【地方标准】 葡寡糖含量的检测 液相色谱法

DB21/T3116—2018
葡寡糖含量的检测 液相色谱法
Determination method for glucan oligosaccharides Liquid chromatography method
发布日期：2019-02-28
实施日期：2019-03-28

前言
DB21/T3116—2018
本标准是依据GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草的。本标准由大连市质量技术监督局提出，由中国科学院沈阳分院归口。本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。本标准主要起草人：陈玮、尹恒。

1 范围
本标准规定了葡寡糖含量检测的术语和定义、原理、仪器设备、操作步骤、结果表示和重复性。本标准适用于以酵母细胞壁、真菌、褐藻、地衣、谷物以及其热凝胶等聚糖为原料，经加工制成的葡寡糖产品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）含量的测定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 葡寡糖
葡聚糖在酸水解或生物酶水解条件下降解为聚合度为2～6的线性低聚糖。
3.2 葡寡糖含量
葡寡糖产品中β-1,3-葡糖（聚合度2-6）的质量百分比。

4 原理
葡寡糖经过色谱柱分离后可得到多个单一聚合度的组分，分离后的葡寡糖组分进入检测器进行检测，在一定浓度范围内，检测信号的强度与葡寡糖浓度呈线性关系。通过外标法测定并计算得到葡寡糖产品中不同聚合度葡寡糖组分的浓度和质量。不同聚合度葡寡糖的质量总和与其产品总质量比值的百分比结果，即为葡寡糖的含量。

5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪：配有脉冲式安培检测器（PAD，pulsed amperometric detector）。
5.2 分析天平：感应量为0.0001g。
5.3 滤膜：聚四氟乙烯膜，0.2μm。

6 试剂和材料
6.1 水：符合GB/T 6682规定的一级水的规定，即电导率（25℃）/(mS/m) ≤ 0.01。
6.2 氢氧化钠溶液（NaOH $pprox$ 50%）：色谱纯。
6.3 三水乙酸钠：色谱纯。
6.4 100 mmol/L 氢氧化钠溶液：量取5.23mL氢氧化钠溶液（6.2），用水定容至1000mL。
6.5 800 mmol/L 三水乙酸钠/100 mmol/L 氢氧化钠溶液：称取108.86g三水乙酸钠，用水（6.1）溶解后加入5.23mL氢氧化钠溶液（6.2），再用水（6.1）定容至1000mL。
6.6 葡寡糖标准品：昆布二糖，纯度≥95%；昆布三糖，纯度≥95%；昆布四糖，纯度≥95%；昆布五糖，纯度≥90%；昆布六糖，纯度≥90%。结构式参见附录A。

7 测定步骤
7.1 标样溶液的配置
7.1.1 标样溶液A：分别称取10.00mg经105℃干燥至恒重的5种葡寡糖标准品（6.6）于50mL烧杯中，加入20mL水（6.1），振荡使其充分溶解，转移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为100μg/mL。
7.1.2 标样溶液B：吸取10.00mL标准溶液A转移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为10μg/mL。
7.1.3 标样溶液C：吸取10.00mL标准溶液B转移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为1μg/mL。
7.2 样品溶液的制备
当样品是颗粒状态时，应先将其在研钵中研细成粉末。将粉末状样品在105℃干燥至恒重。称取25.0mg样品于50mL烧杯中，加入20mL水（6.1），振荡使其充分溶解，转移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，摇匀。用液相色谱仪测定前，样品溶液用0.2μm滤膜过滤。
7.3 检测条件
需满足如下色谱条件：
a) 流动相A：100 mmol/L 氢氧化钠溶液（6.4）；
b) 流动相B：800 mmol/L 三水乙酸钠/100 mmol/L 氢氧化钠溶液（6.5）；
c) 色谱柱：离子交换色谱柱，粒径5μm，柱长250mm，内径4.6mm；
d) 柱温：30℃；
e) 流速：1.0mL/min；
f) 进样体积：10μL；
g) 洗脱方式：梯度洗脱：
0-1min：0%流动相B；
1-30min：0%-37.5%流动相B；
30-35min：37.5%-62.5%流动相B。