【教育行业标准(JY)】 光栅型荧光分光光度方法通则

现代分析仪器分析方法通则
光栅型荧光分光光度方法通则
JY/T025--1996
Geueral rules for grating fluorescence spectrophotometry1997-01-23发布
1997-04-01实施
本标雅是根据GB/T1.1--1993标雅化工作导刚第1单元：标准的起草与表述规则第1部分：标准编写的基本规定\和GB/T1.4883标准化.工作导期化学分析方法标准
编写规定综写的
本标推起草单位：国家教育委会本标准主要起章人，田笠
本标难率加起草人：贝
方法原理
试剂和材料
分析步骤
分析结果的表述
安全注意事项
光栅型荧光分光光度方法通则
General rules for grating fluoresteace spectrophotometry1范围
JY/T025--1996
本通则规定了一般样品（液体、周体）中的金剧和有机成分的荧光分光光度分析方法，适用于食品、卫生、农业，环境等方面的一些样品分断。2定义
2、1荧光物质
fluvrescence material
能显示或易察凳荧光的分子称作荧光物质，通常指具有刷性结构和平面结构的元电子共轭体系的分子或带有共轭效键的分子。flutoresrence emission spectrum2.2荧光发射光谱EM
选择基一固定波长的光激发样品，记录样品中产生的荧光发射燃度与发射波长间的函数关系，即得荧光发射光谱。
fluoresceuce exitatian spectrum2.3荧光激发光谱Ex
选定某一荧光发射波长记录荧光发射强度作为激发光波长的函数，即得费光潮发光谱calibration spectrum
2.4校正光增
由十荧光测量仪器的特性-例妞光源的能量分布、单色器的透射率和检测器的响应等性能会随波长而变，所以同化合物在不同的仪器上会得到不同的光谱，直彼此间无类比性，这种光谱称为“表观光谱，要使间一化合物在不同仪器上能得到具有相同特性的荧光光谱，则蒂要对仪器的上述特性避行校正，经过校正后的光谱称为校止荧光光落（亦称真正的荧光光谱）。3方法原理
物质被其一波长的光照射后，会发射出比被长精长的光，选种光称为费光，它的过逛是当物质的分子处于基态时，吸收光后，可跃迁到激发态，各激发态分子相互撞击而以无辐射能量损失的形式回到第一激发态的最低操动能级，这一搬动懒级的分子在返国基态时，所发射的光称为荧光，俱当它转入亚稳的二重线级，停留一段时间，返回至基态时所发出的光称为光，荧光（磁光）与物质浓度的关系为F-K',(-e*)
式中—荧光强度
仪器常数
P -量子效率
I。激发光度
——荧光物质的障尔吸收系数
每豪教育叠员会1997-01-22批准1997-04-91 实期
I—荧光池厚度
心—-荧光物质浓度
JY/F 025—1996
对于给定的物质来说，当激发光的被长、强度、荧光池厚度一定滋度较低时，巨述关系可以简写为
即荧光强度与所测定的荧光物质浓度成比例，由此可求出所测定物质的含量。4试剂和材料
4. 1 硫酸分析纯
4.2硫酸牵宁分析纯
4.3硫酸奎宁标准溶液p=l.00×10*g/ml。含硫酸C(H,S,）=0.05mol/L。4.4其它试剂和材料根据所测试样品婴求而定5仪器
6，1光栅型荧光分光光度计（以下简称仪器)结构仪器结构原理如下图所示，光源与检测器戚真角方式安排。光源
激发单色器
样孟室
发射单色器
检洲馨
纹霉结构原理图
记球役
5.1，1光源：仪器的光源有高压汞蒸气灯利氙骤灯，后害能发射出强度较人的连续光谱，直在300mm~400nm范围内强度几乎等，故较常用，5.1.2单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器第·一谦色罄，罩于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光桥为单色器。5：1.3样品室：通常由右英池（液体样品用）或固体样品架（粉或片状样品）组成，测量核体时，光源与检测器成克角安排，测量固体时，光源与检测器成锐角安排。5.1.4检测器：一般用光电警或光电倍增管作检测器。5.2仪器技术指标见表1.
表 1 核术指标
波长准酶度
波长重复性
检出阻Www.bzxZ.net
技术指标
≤±0.5mm
5.0g/ml×10-g/ml
计整类别
线性误差
信噪比(S/N）
光诺拉正误差
黄光池成套性
5.3环境紊件
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鼓术指标
≤±2. 095
参照出厂说明的指标，已测出检出限的器，可不进行此项检定带光诺校正的这类仪器在指定光诺校正的波长范母内进行校正配套便用的荧光滤的配变误差应不大于1. 0%3.3.1环境温度20℃土5℃，且相对稳定；相对避度不大于7U%，电源电压220V士22V5.3.2仪器应平稳地放在工作台上，无强光直射在仪器！.，5.3.3仪器周围无强磁场、电场干扰无振动；无强气流影响。5.3.4检定前仪器应预热20min。6样品
6.1被休样品根据用户提供的技术指标，检查浓度范固尽舌合适，如果需婴稀释，则要考惠所需溶剂类型和稀释倍数。
6.2固体样品均勾粉末、片状或具有光滑平面的块状样品，均可直接测定。7分析步紧
7.1开机：接通电源打开生机开关，点燃（打开）光源后，概据说明书要求启动计算机7.2检测前准备：参膜仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。
7.3工作条件的选择，环境温度应在20℃+5℃，相对逼度不大于70%；电源稳定，无磁场、电场下扰。根据样品的待性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件（如狭链、PM增益、南应时间等)。
7.4测定
7.4.1炭光激发光谱测定设置仅器塞数，扫描发射波长找到入暨，以此为发射波长，记录发射强度作均激发波长的函数便得到激发光谱，7.4.2荧光发射光谱测定设置仪器券数，扫描激发波长·找到入，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。7.4.3差错测定设置仪器参数，选择合适的工作方式，测定背景溶液的发射光谱并储存起来，在·定的工作方式下，扫描样品溶液的发射波长，得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值，即差谱，
7.4.4峰面积积分选择适当的工作方式，对样品溶液进行积分操作，即得到蜂面积积分，7.4.5荧光强度选择合适的测量参数，设入M采用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。
7.4.6定量谢定配制一系列已知浓度的标唯溶液.在一定的测定条件下，设置入x、入M，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度一浓度的工作曲线，不改变仪器参数测延未知游液的荧光强魔，由工作曲线即可求出来知溶液的浓度，397
8分析结果的表述
JY/T025---1996
8.1荧光激发光谱、发射光谱、差谱由仪器记录仪绘出。8.2峰面积积分、荧光强度由仪器屏幕显示。8.3定量测试：在相同的测定条件下，测定--系列已知滋度的标准落液的荧光强度，绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶流的荧光强度测定后，由工作曲线求出该窄液的浓度。9安全注意事项
9.1开机时，必须点亮光藻后，才能启动计算机，关机时，则须先关计算机再关光源。2打开样品室更换样品时，必关好光闸，保护仪器。9.3遵守说明书上的规定要求。
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