【国家标准(GB)】 河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS67.050
中华人民共和国国家标准
GB/T22951—2008
河豚鱼、鳗鱼中十八种
磺胺类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of 18 sulfonamides residues in fugu and eel-LC-MS-MSmethod
2008-12-31发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2009-05-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录前言
本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、石玉秋、姚智慧、庞国芳。GB/T22951—2008
1范围
河豚鱼、鳗鱼中十八种
磺胺类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
GB/T22951—2008
本标准规定了河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物（见表2）残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定。本标准的方法检出限均为5.0μg/kg。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义（GB/T6379.1—2004,ISO5725-1:1994IDT)GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2—2004，ISO5725-21994，IDT）GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO3696：1987，MOD）3原理
河豚鱼、鳗鱼中磺胺类药物残留用乙提取，离心，上清液经无水硫酸钠脱水后，用氮气浓缩仪吹至近干，残渣用乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液溶解，用正已烷脱脂，过0.2μm滤膜后，样品溶液供液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。4试剂和材料
4.1水：GB/T6682，一级。
4.2甲醇：色谱纯。
4.3乙睛：色谱纯。
4.4甲酸：色谱纯。
4.5正已烷：色谱纯。
4.6乙酸铵：优级纯。
4.7无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器中备用。4.80.01mol/L乙酸铵溶液：称取0.77g乙酸铵（4.6）溶于1000mL水中。4.9定容液：乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液（3+22）。量取12mL乙腈（4.3）和88mL乙酸铵溶液（4.8）混合均匀。
4.100.1%甲酸溶液：吸取1.0mL甲酸（4.4),用水稀释至1000mL。4.11十八种磺胺类药物标准物质：磺胺嘧啶（CAS：68-35-9）、磺胺噻唑（CAS：72-14-0）、磺胺吡啶（CAS：144-83-2）、磺胺甲基嘧啶（CAS：127-79-7）、磺胺-6-甲氧嘧啶（CAS：1220-83-3）、磺胺甲噻二唑（CAS：144-82-1）、磺胺二甲嘧啶（CAS:57-68-1）、磺胺甲氧哒嗪（CAS:80-35-3）、磺胺对甲氧嘧啶（CAS：1
GB/T22951—2008
651-06-9）、磺胺氯哒嗪（CAS：80-32-0）、磺胺甲基异唑（CAS：723-46-6）、磺胺邻二甲氧嘧啶（CAS：2447-57-6）、磺胺二甲异曬唑（CAS：127-69-5）、磺胺苯酰（CAS：127-71-9）、磺胺氯吡嗪（CAS：102-65-8）、磺胺苯吡唑（CAS：526-08-9）、磺胺间二甲氧嘧啶（CAS：1037-50-9）、磺胺唑嗯啉（CAS：59-40-5）。纯度≥99%
4.120.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的每种磺胺类药物标准物质（4.11）,用甲醇（4.2)分别配成0.1mg/mL的标准储备溶液，该溶液在4℃保存。4.135.0μg/mL磺胺类药物混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液（4.12)0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成5.0ug/mL混合标准工作溶液。该溶液在4℃保存。4.14磺胺内标物质：磺胺甲基异唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4。纯度≥99%。4.155.0ug/mL磺胺甲基异嗯唑-D4、磺胺嘧啶-D4、磺胺噻唑-D4内标标准储备溶液：称取适量磺胺甲基异啮唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4标准物质（4.14)，用甲醇分别配成0.1mg/mL。该溶液在4℃保存，
4.16磺胺类药物混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异嗯唑-D4，磺胺嘧啶-D4，磺胺噻唑-D4储备溶液（4.15)0.5mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为5ug/mL混合内标工作溶液。该溶液在4℃保存。
4.17基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液（4.12)和4μL混合内标工作溶液（4.16），用空白样品提取液配成5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL不同浓度的基质标准工作溶液。当天配制。4.18滤膜：0.2μm。
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5.2分析天平：感量0.1mg，0.01g。5.3离心管：50mL。
5.4均质器。
5.5液体混匀器。
5.6离心机。
5.7氮气浓缩仪。
5.8浓缩管：10mL。
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封，作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化，6.2试样保存
将试样于-18℃冷冻保存。
7测定步骤
7.1样品制备
称取10g试样，精确至0.01g。置于50mL离心管（5.3）中，加人20μL内标工作溶液（4.16），然后加人20g无水硫酸钠（4.7）和25mL乙腈（4.3），均质2min，以3000r/min离心3min。上清液转移至50mL容量瓶中，残渣再加入20mL乙睛，重复上述操作一次。合并提取液，用乙睛定容至刻度后，混匀。吸取10mL至浓缩管（5.8）中，在45℃水浴中氮气吹至近干。准确加人1mL定容液（4.9）2
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和1mL正已烷（4.5）溶解残渣，涡旋1min，以3000r/min离心3min，吸取上层正已烷弃去，再加人1mL正已烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体。取下层清液，过0.2μm滤膜（4.18）后，用液相色谱-串联质谱仪测定。
按上述操作步骤制备样品空白提取液。7.2测定条件
液相色谱参考条件
色谱柱：Atlantis，3μm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；流动相：A：乙腈，B：0.1%甲酸溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1；流速：0.2mL/min；
柱温：35℃：
进样量：20μL。
表1流动相梯度条件
时间/min
质谱参考条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
检测方式：多反应监测；
电喷雾电压：5500V；
雾化气压力：0.076MPa；
气帘气压力：0.069MPa；
辅助气流速：6L/min；
离子源温度：350℃；
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。C/%
十八种磺胺类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压表2
化合物中文名称
磺胺嘧啶
磺胺噻唑
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺-6-甲氧嘧啶
化合物英文名称
sulfadiazine
sulfathiazole
sulfapyridine
sulfamethoxypyridazine
sulfamonomethoxine
定性离子对
251/156
251/185
256/156
256/107
250/156
250/184
265/156
265/172
281/156
281/215
定量离子对
251/156
256/156
250/156
265/156
281/156
碰撞气能量/V
去簇电压/V
GB/T22951—2008
化合物中文名称
磺胺甲噻二唑
磺胺二甲嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺氮哒嗪
磺胺甲基异嗯唑
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异喽唑
磺胺苯酰
磺胺氯吡嗪
磺胺苯吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
磺胺喹呕啉
化合物英文名称
sulfamethizole
sulfamethazine
sulfamethoxypyridazine
sulfameter
sulfachloropyridazine
sulfamethoxazole
sulfadoxine
sulfisoxazole
sulfabenzamide
sulfachloropyrazine
sulfaphenazole
sulfadimethoxine
sulfaquinoxaline
7.3液相色谱-串联质谱测定
7.3.1定性测定
表2（续）
定性离子对
271/156
271/107
279/156
279/204
281/156
281/215
281/156
281/215
285/156
285/108
254/156
254/147
311/156
311/108
268/156
268/113
277/156
277/108
285/156
285/108
315/156
315/160
311/156
311/218
301/156
301/208
定量离子对
271/156
279/156
281/156
281/156
285/156
254/156
311/156
268/156
277/156
285/156
315/156
311/156
301/156
碰撞气能量/V
去簇电压/V
将各被测组分分别选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度K
允许最大偏差
7.3.2定量测定
2010以%表示
K≤10
用基质混合标准工作溶液（4.17)分别进样，以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作溶液浓度与内标溶液浓度的比值为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中十八种磺胺类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，十八种磺胺类药物的参考保留时间见表4。十八种磺胺类药物的标准多反应监测（MRM)色谱图参见附录A中的图A.1。
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本方法中十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B.1。表4十八种磺胺类药物参考保留时间化合物名称
磺胺嘧啶
磺胺噻唑
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺-6-甲氧嘧啶
磺胺甲噻二唑
磺胺二甲嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲氧啶
7.4平行试验
保留时间/min
按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。8结果计算
化合物名称
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异嘧唑
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异噁唑
磺胺苯酰
磺胺氯吡嗪
磺胺苯吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
磺胺喹嗯啉
河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定结果按式（1)计算：xax
式中：
Vy1000
×1000
试样中被测物残留量，单位为微克每千克（μg/kg）；Cs
基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；试样溶液中被测物的色谱峰面积；基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)；-基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；试样溶液中内标物的色谱峰面积；样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值。
9精密度
9.1一般规定
保留时间/min
·（1)
本标准的精密度数据是按照GB/T6379.1和GB/T6379.2的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95%的可信度来计算。
9.2重复性
在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物添加浓度范围及重复性方程见表5。5
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化合物名称
磺胺嘧啶
磺胺噻唑
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺-6-甲氧嘧啶
磺胺甲噻二唑
磺胺二甲嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺氯哒嗪
磺胺甲基异啮唑
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异嗯唑
磺胺苯酰
磺胺氯吡嗪
磺胺苯吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
磺胺喹嗯啉
表5添加浓度范围及重复性和再限性方程添加浓度范围
注：m为两次测定值的平均值。
重复性限
lgr=0.9134lgm-1.2486
lgr=0.4987lgm-0.7916
lg r=1. 080 1 lg m-1. 464 1
Ig r=0. 733 7 lg m-1. 178 6
Igr=0. 8785 lgm-0. 998 6
lgr=1.0598lgm-1.3411
Igr=0.8247lgm-1.1906
lgr=1.2441lgm-1.7816
Igr=0.8356lgm-1.151 1
lgr=0.4952lgm-0.7540
Igr=0.8986lgm-0.8891
lgr=0.8167lgm1.2076
lg r=1.0607lgm-1.3448
Ig r=0. 738 9 lg m-1. 055 1
Ig r=0. 981 1 lg m-1.136 1
lgr=0.9412lgm1.1662
lgr=0.7920lgm-0.9668
Igr=1.0760lgm-1.4935
单位为微克每千克
再现性限R
Ig R=0.757 6 lg m-0.664 7
IgR=0.7604lgm-0.5415
IgR=1.0237lgm-0.9181
lgR=0.7223lgm-0.3664
IgR=0.6006lgm-0.377g
lgR=0.8516lgm0.5966
IgR-1.0778lgm-1.1102
lg R=0. 7558 lg m-0. 521 5
lgR=0.9473lgm-1.0112
lgR=0.6980lgm-0.5740
IgR=0. 9931 lgm-0.902 2
lg R=0.8500 lgm-0.7679
Ig R=1. 0283lgm-1. 039 5
lgR=0.7702lgm-0.6410
lgR=1.0456lgm-0.9163下载标准就来标准下载网
IgR=0.6812lgm-0.5496
IgR=1.1192lgm-1.2056
IgR=0.8271lgm-0.8028
如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。3再现性
在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物的添加浓度范围及再现性方程见表5。6
附录A
（资料性附录）
标准物质多反应监测（MRM)色谱图十八种磺胺类药物标准物质多反应监测（MRM)色谱图见图A.1。4.45
响1.804 1
值1-4e4
磺胺嘧啶
14t/min
磺胺甲基嘧啶
101214/min
磺胺二甲嘧啶
磺胶氯哒嗪
磺胺二甲异嗯唑
14t/min
电：.504
1, 5e4:
i4t/min
124min
磺胺苯吡唑
响 1.6e5
1214/min
磺胺噻唑
14t/min
GB/T22951--2008
磺胺吡啶
磺胺甲壁二唑
磺胺-6-甲氧嘧啶
101214t/min
磺胺甲氧哒嗪
磺胺甲基异瞻唑
14U/min
磺胺苯酰
磺胺对甲氧嘧啶
1214t/min
101214t/min
1214/min
3.04磺胺邻二甲氧嘧啶
1214t/min
磺胺氯吡嗪
1214t/min
磺胺间二甲氧嘧啶
1214t/min
磺胺喹喂啉
十八种磺胺类药物标准物质多反应监测（MRM）色谱图1214t/min
1214t/min
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附录B
（资料性附录）
回收率
本方法中十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1.表B.1十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称
磺胺嘧啶
磺胺噻唑
磺胺吡啶
磺胺甲基嘧啶
磺胺-6-甲氧嘧啶
磺胺甲噻二唑
磺胺二甲嘧啶
磺胺甲氧哒嗪
磺胺对甲氧嘧啶
磺胺氯哒嗪
添加浓度/（μg/kg）
平均回收率/%
化合物名称
磺胺甲基异嗯唑
磺胺邻二甲氧嘧啶
磺胺二甲异嗯唑
磺胺苯酰
磺胺氯吡嗪
磺胺苯吡唑
磺胺间二甲氧嘧啶
磺胺喹嗯啉
表B.1（续）
添加浓度/(μg/kg）
GB/T22951—2008
平均回收率/%
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