【GA公共安全标准】 法庭科学生物检材中卡马西平气相色谱和气相色谱-质谱检验方法

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T1328—2016
法庭科学生物检材中卡马西平气相色谱和气相色谱-质谱检验方法
GC and GC-MS examination methods for carbamazepine in biological samples inforensicscience
2016-09-14发布
中华人民共和国公安部
2016-09-14实施
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。GA/T1328—2016
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SC1）提出并归。
本标准起草单位：北京市公安局法医检验鉴定中心、公安部物证鉴定中心。本标准主要起草人：杨士云、乔静、常洪发、张大明、袁增平、何毅、王芳琳、于忠山。I
Hii KAoNhi KAca
HiKAoNhi KAca
1范围
法庭科学生物检材中卡马西平气相色谱和气相色谱-质谱检验方法
GA/T1328—2016
本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾等）中卡马西平的气相色谱（GC）和气相色谱-质谱(GC-MS)检验方法。
本标准适用于法庭科学生物检材中卡马西平的定性及定量分析。2、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名词术语
3术语和定义
GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。4原理
以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩后，采用气相色谱法和气相色谱-质谱法检测，以保留时间（t）、质谱特征离子碎片峰和相对丰度作为定性判断依据；与平行操作的添加标准物质响应值比较，根据峰面积之比，用外标法进行定量分析5试剂和材料
除另有说明外，本标准所用试剂均为分析纯，试验用水为三级水（见GB/T6682一2008规定）：a）甲醇：
b）乙腈；
c）三氯甲烷；
d）异丙醇；
e）氨水；
f)无水硫酸钠；
g）1.0mol/LNaOH溶液：称取氢氧化钠4.0g，加人一定量的水溶解并定容至100mL：h）pH=10.0磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钠（NaHzPO.·2HzO)6.0g，加人水450mL，用1.0mol/LNaOH溶液调节至pH=10.0士0.1后，定容至500mL；i)
固体碳酸盐缓冲剂：碳酸钠和碳酸氢钠按1：1比例混匀；氨水/三氯甲烷/异丙醇（体积比为2：78：20）混合溶剂：1
HiKAoNhi KAca
GA/T1328—2016
k）甲醇/乙腈（体积比为15：85）混合溶剂；标准溶液：
1）1.0mg/mL标准物质溶液：称取卡马西平标准物质50.0mg于50mL容量瓶中，加入一定量甲醇溶解并稀释至刻度，混勾。配制成1.0mg/mL的卡马西平标准物质溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间6个月；2）100.0μg/mL标准工作溶液：移取1.0mg/mL的卡马西平标准物质溶液1.0mL于10mL容量瓶中，加人甲醇稀释至刻度，混匀。配制成100.0μg/mL的卡马西平标准工作溶液。密封，置于冰箱中冷藏保存。保存时间3个月。6仪器和设备
仪器和设备包括：
a）气相色谱-质谱联用仪：配电子轰击源（EI）：b）气相色谱仪：配火焰离子化检测器（FID)；c）C1s固相萃取柱：使用前依次用甲醇5.0mL及水5.0mL淋洗，保持柱面湿润；d）微量注射器：10μL；
e）pH计；
f）涡旋振荡器：
g）电子天平：分度值为0.1mg：h）离心机；
具盖离心管。
操作方法
7.1定性分析
样品萃取
7.1.1.1样品制备
移取血液、尿液等液体样品1.0mL~2.0mL，或称取铰碎的肝脏等组织样品1.0g～2.0g于具盖离心管中。另取等量相同基质的空白样品2份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加卡马西平标准物质2.0ug作为添加样品，混匀，待检。7.1.1.2液液萃取
取7.1.1.1待测样品，分别加人甲醇/乙混合溶剂8mL，振荡5min，8000r/min离心10min，提取有机相：重复提取一次，合并两次提取的有机相，过无水硫酸钠（15.0g)后，在浓缩器上浓缩至干，残渣加人甲醇100μL定容，转移至（进）样瓶内，供仪器分析。7.1.1.3固相萃取
取7.1.1.1待检样品，分别加人pH=10.0的磷酸盐缓冲液6.0mL（尿液中只加1g固体碳酸盐缓冲剂），混勾，超声15min，8000r/min离心20min，取上清液过已经活化好的Cla柱，控制流速为0.5mL/min；再用水6mL淋洗，控制流速为5.0mL/min；挤干水分或用干燥空气或氮气吹干水分后，用氨水/三氯甲烷/异丙醇混合溶剂6mL洗脱，收集洗脱液在浓缩器上80℃下浓缩至干，残渣加人甲醇100μL定容，转移至进样瓶内，供仪器分析。2
HiKAoNhi KAca
7.1.2仪器检测
气相色谱仪条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a）检测器：FID；
GA/T1328—2016
色谱柱：DB-5毛细色谱柱（或其他5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷等效柱），30mXb）
0.25mmX0.25μm;
注：DB-5毛细色谱柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。色谱柱温程：160℃保持1min，以10C/min速率升温至280℃，保持20min；进样口温度：280℃；
e）检测器温度：280℃；
载气：氮气，纯度大于99.999%；f
进样方式：分流进样；
分流比：10：1；
柱流量：1mL/min。
气相色谱-质谱仪条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：色谱柱：DB-5MS毛细色谱柱（或其他5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷等效柱），30mXa）
0.25mmX0.25μmj
注：DB-5MS毛细色谱柱是Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)
色谱柱温程：160C保持1min，以10C/min速率升温至280C，保持20min进样口温度：280℃：
传输线温度：260℃：
载气：氮气，纯度大于99.999%；e)
进样方式：分流进样，分流比10：1；g)
电子轰击能量：70eV；
源温度：250℃；
倍增器电压：自动调谐值：
柱流量：1mL/min；
质量扫描范围：40amu~450amu：k)
扫描方式：全扫描（SCAN）。
7.1.3记录和计算
记录各样品及标准物质平行进样2次～3次中目标物的tR及峰面积值，按式（1)计算回收率：AXW×V
×100%
式中：
R外标或内标的回收率；
A—添加样品中标准物质或内标物峰面积平均值：W*—一标准物质或内标物浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；...（1)
HiKAoNhi KAca
GA/T1328—2016
V添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A撼一—标准物质或内标物纯品的峰面积平均值；M
添加样品中标准物质或内标物添加量，单位为微克（ug）。7.2定量分析
7.2.1样品萃取
移取血液等液体样品2.0mL或称取铰碎的肝脏等组织样品2.0g2份：另取等量相同基质的空白样品2份，分别添加卡马西平标准物质（添加量应与样品粗测量相近），混勾，按7.1.1进行操作。7.2.2仪器检测
按7.1.2进行检测。
7.2.3记录与计算
计算药物含量
记录各样品平行进样2次～3次中目标物的峰面积值，按式（2）计算含量：W=A#×Mm×V#
AXM#XV
式中：
（2）
单位质量案件样品中目标物质的含量，单位为微克每克（μg/g）或微克每毫升（μg/mL）：案件样品中目标物峰面积平均值：添加样品中标准物质添加量，单位为微克（μg）；案件样品的定容体积，单位为毫升（mL）：添加样品中目标物峰面积平均值；M释—案件样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL)V—一添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。2计算相对相差
记录2份平行操作的案件样品含量，按式（3)计算相对相差：RD=LXi-X。l>www.bzxz.net
×100%
式中：
8结果评价
相对相差（%）；
两个案件样品平行定量测定的含量数值：一两个案件样品平行定量测定含量的平均值。8.1定性结果评价
8.1.1阴性结果评价
（3）
气相色谱法或气相色谱-质谱法分析中，如果案件样品未出现与标准物质t相同的色谱峰，添加样品的回收率大于或等于60%，则阴性结果可靠。相关回收率数据参见表A.1。4
HiiKAoNniKAca
GA/T13282016
如果添加样品中未出现与标准物质tR相同的色谱峰或回收率小于60%，则阴性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。
本标准在血液中的卡马西平的检出限为50.0ng/mL（S/N=10：1）。8.1.2阳性结果评价
气相色谱-质谱法分析中，案件样品出现与标准物质t相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对丰度一致，空白样品无干扰，则阳性结果可靠。相关质谱图参见图A.1。气相色谱-质谱法分析中，如果空白样品中出现与标准物质t相同的色谱峰，且质谱特征离子碎片及相对丰度一致，则阳性结果不可靠。应按7.1重新提取检验。2定量结果评价
如果案件样品中目标物含量的RD小于或等于20%，定量数据可靠，其含量按2份案件样品的平均值计算。如果目标物含量的RD大于20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。HiiKAoNiKAca
GA/T1328—2016
A.1卡马西平在样品中的回收率
（资料性附录）
卡马西平相关色谱图和回收率
卡马西平在样品中的回收率见表A.1表A.1
操作方法
血液中卡马西平的回收率
2mL血液添加2.0μg卡马西平，15%甲醇/乙睛混合溶剂提取2mL血液添加2.0μg卡马西平，Cls柱固相提取卡马西平质谱图
卡马西平的质谱图见图A.1
75818995
回收率
8090100110120130140150160170180190200210220230240250405060
(aafs)CARBAMAZEPINE
卡马西平质谱图［特征离子：193（基峰），236，165］GA/T1328-2016
中华人民共和国公共安全
行业标准
法庭科学生物检材中卡马西平气相色谱和气相色谱-质谱检验方法
GA/T1328—2016
中国标准出版社出版发行
北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）网址spc.net.cn
总编室：（010)68533533发行中心：（010)51780238读者服务部：(010)68523946
中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销
开本880×12301/16
印张0.75字数14千字
2017年6月第一版2017年6月第一次印刷善
书号：155066：2-31274定价
小提示：此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容，若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。