个集团，用乳棒将蚁蚕磨碎。然后，滴人4～10滴2%氢氧化钾溶液再细研磨。
桑蚕一代杂交种成品卵微粒子病检疫抽样规定与不合格判定标推表B1
批蚕种数量
盒或张
50以下
51～100
101~500
501～1000
1001～1500
1501～2000
2001以上
抽检蚕卵集团数，个
第一样本
第二样本
不合格判定标准
病卵集团数
第一检
信赖度、%
第二检
1第一样本检查完毕后，如果没有检出病卵集团，则判该批蚕种合格，不作第二次检查；如果检出的病卵集团数达到表列不合格判定标准，则判该批为不合格，也不作第二次检查。2第-一样本检出的病卵集团数未达表列不合格判定标准，则检查第二样本。两次检出的病卵集团个数合并计算，如果仍未达表列不合格判定标准，则该批蚕种判为合格；否则，判为不合格。B2.4按乳钵序号点板制标本两套，送初检员2人对检，每个样本观察不少于10个视野。B2.5初检无微粒子孢子的样本按每小板（14个乳孔）点盘制标本由复检员复检，复检无微粒子孢子，则通知冲洗，有微粒子孢子，则通知初检人员重新点板回查。B2.6初检有微粒子孢子的样本送复检员复核，并登记（见表B2)。表B2桑蚕一代杂交种各场批成品卵检验情况表生产场名
抽样盒数
微粒子病率，%
消毒冲洗。
整理原始记录。
B3 不合格判定标准
见表B1。
品种名
微粒子孢子盒
合格与否判别
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