【地方标准】 猪丹毒（红斑丹毒丝菌）PCR鉴别诊断技术规程

ICS 65.020.30
CCS B41
DB42/T 1594—2020
湖北省地方标准
猪丹毒（红斑丹毒丝菌）PCR鉴别诊断技术规程
Technical procedures of PCR differential diagnosis for detection of virulent and avirulent swine erysipelas (Erysipelothrix rhusiopathiae)

2020-07-07发布
2020-11-07实施
湖北省市场监督管理局 发布

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的规则起草。本文件由华中农业大学提出，由湖北省农业农村厅归口管理。本文件起草单位：华中农业大学、武汉科前生物股份有限公司。本文件主要起草人：金梅林、吴超、朱伟峰、孙小美、范俊青、康超、徐高原。

本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅（电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com）或华中农业大学（电话：027-87282038，邮箱：xys@mail.hzau.edu.cn）。对本文件的修改意见建议请反馈至华中农业大学（电话：027-87286905，邮箱：jml8328@126.com）。

引言
猪丹毒是一种重要的人畜共患病，由红斑丹毒丝菌（俗称猪丹毒杆菌）引起，可导致生猪从业人员感染甚至死亡，同时造成养猪业重大经济损失。为实现对该病的快速诊断及疫苗株与野毒株的鉴别，制定本PCR鉴别诊断技术规程，建立基于双重PCR的分子检测方法，可同时鉴定临床分离株并区分疫苗株与野生型菌株，为早期发现、报告和处置提供技术支持。

1 范围
本文件规定了猪丹毒（红斑丹毒丝菌）PCR鉴别诊断技术的术语与定义、检测原理、检测条件、检测方法、结果判定及注意事项。本文件适用于猪丹毒（红斑丹毒丝菌）的鉴别诊断。

2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。

3 术语与定义
3.1 双重PCR法（duplex PCR）：在同一PCR反应体系中加入两对引物，对两个DNA模板或同一DNA模板的两个不同区域进行扩增，最多可同时扩增两条核酸片段的PCR方法。

4 检测原理
利用红斑丹毒丝菌疫苗株G4T10和GC42与野毒株在DNA聚合酶IV基因上的差异，设计疫苗株特异性引物，并结合猪丹毒杆菌种特异性引物，建立双重PCR体系，实现对猪丹毒菌株的快速检测及疫苗株与野毒株的鉴别。

5 检测条件
5.1 实验室：实验操作宜在室温条件下进行。

5.2 仪器及耗材：PCR仪、琼脂糖凝胶电泳仪、组织研磨仪、凝胶成像系统、电磁炉、微量移液器（0.1μL–2.5μL、0.5μL–10μL、5μL–50μL、10μL–100μL、100μL–1mL）、离心机（12000 rpm）、恒温箱（37℃）、水浴锅（55–60℃）、电子天平（0.01g–300g）、离心管（0.2mL、1.5mL）。

5.3 试剂
（略）