【地方标准】 脱毒马铃薯制种及生产技术规程

DB63/T2359—2024
脱毒马铃薯制种及生产技术规程

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由青海省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：青海大学农林科学院（青海省农林科学院）、海东市乐都区农业技术推广中心、湟中区农业技术推广中心、互助县农业技术推广中心。本文件主要起草人：纳添仓、蒲秀琴、董宇、张纲、徐淑华、叶广继、刘世安、王生财、祁玉梅、陈贤龄、祁生兰、贺双成、王毅、何春玉、青山、张建华、马长凤、祁惠莲、李淑贞。本文件由青海省农业农村厅监督实施。

1 范围
本文件规定了脱毒马铃薯制种及生产的术语与定义、环境条件、脱毒组培苗的快繁、原原种生产、原种生产、一级种、二级种的生产、质量检验、产地检疫、定级标准、生产档案和标签等技术。本文件适用于脱毒马铃薯制种及生产。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 3095 环境空气质量标准
GB 5084 农田灌溉水质标准
GB 15618 土壤环境质量 标准（试行）
GB 18133 农作物种子标签通则
GB/T 8321 马铃薯种薯产地检疫规程
NY/T 401 肥料合理使用准则通则
NY/T 496 农药合理使用准则（所有部分）
NY/T 1276 农药安全使用规范总则
NY/T 1606 马铃薯种薯生产技术操作规程
NY/T 1962 脱毒马铃薯种薯（苗）病毒检测技术规程
NY/T 2678 马铃薯纺锤块茎类病毒检测
NY/T 2744 马铃薯纺锤块茎类病毒检测核酸斑点杂交法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 脱毒组培苗：简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒和PSTVd的再生试管苗。
3.2 脱毒种薯：用脱毒苗经逐代繁殖种薯生产体系生产出来的各级种薯。脱毒种薯分为原原种、原种、一级种薯、二级种薯。
3.3 原原种：用脱毒组培苗在防虫网、温室等隔离条件下生产，经检测符合GB 18133要求的，用于原种生产的微型种薯。
3.4 原种：用原原种做种薯，在良好隔离条件下生产的，经检测符合GB 18133要求的，用于生产一级种薯的种薯。
3.5 一级种：用原种做种薯，在相对隔离条件下生产的，经检测符合GB 18133要求的，用于生产二级种的种薯。
3.6 二级种：用一级种做种薯，在相对隔离条件下生产的，经检测符合GB 18133要求的，用于生产商品薯的种薯。

4 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
PVX：马铃薯X病（Potatovirus X）
PVY：马铃薯Y病（Potato virus Y）
PVS：马铃薯S病毒（Potato virus S）
PVM：马铃薯M病毒（Potato virus M）
PVA：马铃薯A病毒（Potato virus A）
PLRV：马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus）
PMTV：马铃薯顶病毒（Potato mop-top virus)

5 环境条件
制种基地环境空气质量符合GB 3095要求，农业灌溉水质符合GB 5084要求，土壤环境质量符合GB 15618要求。

6 脱毒组培苗快繁
6.1 脱毒组培苗的培育
6.1.1 材料选择：选用生产上主栽的优良品种块茎的休眠芽、刚出土幼苗的茎尖或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。
6.1.2 培养基制备：在每1000ml MS培养基中加GA 0.2mg~0.3mg、6-BA 0.1mg~0.2mg、NAA 0.01mg~0.05mg、泛酸钙1.5mg～2.5mg，pH值调至5.8~6.0之间，分装入管（瓶）。
6.1.3 灭菌：121℃压力下高温灭菌20min，冷却备用。
6.1.4 茎尖剥离接种：将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗1h后，在无菌条件下，放入70%～75%酒精中浸20s～30s，再用0.1%升汞液消毒8min～10min（或用3%次氯酸钠液加2滴～4滴吐温振荡消毒15min～20min），取出用无菌水充分冲洗3次～5次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解部镜下用手术刀等工具快速地剥去幼叶，切取带1个～2个叶原基（0.1mm～0.4mm）的生长点，迅速接入装有茎尖分化培养基的试管或培养瓶中，每管（瓶）放1个生长点。注明品种、茎尖号、接种期。
6.1.5 培养条件：日温20℃，夜温15℃，光照时数12h/d～14h/d，光照强度2000lx～3000lx条件下培养。
6.2 病毒检测
6.2.1 检测方法：PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测，无阳性反应再用指示植物鉴定。PSTVd用往复向聚丙胺凝胶电泳法 (R-PAGE) 或聚合酶链反应 (PCR) 检测，鉴定筛选出不带PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM/PVS 和 PSTVd 的脱毒苗。
6.2.2 脱毒苗复检：继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少进行一次病毒复检。
6.3 脱毒苗组培快繁
6.3.1 脱毒组培苗来源：经6.2.1检测合格的脱毒苗。
6.3.2 培养基：MS培养基，121℃压力下高温灭菌20min，冷却备用。
6.3.3 快繁：将脱毒苗剪切成1.0cm～2.0cm，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上，每瓶培养基接种10个~15个茎段，待茎段长成高10.0cm左右小苗（培养15d~30d），进行切段转接，反复继代培养繁殖。