【烟草标准】 烟草和烟草制品　总蛋白质含量的测定

前 言

本标准是参照 ISO/CD 15677 和美国公职分析化学家协会(AOAC)《分析方法手册》(第十四版)中3.148~3.150制定的。

在参照ISO/CD 15677的同时，考虑到国内烟草行业对总氮含量的测定方法，尽量在可溶性氮的测定步骤上与YC/T 33保持一致，因此亦参考了AOAC《分析方法手册》。

本标准由国家烟草专卖局提出。

本标准由全国烟草标准化技术委员会(TC144)归口。

本标准起草单位：国家烟草质量监督检验中心。

本标准主要起草人：王芳、张艳华、李萍、杨迅。

烟草和烟草制品
总蛋白质含量的测定

1 范围

本标准规定了凯达尔法测定雪茄及烟草制品中蛋白质氮的方法。

本标准适用于烟草和烟草制品。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 5806.1 卷烟 抽样

YC/T 5 烟草成批取样的一般原则

YC/T 31 烟草及烟草制品 试样的制备和水分测定 烘箱法

3 原理

用乙酸沉淀烟草样品中的蛋白质氮，然后在浓硫酸及催化剂作用下转化为硫酸铵。强碱蒸馏释放氨气，用标准酸接收吸收，反滴定。

4 试剂

所有试剂均应为分析纯级，水应为蒸馏水或至少同等纯度的水。

4.1 锌粒。

4.2 浓硫酸：$d^{20} \approx 1.81\text{ g/mL}$（该试剂可引起严重烧伤）。

4.3 红色氧化汞。

4.4 硫酸钾。

4.5 氢氧化钠-硫代硫酸钠溶液：将 $500\text{ g}$ 氢氧化钠和 $40\text{ g}$ 硫代硫酸钠 ($Na_2S_2O_3 \cdot 5H_2O$) 溶于水，稀释至 $1\text{ L}$。

4.6 乙酸：质量分数为 $0.5\%$。

4.7 硫酸铵溶液：$0.1\text{ mol/L}$。

4.8 硫酸标准滴定溶液：$c(0.5\ H_2SO_4) = 0.1\text{ mol/L}$。

4.9 氢氧化钠标准滴定溶液：$c(NaOH) = 0.1\text{ mol/L}$。

4.10 甲基红指示剂：$0.1\%$。

5 仪器设备

5.1 分析天平：精确至 $0.0002\text{ g}$。

5.2 抽滤装置：直径 $120\text{ mm}$ 布氏漏斗，真空抽滤装置。

5.3 蒸馏装置：$500\text{ mL}$ 克氏烧瓶、连接头、4~6个球冷凝管和 $300\text{ mL}$ 锥形瓶。

5.4 锥形瓶：$300\text{ mL}$。

5.5 克氏烧瓶：$500\text{ mL}$。

5.6 移液管,25 mL。

5.7 滴定管,50 mL(0.1 mL刻度)。

5.8 量筒,25 mL、100 mL、250 mL。

5.9 定氮烧瓶,凯氏。

6 分析步骤

6.1 抽样

6.1.1 烟叶

按YC/T 5抽取烟叶作为实验室样品。

6.1.2 卷烟

按GB/T 5006.1抽取卷烟作为实验室样品。

6.2 试样的制备

按YC/T 31制备试样。

6.3 测定次数

每个试样应平行测定两次。

6.4 水分含量的测定

按YC/T 31测定试样的水分含量。

6.5 萃取

称取约1.5 g(精确至0.0002 g)试样置于300 mL锥形瓶(5.4)内,加入75 mL乙酸溶液(4.8),加热保持沸腾15 min。迅速用定量滤纸(5.9)在真空抽滤装置(5.2)内进行抽滤,并用乙酸溶液冲洗锥形瓶和沉淀物至滤液无色。然后将滤纸和沉淀于定氮烧瓶(5.5)中。

6.6 消化

向定氮烧瓶中加入0.7 g红色氧化汞(4.3)、10 g硫酸钾(4.4)及20 mL浓硫酸(4.2),混合均匀。将定氮烧瓶移入通风橱内,斜置于定氮架上,瓶颈与水呈45°~60°夹角。缓慢加热,待泡沫停止、溶液澄清后,再继续煮沸1 h。冷却,用约50 mL~70 mL水冲洗瓶壁。

6.7 蒸馏

向定氮瓶中加入约250 mL水,加碎粒(4.1)三颗。沿管壁小心加入氢氧化钠-硫代硫酸钠溶液(4.5) 90 mL。

立即连接于蒸馏装置上。用内有25 mL硫酸标准滴定溶液(4.8)和3~7滴指示剂(4.10)的锥形瓶 (5.4)作接收器,冷凝管下端应浸入液面中。

蒸馏直馏出液体到达150 mL。

注:氢氧化钠-硫代硫酸钠溶液应小心加入,以避免温度迅速升高而失去氨。蒸馏过程中三角瓶中液体应保持红色。否则,应减少称样量或重新冷蒸馏。

蒸馏终点,移开锥形瓶,以免倒吸。用水冲洗冷凝管下端。

6.8 滴定

用氢氧化钠标准滴定溶液(4.9)滴定馏出液至指示剂颜色由红色变为无色即为终点。

6.9 测试

6.9.1 空白试剂测试

用等量的蒸馏水代替样品测试。重复6、6.6、7和6.8。

该滴定的终点就是有效的零点,并对滴定(6.8)进行校正。

如果偏差较小,对样品测试结果加以修正;如果误差较大,应考虑哪一种试剂引入了氮或者设备的某位置消耗了氢氧化钠。纠正错误并重复测试。

注:包括任何不含氮的有机化合物、带有含氮的氮源生氢的试剂也可能被使用,会引起同样的反应。