【地方标准】 奇异变形杆菌和普通变形杆菌双重Real-Time PCR检测方法

ICS 65.020
CCS B41
重庆市地方标准
DB50/T1298—2022
奇异变形杆菌和普通变形杆菌双重Real-Time PCR检测方法

2022-09-30发布
重庆市市场监督管理局发布
2022-12-30实施

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件的部分内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由重庆市农业农村委员会提出、归口并组织实施。本文件起草单位：重庆市畜牧科学院。本文件主要起草人：杨睿、蒋雨、付利芝、王孝友、李成洪、覃志初、许国洋、付文贵、陈朝洪、冯刚。

1 范围
本文件规定了奇异变形杆菌和普通变形杆菌双重Real-Time PCR检测方法的检测原理、仪器设备、试剂材料、方法步骤、结果判定和生物安全要求。本文件适用于奇异变形杆菌和普通变形杆菌的鉴别检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 6682 分析实验用水规格和试验方法

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 缩略语
GN增菌液：革兰阴性菌增菌液（Gram Negative Bacteria Broth）
SS培养基：沙门志贺菌属琼脂培养基（Salmonella Shigella agar）
Real-Time PCR：实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-Time Polymerase Chain Reaction）

5 检测原理
采用Real-Time PCR技术对奇异变形杆菌（Proteus mirabilis）的UreR基因和普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的blaB基因进行检测，实现对两种菌的鉴别。UreR基因是奇异变形杆菌的尿素酶调节基因，在普通变形杆菌中不存在；blaB基因是普通变形杆菌的β-内酰胺酶调节基因，在奇异变形杆菌中不存在。针对上述基因设计特异性引物和探针，通过Real-Time PCR技术在FAM通道和HEX通道分别检测奇异变形杆菌和普通变形杆菌。

6 仪器设备
6.1 荧光定量PCR仪：同时具备FAM和HEX通道。
6.2 分析天平：精度±0.1 g。
6.3 高速冷冻离心机。
6.4 恒温培养箱。
6.5 振荡培养箱。
6.6 超净工作台。
6.7 微量可调移液器（2.5 μL、10 μL、100 μL、1000 μL）及配套滤芯吸头。
6.8 -80℃低温冰箱及常规医用冰箱。
6.9 超纯水仪。