【地方标准】 五种植物生长调节剂含量的测定液相色谱-串联质谱法

DB65/T4040-2017
五种植物生长调节剂含量的测定液相色谱-串联质谱法
Determination of 5 kind of plant growth regulators by LC-MS/MS method

发布日期：2017-09-11
实施日期：2017-10-11
发布单位：新疆维吾尔自治区质量技术监督局

前言
DB65/T4040—2017
本标准根据 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求编写。本标准由新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所提出。本标准由新疆维吾尔自治区农业厅归口。
本标准起草单位：新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、新疆进出口检验检疫局技术中心、且末县农业局。
本标准主要起草人：王成、孙涛、宋丹阳、辛涛、赵前程、赵楠、刘俊、曹晓倩、王永红、韩磊。

1 范围
DB65/T4040-2017
五种植物生长调节剂含量的测定液相色谱-串联质谱法。本标准规定了五种植物生长调节剂含量测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、液相色谱-串联质谱测定、计算及精密度的要求。本标准适用于红枣、葡萄、香梨中矮壮素、赤霉素、2,4-D、氯吡脲、多效唑含量的测定，检出限均为 0.01 mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜取样方法

3 原理
五种植物生长调节剂用乙腈提取，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。

4 试剂和材料
除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 中一级水的标准。实验所需试剂如下：
a) 乙腈，色谱纯；
b) 甲醇，色谱纯；
c) 氯化钠，(140℃烘 4h)；
d) 微孔滤膜，0.20μm；
e) 其它试剂，低温避光保存。

5 试验所用仪器和设备
a) 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源 (ESI)；
b) 均质器；
c) 涡旋混合器；
d) 分析天平，感量 0.01g。

6 测定步骤
6.1 试样制备、保存
6.1.1 按 GB/T 8855 取水果可食部分，粉碎，装入密闭洁净容器中标记明示。
6.1.2 试样如不能及时分析，应置于 -18℃ 冰箱中贮存备用。
6.2 提取
称取制备样 10g（精确至 0.01g）于 50mL 具塞离心管中，依次加入 3g 氯化钠，10.0mL 乙腈，均质器中高速捣碎 1min，10000r/min 离心 3min。准确吸取 1.00mL 上层乙腈相溶液于 5mL 试管中，加入 1.00mL 50% 甲醇溶液，涡旋混匀后过 0.20μm 滤膜，待液相色谱-串联质谱分析。

7 液相色谱-串联质谱测定
7.1 液相色谱-串联质谱条件
a) 色谱柱：Waters Acquity HS T3 柱 (2.1mm × 50mm, 1.8μm)；
b) 流动相：A 为甲醇，B 为纯水，梯度淋洗见表 1；
c) 柱温：40℃；
d) 进样量：5μL；
e) 离子源：电喷雾 (ESI)，正负离子模式；
f) 扫描方式：多反应监测 (MRM)；
g) 脱溶剂气 (氮气)：650 L/h，锥孔气：50 L/h，碰撞气 (氩气)：0.18 L/h；
h) 毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应依据灵敏度优化；
i) 监测离子：监测离子见表 2。
注：除赤霉素和 2,4-D 为 ESI(-) 外，其余均为 ESI(+) 模式。方法中所列色谱柱仅供参考，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果，则可使用这些等效的产品。

表 1 梯度淋洗表
时间/min | 0 | 5.00 | 7.00 | 8.00
A / (%) | 40 | 10 | 40 | 40
B / (%) | 60 | 90 | 60 | 60
流速 / (mL/min) | 0.20 | 0.20 | 0.20 | 0.20

表 2 被测物的母离子和离子参数表
被测物 | 母离子 (m/z) | 子离子 (m/z) | 定量子离子 (m/z)
矮壮素 | 121.7 | 93.6, 85.7 | 93.6
赤霉素 | 345.2 | 239.0, 142.7 | 163.6
2,4-D | 218.9 | 160.6, 124.6 | 128.6
氯吡脲 | 248.0 | 128.6, 92.6 | 124.6
多效唑 | 294.1 | 124.6, 164.7 | —

7.2 液相色谱-串联质谱测定过程
按照本标准第 7.1 条的规定测定样品和混合标准工作溶液，以色谱峰面积按外标法定量。在上述条件下，矮壮素、赤霉素、2,4-D、氯吡脲、多效唑的参考保留时间 (min) 分别为 1.01、1.17、2.37、3.55 和 4.22。标准溶液的液相色谱-串联质谱图参见附录 A 中图 1。

7.3 液相色谱-串联质谱确证
按照本标准第 7.1 条的规定测定样品和标准工作溶液，如果检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，偏差不超过表 3 规定的范围，则可判定样品中存在对应的被测物。

表 3 定性确证时次强碎片离子相对丰度的最大允许偏差
次强碎片离子相对丰度 (%) | 允许相对偏差 (%)
>50 | ±20
20~50 (不含20) | ±25
10~20 (不含10) | ±30
<10 | ±50

7.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

8 结果计算
按式 (1) 计算样品中矮壮素、赤霉素、2,4-D、氯吡脲、多效唑含量：
X = (C × V × m) / (V2 × 1000)
式中：X 为试样中目标物含量，单位为毫克每千克 (mg/kg)；C 为从标准曲线上得到的目标物浓度，单位为微克每毫升 ($mu g/mL$)；V 为样品定容体积，单位为毫升 (mL)；V2 为取液体积，单位为毫升 (mL)；m 为称取试样的质量，单位为克 (g)。
计算结果保留三位有效数字。

9 精密度
≤10 (注：此处原文数据不全)