【地方标准】 羊传染性脓疱病毒检测 荧光PCR探针法

ICS 11.220 B41 DB22 吉林省地方标准 DB22/T 3089—2019 羊传染性疱疹病毒检测 荧光PCR探针法 TaqMan probe-based real-time PCR assay for detection of orf virus 2019-12-25发布 吉林省市场监督管理厅 发布 2020-02-01实施 前言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。 本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。 本标准主要起草人：邵洪泽、王楠、王龙涛、王开、程荣华、柴方红、于钦磊、董航、葛永明、呼延含蓉、任锐、王欣宇。 1 范围 本标准规定了羊传染性疱疹病毒（ORFV）ORF059基因的荧光PCR检测方法的技术要求。 本标准适用于羊传染性疱疹病毒基因的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 27401 实验室质量控制规范 动物检疫 NY/T 3235 羊传染性脓疱诊断技术 3 缩略语 ORFV：羊传染性疱疹病毒（Orf virus） ORF：开放阅读框（Open Reading Frame） DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid） Ct：循环阈值（Cycle threshold） 4 原理 根据羊传染性疱疹病毒ORFV ORF059基因序列设计引物和探针。探针5'端标记FAM荧光基团作为报告基团，3'端标记TAMRA作为淬灭基团。反应退火阶段，引物与探针同时结合目标基因片段，荧光信号被淬灭基团吸收而无法检测；在延伸阶段，Taq酶发挥5'→3'外切核酸酶活性，将探针降解，使荧光基团游离并发出荧光信号。随着PCR循环进行，产物呈指数增长，荧光信号同步增强。 5 试验条件 5.1 生物安全要求：所有培养物及废弃物的处置应符合GB 19489规定。 5.2 防污染措施：应符合GB/T 27401相关规定。