【卫生标准】 用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水 Mueller-Hinton 琼脂的检验规程

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T 231—2002

用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水Mueller-Hinton 琼脂的检验规程

Protocols for the evaluation of dehydrated Mueller-Hinton agar in the disk diffusion procedure for antimicrobial susceptibility testing

2002-04-20 发布 2002-07-01 实施

中华人民共和国卫生部 发 布

前 言

本标准是在卫生部颁发的《全国临床检验操作规程》（第二版）的基础上，参考 NCCLS 标准，结合中国国情及卫生系统的实际情况和要求而制定。

本标准从 2002 年 7 月 1 日起实施。

本标准由卫生部医政司提出。

本标准的附录 A 是标准的附录，附录 B、附录 C 都是提示的附录。

本标准由北京大学人民医院负责起草。

本标准主要起草人：张正、杨婧、赵晓涛。

本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。

中华人民共和国卫生行业标准

用于纸片扩散法抗生素敏感试验的脱水
Mueller-Hinton 琼脂的检验规程 WS/T 231-2002

Protocols for the evaluation of dehydrated Mueller-Hinton
agar in the disk diffusion procedure for
antimicrobial susceptibility testing

1 范围

本规程规定了评价Mueller-Hinton琼脂(M-H琼脂)产品批号的要求，包括制造商评价(M-H琼脂)产品批号的规则及评价新的参考培养基的规则。

本规程仅适用于评价纸片扩散法抗生素敏感试验用M-H琼脂的检验，而不能保证M-H琼脂在其他试验中的质量，例如琼脂稀释或抗生素梯度试验。

2 材料

2.1 质控标准菌株

用ATCC的冻干标准菌株制备质控菌株，根据ATCC的规定复苏菌种。所需的菌种有：金黄色葡萄球菌 ATCC 25 923, 大肠埃希菌 ATCC 25 922, 铜绿假单胞菌 ATCC 27 853, 粪肠球菌 ATCC 33 186 (或 ATCC 29 212), 金黄色葡萄球菌 ATCC 43 300 和大肠埃希菌 ATCC 35 218。

2.2 菌株TSA培养基培养

将质控菌种的复苏液接种于两或三个含5%羊血的大豆-酪蛋白消化琼脂(TSA)平板上，置35℃环境中孵育18 h~24 h。

2.3 肉汤增菌

孵育结束后检查纯度并收获平板上的全部生长物。在含有15%甘油的大豆-酪蛋白消化肉汤(TSB)中悬浮。(15%TSB的制备：将脱水肉汤培养基30 g溶于大约500 mL去离子水中，并添加150 mL甘油，定容至1 L，混匀，121℃15 min高压灭菌)。

2.4 标准菌株复苏

接种平板的前一天，将所需的质控菌种每种各融化一瓶，接种至含5%羊血的TSA平板上，在35℃环境中孵育18 h~24 h。孵育后，如果检查纯度满意，这些菌株就可以用于接种待测M-H培养基，按WS/T 125—1999《纸片法抗菌药物敏感试验标准》操作。

2.5 质控菌种的更新

定期用ATCC的新鲜冻干标准菌株更新贮存菌种。

3 试验方法及流程

3.1 严格按照我国已有标准(WS/T 125)中规定的步骤和时间进行纸片扩散法抗生素敏感试验。

3.2 按照下面的时间表进行试验。

3.2.1 第一天