【农业行业标准(NY)】 猪丹毒诊断技术

ICS 11.220
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 566--2002
猪丹毒诊断技术
Diagnostic techniques for swine erysipelas2002-08-27发布
2002-12-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T566--2002
猪丹每是丹毒丝菌引起的严重传染病，为我国\三大猪传染病之”世界动物卫生组织[WorldOr-ganization forAnimal Health（英），Office Intentionaldes Epizootic（法），)IE门尚未将本病列人三大类动物疫病名录.未推荐诊断技术。但某些国家如日本、澳大利亚将猪丹毒列人动物疫病诊断标准中。某些国家如日本、丹麦将猪丹毒列为无特定病原（SPF)猪监测疫病之一。本标准是依据我国长期的研究成果和诊断的实践经验，参考国际通用方法制定的。猪丹毒（swine erysipelas）是出猪丹毒杆菌（Erysipelothrirrhusiputhiue）引起的一种急性、热性传染病。死亡率达80%～90%，病程多为急性败血型或亚急性的疹块型·转为慢性的多发生关节炎和心内膜炎，主要俊害架子猪·猪丹毒广泛流行于世界各地，对养猪业危害很大。人也可感染猪丹毒杆菌.称为“类丹毒”.人的病例多是由损伤皮肤感染。般经2～3周而自愈，类丹毒是一种职业病，多发生于兽医、屠宰人员以及鱼业工作者等，迄今未见人感染猪丹毒杆菌而死亡的报告。
猪丹犀杆菌是种纤细的革盖氏阳性小杆菌，不产生芽胞和英膜·猪丹毒杆菌的抗原结构比较筒单，有一种或多种不耐热的共同抗原，它们是蛋白质或蛋白质-糖-脂复合物.另外一种抗原为型特异性抗原，对热稳定，是血清型分类的基础，这些抗原由细胞壁的肽糖组成，采用高压浸出抗原和琼脂双扩散试验，川将猪丹杆菌分为1～25型，大量资料证明80%的猪源猪丹毒杆菌属于1型和2型。本标准的附录A为规范性附录。
本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会妇口。本标准起草单位：中国兽医药品监察所。本标准起草人：夏业才、钱心元、罗玉峰、姚文生。530
1范围
猪丹毒诊断技术
NY/T566—2002
本标准规定了猪丹毒的诊断技术。本标准规定的临床症状观察和病原分离鉴定适用于猪丹毒的诊断；血清培养凝集试验用于流行病学调查和 SPF猪群的监测。
2临床症状观察
根据症状观察可作出怀疑性诊断。临床症状一般表现为以下儿种类型：a）急性败血型：此型最为常见，以突然爆发，急性经过和高的致死率为特征，病猪体温升高达42C～~43C。高烧不退，卧地，不食·病程短，可突然死亡。b）亚急性皮肤疹块型：病猪食欲减退，体温升高41C42（，精神不振，不愿走动发病2d3d后在胸、腹、背、肩、四肢的皮肤上发生疹块，呈方形或菱形，稍凸起于皮肤表面，具有特殊诊断意义。
慢性关节炎型：病猪一般由败血型或皮肤疹块型转变而来，也有原发性，主要表现为慢性关节c）
炎，病猪出现皮肤大块坏死，四肢关节肿胀、疼痛、跛行。d）青霉素对本病有明显疗效，也有一定诊断意义。3病原分离和鉴定
根据病原分离鉴定3.3～3.6即可作出确切诊断。3.1所需材料
3.1.1培养基：马丁琼脂、马丁肉汤，配制方法见附录A。3.1.2定型血清：1~2型定型血清和1~2型阳性抗原。3. 2 采集病料
急性病例可采集被检猪的心血、肝、脾、淋巴结等脏器，亚急性疹块病例可采集皮肤疹块病料；慢性病例可采集关节液和心内膜的增生物。3.3菌体形态
用采集到的心血及脏器制备抹片，染色镜检，为革兰氏阳性细小杆菌。3.4动物试验
用病料制成1：10悬液，接种小白鼠（0.2mL）或鸽（大胸肌接种1ml，经3d～5d死亡，取心血、肝、脾等病料进行分离培养。同时接种豚鼠（1 ml.)则不死亡。3.5分离培养
将病料划线接种于加10%健康马血清马丁琼脂（见第A.1章）平Ⅲ，37C培养36h-48h，肉眼观察，若菌落较小，表面圆整光滑，呈微蓝灰色露珠状，判为可疑菌落，进-一步做血清型鉴定。3.6生化试验
生化试验见表1。
NY/T 566--2002
产酸不产气
严酸不产气
酸不产气
3.7血清型鉴定
水杨素萨
3.7.1被检抗原制备
海藻糖
表1丹毒丝菌生化反应
柿实糖
硫化氢
哦哚试哈
分解尿
氧化酶
过氰化氢酶
奶培养
新生酶素
试背删状生长
溶血型
将可疑菌落接种马丁肉汤（见第A.2章）100mL（加10%健康马血清）.37（培养36h，纯粹检验舍格后加0.5%甲醛溶液灭活24h.用0.5%甲醛磷酸盐缓冲液（PBS）溶液离心（8000r/min，15min）洗涤2次，在沉淀物中加3ml蒸馏水，经112kPa高压1h，离心（8000r/min，15min），上清液为被检抗原。
琼脂双相扩散试验
3.7.2.1用pH7.2的PBS配制1.2%琼脂凝胶，加热融化后，在平血中铺制成3mm厚的胶板，打六角梅花型孔，孔径3mm，孔间距离4mm。在酒精灯火焰之上加热封底。3.7.2.2定型血清加满中央孔。
3.7.2.3周围孔加满阳性对照抗原和被检抗原及PBS。3.7.2.4置37C湿盒扩散24h判定，定型血清与相对应的阳性抗原应出现沉淀线，与PBS不出现沉淀线，被检抗原与定型血清孔之间出现沉淀线为阳性。无沉淀线为阴性。4猪丹毒血清培养凝集试验
此试验为测抗体用。
4.1所需材料
4.1.1培养基：马丁氏肉汤（见第A.2章）。4.1.2菌种：猪丹毒杆菌C43-8强毒菌种。4.2操作步骤
4.2.1尤菌采被检猪血5mL，分离血清。4.2.2将被检血清用马丁肉汤分别稀释成1：10和1：20。4.2.3每个稀释度的血清分别取5mL,56C灭活30min。判为可疑的血清应重做。
4.2.4待灭活血清冷至37C以下时，每管加人猪丹毒C43-8.经18h培养的马厂肉汤菌液0.1mL，置36℃～37静置培养18h，再取出放室温2h后判定结果。4.2.5本试验冏时设马丁肉汤和马丁肉汤培养的猪丹毒菌液作为对照管。4.3判定标准
4.3.1被检血清培养物与菌液对照管比较观察，被检管和对照管-样均匀一·致混浊，管底无凝集块者为阴性（一）。
4.3.2被检管培养物上层液体稍混浊，管底有凝集物沉淀者为弱阳性（十或+十）。532bZxz.net
NY/T566--2002
4.3.3被检管培养物澄清，无混浊状，管底有大量凝集物沉淀者为阳性（十十+或十十十+）。4.4定性判定根据血清1：10和1：20两个稀释度出现的凝集程度综合判定4.4.1两个稀释度出现凝集程度的总和≥5个（+)者，判为阳性两个稀释度出现凝集程度的总和=4个（+）者，判为可疑4.4.2
4.4.3两个稀释度出现凝集程度的总和≤3个（+)者.判为阴性。533
NY/T566--2002
A.1马丁琼脂
A.1.1成分
牛肉汤
猪胃消化液
氯化钠(NaCI）
A.1.2制法
500 mL
A.1.2.1将L述成分混合加热溶解。附录A
（规范性附录）
培养基配制
2待琼脂完全溶化后，以氢氧化钠溶液调整pH为7.4～7.6。A. 1.2. 2
A.1.2.3以卵白澄清法或凝固沉淀法除去沉淀。A.1.2.4分装于中性玻璃瓶中，经103.7kPa灭菌30min～40min。A.1.2.5火菌完毕，pH应为7.2～7.6。按10%加人健康动物血清.充分混合，分装于平Ⅲ中，制成10%血清马丁琼脂。A. 1. 2. 6
马丁肉汤
A.2.1成分
牛肉汤
猪胃消化液
氯化钠（NaCl）
A.2.2制法
A.2.2.1将上述成分混合，以氢氧化钠溶液调整pH为7.67.8.煮沸20min~40min，补足失去的水分。
2冷却沉淀，抽取土清液，经滤纸或绒布滤过，滤液应为澄清、淡黄色，按需要量分装，经A. 2. 2. 2
103. 7 kPa灭菌 30 min~40 min。3灭菌完毕，pH应为7.2～7.6。
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。