【GA公共安全标准】 法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求

ICS13.310
中华人民共和国公共安全行业标准GA/T815—2009
法庭科学人类荧光标记STR
复合扩增检测试剂质量基本要求Criterion for the human fluorescent STR multiplex PCR reagent2009-02-05发布
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中华人民共和国公安部
2009-03-01实施
本标准由公安部刑侦局、公安部科技局、公安部物证鉴定中心提出。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会（SAC/TC179)归口。GA/T815—2009
本标准起草单位：公安部刑侦局、公安部物证鉴定中心、北京市公安局、辽宁省公安厅、上海市公安局。
本标准主要起草人：葛百川、叶健、刘雅诚、姜先华、姜成涛、赵兴春、周怀谷、张庆霞、张浩、王海欧。I
1范围
法庭科学人类荧光标记STR
复合扩增检测试剂质量基本要求GA/T815—2009
本标准规定了法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂（以下简称试剂”）质量基本要求，包括试剂基本技术要求、标识、包装、运输和贮存。本标准适用于法庭科学领域使用的人类荧光标记STR复合扩增检测试剂市场准人质量评价的基本要求。
其他领域使用“试剂”可参考采用本标准。2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。2.1
短串联重复序列（STR）shorttandemrepeat存在于人类基因组DNA中的一类具有长度多态性的DNA序列，其核心序列一般由2个～6个碱基构成，由于核心序列重复次数的不同致个体间存在差异。2.2
基因座locus
染色体上基因所占的位置或基因组DNA中的一段，称为基因座。2.3
人类荧光标记STR复合扩增检测试剂thehumanfluorescentSTRmultiplexPCRreagent用于检验人类样本STR基因分型的一系列试剂，其利用聚合酶链式反应(PCR)技术和荧光标记检测技术，能同步对人类DNA样本多个STR基因座进行复合扩增并得到STR基因座分型。2.4
分型准确性the veracity of the reagent试剂检测阳性DNA对照样本分型结果与规定分型结果的符合程度。2.5
稳定性the stability of the reagent试剂在保质期和规定的储存、运输条件下能够保持产品品质不发生改变。2.6
灵敏度thesensibilityof thereagent在相同条件下试剂成功检出所含全部基因座DNA分型的最小DNA模板量。2.7
引物混合物primermixture
一定数量的标记和未标记荧光的寡核苷酸引物按一定浓度比例进行混合的溶液。2.8
阳性DNA对照样本
positivecontrol DNA
已知浓度和分型的人类DNA样本。1
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GA/T815--2009
等位基因分型标准物allelicladder试剂中所有基因座的常见等位基因的混合物，通过分型标准物来定义待检样本的分型。2.10
分子量标准internal lane size standard也称内标，是一系列已知分子量大小标记特定荧光的DNA片段混合物，作为计算同一泳道内的DNA片段分子量大小的标准品。
荧光标准物
dyematrix
不同荧光染料标记的一组标准DNA片段组成的混合物，能为试剂提供相应的荧光光谱校准。2.12
t relative fluorescence unit (RFU)相对荧光单位
在给定的阈值之上的荧光信号强度。2.13
均衡性balance
试剂质量均衡性，包括同一基因座杂合等位基因间、同一荧光标记的各基因座之间以及不同荧光标记的基因座间分型峰高之间的比值，以低值与高值之比的百分数表示。2.14
伪峰artifact
电泳后存在的一些不代表DNA片段的假象峰，这些额外峰的产生是由于DNA分析过程中不可避免的技术缺陷而造成的。此内容来自标准下载网
3技术要求
3.1试剂成分
3.1.1引物混合物
无可见杂质，体积应与试剂标识相一致。3.1.2PCR缓冲液
无可见杂质，各成分浓度应与试剂标识相-致。3.1.3热启动DNA聚合酶
浓度，体积活性、纯度等应与试剂标识相一致.肉眼检查无可见杂质。3.1.4等位基因分型标准物
等位基因分型标准物技术要求包括：a）等位基因分型标准物应包括常见等位基因，按说明书推荐的方法检测得到的分型与其描述的完全一致，图谱清晰；
每个等位基因分型的峰高大于200相对荧光单位；b)
每个基因座第一个峰高与第二个峰高的比例应大于50%以上，各等位基因峰高均衡性在20%c）
以上，所有等位基因分型标准物应在规定范围之内：d
每个基因座的相邻两个等位基因间片段差应在预期的范围；相邻两个基因座间不应有等位基因分型间的重叠；e)
D）经软件分析，等位基因分型标准物和阳性DNA对照样本不会产生错误的基因分型；g）在等位基因范围内出现的非等位基因应低于相邻等位基因峰高的20%。3.1.5分子量标准
分子量标准经检测分析后所含有的条带应清晰明确，片段数量与说明书上描述的完全一致，与重复2
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检验的等位基因分型标准物间标准偏离应小于土0.2bp。同时要求内标中每个DNA片段的峰高大于200相对荧光单位。
3.1.6荧光标准物
所有基因座和分了量标准在应用荧光标准物进行光谱校正条件下，峰高在2500相对荧光单位以下，不出现高于50相对荧光单位的荧光渗透3.1.7阳性DNA对照样本
阳性DNA对照样本的浓度和DNA分型应与说明书上的描述完全致。3.2试剂性能
3.2.1种属特异性
试剂检验常见动物（如：马、狗、猪、牛、羊、猫、鸡、鸭、鼠、免、鱼）和细菌（如：大肠杆菌），在分型范围内，不出现特异的DNA分型。
3.2.2分型准确性
试剂检验阳性DNA对照样本，分型应与说明书上的描述完全一致。3.2.3灵敏度
试剂在加人阳性DNA对照样本量低至0.125ng时，应能检出全部STR基因座分型。3.2.4适应性
试剂应对血液（斑）、精液（斑）、唾液（斑）、脱落细胞、各种组织、带毛囊（根）的毛发等法医生物物证常见检材进行准确的分型。
3.2.5耐受性
对降解、含有抑制因素的DNA样本，试剂应保持其相应的稳定性。3.2.6一致性
一致性要求包括：
a）在不同的试验条件下（人员、检测设备变化），对同一样本进行重复性检验，其分型结果应一致；b）对已知分型的同一批样本检验时，人类荧光标记STR复合扩增试剂分型结果与已知分型无显著差异。
3.2.7均衡性
均衡性要求包括：
a）对阳性DNA对照样本进行检测，当模板量为试剂推荐的最佳用量时，根据DNA检测分型的峰高，杂合等位基因间的均衡性比值不小于70%；同一荧光标记物的不同基因座之间的均衡性不小于50%：b)
c）不同荧光标记物间的均衡性不小于30%。3.2.8反应条件的验证
用阳性DNA对照样本，按试剂推荐的反应体系、扩增循环数、退火温度、延伸时间、热启动DNA聚合酶用量、引物量、缓冲液浓度等条件进行检验，达到厂商说明书明示的分型效果。3.2.9混合样本
当模板DNA总量为1ng时，对两个单一DNA样本的不同浓度比例进行混合检测，混合比例为1：4时，应能准确检出两个样本的每个基因座的基因分型。3.2.10稳定性
稳定性要求包括：
a）有效期内的试剂在厂商推荐的保存温度环境下，分型结果不受影响：将试剂在有效期内反复冻融，冻融N/20次（N为试剂的人份数，N≥20），不影响分型结果，不b）
出现信号高于50相对荧光单位的随机伪峰3
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3.2.11批间差
抽查不同批次的产品，对--定数量的检材进行检验，所有样本的分型结果应完全一致；不同批次间的内标、等位基因分型标准物应一致。4标识、包装与运输、贮存
4.1标识、包装
标识、包装应符合以下要求：
产品标识应包括试剂名称、生产批号、试剂规格、生产日期与有效期、贬存环境、生产厂家；a）
包装完整，表面整洁；
试剂各组分应封装严密；
产品包装中应包括检验合格标识或合格证书、产品说明书；e)
产品说明书中应提供详细的产品信息，包括试剂的组成、用量、用法、储存、注意事项等；包装盒内所包含的组分与包装盒上的标识相符合。2运输、贮存
运输、贮存应符合以下要求：
运输应保存在保温容器中，使用干冰或其他冷冻物品保温，运输过程中防止受压；a）
b）产品应贮存在产品说明书标识的贮存环境内。4
参考文献
GA/T3822002《法庭科学DNA实验室规范》[2】
GA/T3832002《法庭科学DNA实验室检验规范》[3]
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打印H期：2010年3月10H
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2009年3月第一版
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字数10千字
2009年3月第一次印刷
书号：1550662-19550
定价14.00元
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