【地方标准】 羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范

新疆维吾尔自治区地方标准
DB65/T3893—2016
羊布鲁氏菌病监测样品采集技术规范
Technical code of the collection and technical specification of the sample for sheep brucellosis supervision
发布日期：2016-06-10
实施日期：2016-08-01

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。本标准由乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心和乌鲁木齐市米东区畜牧兽医站提出。本标准由新疆维吾尔自治区畜牧厅归口。本标准主要起草人：李爱巧、蔡扩军、吴星星、王涛、陈娟、何生、施远翔、王爱菊、程维疆、赵军、帕提玛、赵庆、范玉娟、李惠、李烈刚。

1 范围
本标准规定了羊布鲁氏菌病采样的术语和定义、采样准备工作、消毒压尘、样品采集和编号、采样单填写、样品包装、保存和运送的技术要求。本标准适用于羊布鲁氏菌病诊断、监测、流行病学调查时样品的采集、保存、运送。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 16548

3 术语和定义
病害动物和病害动物产品生物安全处理规程。下列术语和定义适用于本文件。
3.1 布鲁氏菌病 (brucellosis)：布鲁氏菌病（也称布氏杆菌病，以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患的传染病。我国将其列为二类动物疫病。
3.2 动物疫病 (animal epidemic)：主要指生物性病原引起的动物发病性特征，包括动物传染病和寄生虫病。
3.3 动物防疫 (animal epidemic prevention)
3.4 样品 (sample)：取自动物或环境、拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。
3.5 诊断 (diagnosis)：通过观察和检查对病例的病性和病情作出判断。
3.6 血清学监测 (serological detection)：利用抗体和其对应抗原之间发生专一性反应的一种检测方法。
3.7 微生物学诊断 (microbiological diagnosis)：用微生物学方法检查和鉴定病原体，对疾病作出诊断。
3.8 消毒压尘 (disinfection and dustproof)：通过喷雾的方式消毒，以减少空气中飞扬的尘土，消灭尘土中携带的病原微生物，达到消毒和降低尘土颗粒的数量，防止病原微生物通过附着在尘土上被人吸入而感染疫病。

4 采样准备工作
4.1 基本要求
4.1.1 采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具和一次性采血器的使用，掌握羊组织样品和血清样品等的正确采样方法，具有基本的生物安全意识和自我保护意识，采取必要的自身防护措施。羊保定人员必须熟悉羊的脾气和习性，掌握正确的保定方法，防止受到羊的攻击和其他伤害。
4.1.2 采样人员和消毒人员必须掌握消毒药的配制和消毒喷雾器具的正确使用，保证消毒灭菌效果。
4.2 采样器具
4.2.1 组织病料采集器具：采样箱、解剖刀、小型解剖斧头、剪刀、有齿镊子、酒精灯、75%酒精棉球、碘酒棉球、一次性注射器及针头、盖片、培养皿、大小不同规格的封口袋（或采样袋）、5mL/10mL的离心管、棉签和塑料包装袋等。
4.2.2 血样采集器具：采样箱、弯剪、有齿镊子、75%酒精棉、干棉球、5mL（9号针头）一次性采血器、1.5mL~5mL塑料离心管、大小不同规格的封口袋（或采样袋）等。
4.2.3 冷藏器具：保温箱、出诊箱、冰袋等。
4.2.4 消尘器具：大小不等的喷雾器、喷壶等。
4.3 记录物品
防水记号笔（蓝色或黑色）、碳素笔、不干胶标签、采样单、记录本、记录纸板、家畜标识阅读器等。
4.4 防护物资
消毒药品、N95口罩、一次性乳胶手套或耐酸碱橡胶手套、一次性防护服、防护帽、胶鞋或一次性防水鞋套、护目镜等。

5 消毒压尘
5.1 选择消毒药
消毒药品选用烧碱、醛类、氧化剂类、氯制剂类等。如2%~3%火碱溶液（又叫烧碱、氢氧化钠）、0.3%新洁尔灭、3%~5%来苏儿、0.2%~2.5%石灰粉、含氯制剂的消毒药等。消毒药每隔1周或2周要定期更换，防止细菌产生耐药性。
5.2 配备消毒药
不同的消毒药按照各自的说明书进行配备。
5.3 喷酒消毒
对羊圈舍、场地等，可采用消毒液喷洒或用盆泼洒等方式消毒；以地面完全湿润为宜。

6 样品采集和编号
6.1 基本要求
6.1.1 做好消毒工作
6.1.1.1 采样人员采样前要穿戴好工作服、帽子、N95口罩、护目镜、乳胶手套、胶靴或一次性鞋套，有条件具备紫外线消毒灯的，在进入羊圈前要进行紫外灯照射3min~5min。
6.1.1.2 采样结束后，离开感染或可能感染场地，对场地及其设施进行彻底消毒。在场内或处理地的出口处脱掉一次性防护装备，将脱掉的防护装备和包装袋等废弃物置于容器内进行消毒处理或焚烧或深埋等无害化处理。在离开羊圈和处理地后，有条件的要进行紫外灯照射3min~5min，还要对可多次使用的工作服、帽子、胶靴和器械等采用浸泡、喷洒、洗涤等消毒方式消毒；工作人员的手及皮肤裸露部位应清洗、消毒。
6.1.1.3 采样物品和器械的消毒：刀、剪子、镊子等用具煮沸消毒30min，使用前用酒精棉球擦拭，同时点燃酒精棉球进行火焰消毒。培养皿、试管等玻璃器皿和封口袋（或采样袋）等塑料制品经103kPa高压30min后备用，采血器一般使用一次性采血器和针头。采集过病料的用具应先消毒再清洗。
6.1.2 做好个人防护。进入感染或可能感染羊布病的场点，必须做好个人防护工作，同时注意防止针头刺伤，严防人畜共患病的感染。
6.1.3 发现疑似患羊急性死亡、天然发病、出血、血凝不良、尸僵不全等疑似炭疽时，禁止随意解剖病羊。排除炭疽后方可采样。
6.1.4 采集羊内脏病料时，最好在扑杀后即采（死亡后6h内采集），采集后的病害肉应按照GB 16548处置。
6.1.5 采样应注意场地的顺序，先到规模养殖场，后到散养户；先到羊群健康的养殖户，后到羊群发病的养殖户。采样过程注意无菌操作，避免交叉污染。
6.1.6 健康监测：所有暴露于感染羊布病和可疑羊布病养殖环境的人员均属高危人群，应接受当地卫生部门医学监测：出现波状热、乏力、关节痛等临床症状的要及时到当地卫生部门做布病检测。
6.2 采集血清样品
6.2.1 采样方法：一般使用5mL一次性采血器（9号针头）在羊的颈静脉处采集羊血样。采血前在羊的颈静脉沟1/3与中1/3交界处的皮肤先剪毛，用75%酒精棉球消毒，一手拇指按压采血部位下方的颈静脉沟血管，促使颈静脉怒张，待采血部位干燥后，另一手使用一次性采血器，与皮肤呈45°角由下3