【地方标准】 甘蔗黄叶病毒检测技术规程

ICS 65.020.20
B16
DB45
广西壮族自治区地方标准
DB45/T 2180—2020
甘蔗黄叶病毒检测技术规程
Technical criterion for detection of sugarcane yellow leaf virus

2020-10-29发布
2020-11-30实施
广西壮族自治区市场监督管理局 发布

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由广西壮族自治区糖业办公室提出并监督实施。
本文件由广西糖业标准化技术委员会归口。
本文件起草单位：广西壮族自治区农业科学院甘蔗研究所、广西甘蔗种质资源实验室。
本文件主要起草人：魏争、振崛、韦金菊、宋修鹏、张小秋、拿德伟。

1 范围
本文件规定了甘蔗黄叶病毒检测技术规程的样品采集与存放，组织免疫印迹法检测和一步法RT-PCR检测的原理、仪器与设备、试剂、操作步骤和检测结果的判定。
本文件适用于甘蔗黄叶病的快速检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。

3.1
+1叶 top visible leaf dewlap
按照植株最高可见肥厚带叶。

4 样品的采集与存放

4.1 采样工具
砍刀、剪、镊子等采样工具经121±2℃、1.1×10^5 Pa高温灭菌15 min或经160℃烘烤2 h。

4.2 采样方法
4.2.1 采样前和采样过程中应防止样本交叉污染，采样及样品处理过程中应戴一次性手套。
4.2.2 植株采样：取甘蔗植株的+1叶，剪掉叶尾，从叶基始集留15 cm长，编号保存备用。
4.2.3 茎基采样：取中部茎基，编号保存备用。

4.3 运送和存放
4.3.1 用于组织免疫印迹检测的样品采集后，用保温壶或保温桶加冰密封，在2 ℃~8 ℃条件下进行运送；运到实验室后应在4 ℃条件下保存，存放应不超过7 d。
4.3.2 用于一步法RT-PCR检测的样品采集后，用保温壶或保温桶加冰密封，在2 ℃~8 ℃条件下进行运送；运到实验室后应在-20 ℃条件下保存应不超过24 h，如需长期保存应放置-80 ℃冰箱中避免反复冻融。