【地方标准】猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法

本网站发布时间： 2026-03-24 14:13:26

DB21/T2325-2014
现行
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基本信息

标准号：
DB21/T 2325-2014
标准名称：
猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法
标准类别：
辽宁省地方标准(DB21)
标准状态：
现行
发布日期：
2014-07-05
实施日期：
2014-09-05
出版语种：
简体中文
下载格式：
.pdf .zip
下载大小：
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标准分类号

标准ICS号：
11.220
中标分类号：
B41

关联标准

出版信息

其他信息

起草人：
于学武,谷志大,赵晓彤,陈瑶,赵凤菊,赵培等.
起草单位：
辽宁省动物疫病预防控制中心,辽宁省动物医学研究院
归口单位：
辽宁省畜牧兽医局
发布部门：
辽宁省质量技术监督局

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标准简介：

标准内容

部分标准内容：

ICS 11.220
B41
辽宁省地方标准
DB21/T 2325—2014

猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 检测方法
Method of RT-PCR for the detection of transmissible gastroenteritis virus

2014-07-05 发布
2014-09-05 实施
辽宁省质量技术监督局 发布

前言
本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出，由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准起草单位为辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。本标准主要起草人包括于学武、谷志大、赵晓彤、陈瑶、赵凤菊、赵培、闫明媚、兰德松、关乃鹏、关淼孙世宇、华泽军、刁贺军、王志国。

1 范围
本标准规定了猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus，TGEV）RT-PCR 检测方法的技术要求。本标准适用于猪传染性胃肠炎的诊断和监测，适用于猪肠内容物、粪便以及细胞培养物中 TGEV 核酸的检测。本标准中的试验操作应在生物安全 II 级（BSL-2）以上的实验室进行。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。兽医实验室生物安全技术管理规范。

3 缩略语
下列缩略语适用于本标准：
TGEV：猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus）
DEPC：焦炭酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate）
RNA：核糖核酸（ribonucleic acid）
DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）
bp：碱基对（base pair）
RT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction）
Taq 酶：Taq DNA 聚合酶（Taq DNA polymerase）
dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）
AMV：鸟类成髓细胞白血病病毒（avian myeloblastosis virus）
PBS：磷酸缓冲液（phosphate buffer solution）
TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（tris acetate-EDTA buffer）

4 原理
TGEV 是一种 RNA 病毒。RNA 经反转录生成 cDNA 后可作为 PCR 模板进行扩增。根据相关保守基因序列设计一对引物，在 DNA 聚合酶催化下，以母链 DNA 为模板，以引物为延伸起点，通过变性、退火和延伸过程，体外复制出与母链模板 DNA 互补的子链 DNA。

5 仪器和器材
本技术规范中需使用的主要仪器和器材包括：高速台式冷冻离心机（最大离心力 12000 g 以上）、冰箱（2～8℃、-20℃ 和 -70℃）、PCR 扩增仪、电泳仪、凝胶成像系统、微波炉、分析天平、1.5 mL 离心管、0.2 mL 离心管、微量移液器及吸头。

6 试剂和材料
6.1 Trizol：RNA 抽提试剂，外观为粉红色，分装至棕色瓶中，于 4～8℃ 保存。
6.2 氯仿：4℃ 预冷；异丙醇：4℃ 预冷。
6.3 75% 乙醇：用新开启的无水乙醇和 DEPC 水配制，-20℃ 预冷。
6.4 DEPC 水：在去离子水中加入 0.1% DEPC，37℃ 作用 1 h 后，于 121±2℃ 高压灭菌 15 min。
6.5 RNA 酶抑制剂（40 U/μL）。
6.6 DNA 聚合酶：HSTaq DNA 聚合酶（5 U/μL）。
6.7 dNTP（10 mmol/L）。
6.8 用于 RT-PCR 反应的引物浓度为 20 μmol/L，其序列如下：
上游引物 F：5'-GTGGTCGGAAGAGTAATAACATAC-3'
下游引物 R：5'-CAACCCAGACAACTCCATCTA-3'
6.9 反转录酶：AMV 反转录酶（5 U/μL）。
6.10 反转录引物：Oligo dT-Adaptor Primer（2.5 μmol/L）。
6.11 阴性对照：DEPC 水。
6.12 阳性对照：TGEV 细胞培养物。
6.13 PBS：磷酸盐缓冲液（0.02 mol/L，pH 7.2）。
6.14 TAE：三羟甲基氨基甲烷-乙酸电泳缓冲液。
6.15 溴化乙锭。
6.16 DL2000 DNA Marker。
注：除另有说明，所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无 RNA 酶的容器分装。

7 操作步骤
7.1 样品的采集、前处理、存放和运送
7.1.1 采样注意事项（后续内容略）

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