【国家标准(GB)】 饲料添加剂 蛋氨酸铁(铜、锰、锌)螯合率的测定 凝胶过滤色谱法

ICS65.120
中华人民共和国国家标准
GB/T13080.2-—2005
饲料添加剂
蛋氢酸铁（铜、锰、锌）
鳌合率的测定
凝胶过滤色谱法
Feed additive-Determination of chelation percentage of iron.copper.manganese and zinc methiunine-Gel filiration chromatography2005-09-05发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2006-02-01实施
本标确县在国内生产交际基延上研究制定的：本标准由全国司料工业标准化技术委员公提山并归口，GB/T 13080.2—2005
牛标准起草单位：国家恒料质量监督检验宁心（武汉），沙兴落生物工程有限公可、州康瑞曾物术有限公司
本标准主卷起草人：朽林、杨海丽，杨先垒刘贤荣，费遍强，陈蓝，免心.1范围
饲料添加剂蛋氨酸铁（铜、锰、锌）蜜合萃的测定凝胶过露色谱法Www.bzxZ.net
CB/T 13080.2—2005
本标准规定广用凝晓白讲法测定些氮酸、基录融与川溶性钛，制、适、针盐反查生店的叠合哟型合座的为法，
本推用于蛋氧铁、氧漏、氨酸链，氨酸锌、蛋氧酸铁、管不血酸铜、轻基锰，轻基蛋氨酸针等整合物整合的测定。2规范性引用交件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。层孕注斗期的小用大件，其随后所有的偿改单（不包括兼说的内膏）成稳订版与不适用于木标准，然而歧励根据本标准去成协议的务方研究忌可使用这些文件的最新版本。凡是不正口期的弓用文件，其款版适用于本标准。GH1652分析实验室出水规格和试验方法（ne15）3656：a87GB/T3885饲料中铁，铜，锌，诺测定原子吸收光讲法G/T14594.1淀料深洋
3原理
试样在水中加热，离心店，分成次淀和落策必部分，率该中所含的可据性氮基酸整台物及金属离于经过激胶分离，在规定条件下洗总，金减离下形截乱化物况流，将别定在凝胶壮预无法院脱.可落作氨基酸案台物别可通过配体额基酸的携从题改杜正洗脱下来，实现和金属两子的分商；可溶性氮基酸梦合物洗脱分离完成后，圳人EDTA游藏院脱：使金底子从色谱工脱、用原于吸收光谱法测定沉淀态氨基燃介物，率性驾基限整今物改金属离广的合含长、分别计异山沉稳态氟基践鉴合物、可落此领政整合物占金元或总最的比例即可计件出相应的数函性整合物的。4试剂和溶游
实收水应符合GB/工SS52中一疑用水的规格。所用试剂除特殊规定，均为分析纯。4.1负载化钠宰满eOH)=0.=0./」：称取2.39g氧化钠落300.水中，设列。4.2彻致溶微[c([I.B0）=0,4mel/1.，你及12.28g谢酸率于500ml.水中，混4.3氯化评游液U2nsl/L]称取7.45g氛化钾率十500ml.水水.混勾4.4洗脱液的配制
4.4.12[I7.U的洗脱液：分别量取1,1.氧系化钠游波（.11,12.5ml部溶疫（1.2).12.5mL案4.3）许人10Cm各域瓶，用水精辉至刻度4.4.2PIIU.的洗脱减，分划量收2C.8ml.或氧比钠溶液（4.1).12.5m.T.调酸培液（4.2）12.5mL氧化钾落液（4.3\，注人10JmL容草版，用水辑挥率舞改.4.4.3TT10,:前铁脱液，分别且取43.7:L氢氧化钩熔效（4.1>.12.5L机牌落液（4.2).12.5mI氛化钟率没<1.3).让人二3)mT.容量顺，月水棒释至刻度，4.5乙二腰四乙载二钠（ELYTA>游设（EDT4)=0.1:n1/IJ：称取37.乙二胺四乙酸二钠加热落于水中混
GB/T 13080.2—2005
4.6葡聚恢凝改：G-15
2.7盐资随：将1述租的证酸加人到11体积的水中，混对5夜准
5.1温签锅，33℃80可调。
5.2原子吸收分光光度：波长满固~9ml，5.3离心机：3Jo/min
5.4色谱柱：f300mm，内径4ml
5.5恒流泵。
6试样制备
按B/T14斤99，1取有代表生的栏品至少2kg用四分法缩减室约250.粉碎过0.2mn孔筛，混勾·装人样品瓶内出保，备开7测定步累
7.1试样预处理
称联试样.输确到0000直于25m离心管小，人15m水干60水浴加热30min，不搅半，使试样充分落解，用离心机于3ouu=/mir.离心1Cmin将上清液小心人25ml，容或瓶中沉淀分用41ml.热本（50线禁高心三次，上清液一并移人251mL容量制中，定穿，到以淳性氢基酸整合物致离企高尚子溶液，称为第减A。沉淀月10mL盐能密液（4.7)落解转入另一25客卓瓶中，水部车！要，沉济态氮基限整合物联链，称为落波H，7.2凝胶色谱
7.2.1凝胶的制备
称取约1ugG-15凝胶(4,于50r:1.水中，源一张3h以上，配制成疑胶总浮液.7.2.2凝腔的转柱及平衡
将色谱性垂直安装在无点接光照射好，加人PH7.0<1，1.1)疏脱滋·除大气跑，气滤除尽后立即关闭出门开关沿戒璃样将非退气泡另龄胶总浮满（7..1）一饮瓯人色落在内，得凝效拿部倾人样内后，启柱下面的出口并关，使凝胺自始沉降《注意不得流十）控制胶部分民境在1m~2L：接上恒流泵，并自杆下国市口开关，用约mLE7.3洗脱液（1,.1涤凝胶。7.2.3上样
准白洗说液至敲腔表面迟于筑下，关用出山开关：用吸管移取.2ml.溶策A（7)，吸管上离%胶表配约，m，小心人，快之均匀游人极腔衣山，打非出口开关·用少量先脱被小心洗涤注用及残在象股麦而的坏品：理人洗脱法，井接上柜流充：沈定钢，缺，许的菜台物时，用P119，0洗脱炭（1.4.2)测定适的数合物时：用2H11,0)洗脱陷（4.4.3)7.2.4洗脱分离
7.2.4，1可溶性暨合金需元本的分离H扫应pH的流脱策选脱，流递步t,7tL/ttin，收共洗出组分约10CmL，定容至1Ccml，得可溶性氢量酸整合物籍较，你为拆液！7.2.4.2游离态金属两于的分属
范性氧单禁合物分离完成片，在与增在端用吸管人1rT.ELIIA溶批（4.5:，用pH?.C选脱液（4.4.1)继锁洗脱、合并所自洗出织分，京率至120m1得金属商率液陈为游液T)8剐定
将下旁液A(7.1)、器胶B7.1).液7,2,.1)、游液D(7.2.4,2)稀释至一定浓度（禅释倍数规含目而定，要（H门138上机测定·分测定器液中金元末的含显9整合率的计算
组草醛资合物整合率按成（)计算：GA/T13080.2-20G5
X-(cv.-ey*c.v.+cyTvTav)
Jxluu%
式中：
X一氨基整会物整合率,
C心心——分别为A.I..I>潜兼中金属离子的，单位为微克每笔（Pm)：W.V,V—分则为A,,、r>落波的体积：位为在忽性条件下获得的两次融立测试结果的绝对差值不大一这两个求值能节不不与值的三为以人十这尚个测定值的算术半均值的%闪作不运过5%为前提。
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