【GB国家标准】 植物代谢产物游离棉酚测定酶联免疫吸附法

ICS07.080
CCSA40
中华人民共和国国家标准
GB/T40223—2021
植物代谢产物游离棉酚测定
酶联免疫吸附法
Determination of free gossypol of plant metabolites-Enzyme-linked immunosorbent assay2021-05-21发布
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会
2021-12-01实施
中华人民共和国
国家标准
植物代谢产物游离棉酚测定
酶联免疫吸附法
GB/T40223-2021
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开本880×12301/16
印张0.5
字数14千字
2021年5月第一版2021年5月第一次印刷书号：155066-1-67603定价14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究
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GB/T40223—2021
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1范围
植物代谢产物游离棉酚测定
酶联免疫吸附法
本文件规定了植物代谢产物游离棉酚的酶联免疫吸附测定方法。本文件适用于棉粘及发酵饲料中游高棉酚的测定。2规范性引用文件
GB/T40223—2021
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中注日期的引用文件，仅该日期对应的版适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682
3术语和定义
寿析实验用水规格和试验方法
本文件没有需要界定的术讯和定义。4原理
样品经处理后，羊液中的游离棉酚、微孔板上固定的棉抗原与加人的棉酚抗体竞争结合，洗板除去未结合的其他成分再与球根过氧化餐测定吸光度值，计算游高棉酚的含量。5试剂和材料
色用酶标仪在50nm波长下
除非另有规定，本文件所用化学试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。游离棉酚的检测试剂盒：参见附录5.1
棉酚：纯度≥95%.CAS号为652-78-8。应按照试剂盒说明书配制所需溶液。仪器设备
小型粉碎机。
6.2分样筛：孔径0.9mm。
6.3勾浆机。
6.4涡旋混合器。
6.5电子犬平：感量0.01g。
6.6具塞离心管：15mL
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GB/T40223—2021
6.7微孔板酶标仪：带150Ⅱm滤光片。6.8试剂盒所要求的仪器。
样品的制备及保存
样品制备
称取100g样品，用小型粉碎机进行粉碎，粉碎后的样本过孔径0.9mm分样筛。装入清洁密封容器，并加以标识，待测。
7.2样品保存
取样后应立即试验，如不能及时试验，应在一18℃冰箱中冻存，且不超过2周8试验步骤
8.1样本前处理
称取1.00g过筛的样品，置于15mL具塞离心管中，加人试剂盒所要求提取液，按照试剂盒说明书所述方法进行稀释和检测。
8.2测定
按照酶联免疫试剂盒所述操作步骤对待测试样（液）进行定量检测。8.3平行试验
按以上步骤，对间一标准溶液、间一样品溶液均应进行平行试验测定。8.4空自试验
除不称取试样外，均按上述步骤进行。8.5阳性质控
根据待测样本中游离棉酚的含量，选择一个合适的质控标准，以确定试验过程的操作准确性。试验数据处理
酶联免疫试剂盒定量检测的标准工作曲线绘制9.1
按照试剂盒说明书提供的计算方法或者计算机软件，根据标准品质量浓度与吸光度变化关系绘制标准工作曲线。
9.2待测液质量浓度计算
按照试剂盒说明书提供的计算方法以及计算机软件，将待测疫吸光度代入9.1所获得标准工作曲线，计算待测液质量浓度（p）。9.3结果计算
样品中游离棉酚的含量按式（1)计算：2
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式中：
X-pxVxax1000
mx1000
GB/T40223—2021
X—样品中游离棉酚的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）：β—从标准工作曲线上得到的样品中游离棉酚质量浓度，单位为微克每毫升（μug/mL）V样本提取液体积，单位为毫升（mL)在前处理过程中的稀释倍数；
m—试样的称样量，单位为克(g)。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留3位有效数字。10
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在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。11准确度
本方法供酶联免疫试剂盒测试的游离棉酚溶液加标浓度为5μg/mL时，平均回收率为77.3%~111.6%，当供酶联免疫试剂盒测试的游离棉酚溶液加标浓度为10μg/mL时，平均收率为80.1%~110.5%，当供酶联免疫试剂盒测试的游离棉溶液加标浓度为50g/m时，平均回收率为86.4%~105.4%
12其他
当称样量为1.00g时.游离棉酚的检出限为2mg/kg.定量限为3mg/kg。rrKaeerKAca-
GB/T40223—2021
包被游离棉酚包被原的酶标板。A.I
样品提取液甲醇水（95+5）。
附录A
（资料性）
游离棉酚检测试剂盒
样本稀释液：含0.01%吐温-20的0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲溶液。游离棉酚的标准溶液：0μg/mL、2μg/mL、5μg/mL10μg/mL.50ug/mL和100μg/mL。辣根过氧化物酶标抗体
洗涤液浓缩液（10倍浓缩）：可用水稀释后使用。底物溶液。
反应终止液。
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