【国家标准(GB)】 饲料中志贺氏菌的检测方法

Cs E5,120
中华人民共和国国家标准
GB/18381.2--2005
饲料中志贺氏菌的检测方法
Delermlnatlon of Shigelia in feed2005-09-05发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标雅化管理委员会
2006-02-01实施
标垒用采用GB/T79品生然生物学检验本标准的附录A.刷录上为范注附求。本标准由全回饲料工业标准化投术委员会担白木标准用全国饰料1业标准化技木委员会儿术标推起草单位：国家证料基必鲁检验中心北京本标准丰要积单人谈栏华，李丧、协洋明，苏晓购。GB/8381.2—2005
志贺民的检驱有关内容
1范围
饲料中志贺氏菌的检观方法
本标准熟定了弱料中志贺氏菌的检测法。本标准适用于记料中志民法的投划，2规性引用文性
GH/T$381.2—2005
下列文位书条款两过木帜确的引成为六标推的条教：凡是续期的引月文件.其随后所有的修改单（不包括助装的内容>或像版均不近」卡标谁，然而.苹提据木标带达成协没的各力研究品可使市这些文作的最新做中，凡是不注寸期药引用文件，其最新版本适用于区标准.H/14539.]有料来
3设备动材料
3.1患1g最称1000。
与质器成明沐.
恒源培芥箱。
显激境。
火的广口300
灭菌第烧瓶50，2
灭商平：底径m，
裁玻与，
酒荷。
属璃垫。
接种摔，橡铬丝。
3.12试管要，
3.13销2维求送膜：150)mm×5）nm.fu.45Jrm，临用时切或两账，每张70义50mm.用帮笔划草，每格6am×6rm，每行70格，分6行。点菌务用，4培苏基和试剂
除非另有说明，生分析中仅使开确认为分析纯的试剂和蒸幅水（去离子水，或扫当纯度的求）：4.1N增保液：阳来B.1育。
4.2HE琼脂，见附录B的B.2章
4.3脂见附录的音
4. 4 支康凯琼脂:地,时示 B的 13. . 年。4. 5 们红关监境脂(1M3) ,见闭录H的 B. 5 。4,6二辅铁琼脂ITSI;比陷录 B的 B.(草4.7籍半盾体世，见闲录的F,7。4.8固体，见附录K的.8，
4.9葡转按琼脂，见附录B的B,“单4.10辰款前H，)：见险限的B10音GB/T 8381,2—2005
4. 11 四蒙氏忙业慢益琼脂:陆录B的 B, 11 查,4,12期化钟（KCV)培养基：州除录H的K12森4. 13
氧些赖脱效醇试验始养基，题源酸，鸟氢酸及对照培养准见附录B的B13章。4.14榨发腰营偏了糖、态等、i:油、七叶牛及水，压附录T的.1单，55%乳销发鲜省：别录上的B1车
4.16步水、龄基质试剂：见对总B的._5章.4.17志费首问检断血消。
5试样的制备
行微业物检资的伺判药农样和试详制备整二4冷，1规定效行，整齐样品京实，兵有化表性，在运輪和此存斗理十没有发生损关或改变。5.1深准避在士菌操作下进行：
5.2采样工只，如探子，产了，，采样器，试些广口放，剪子等，必须示火菌的，5.3根据样品种类如签、瓶私诺浆若，就取完登药未开封的，如果样品很大，则常用光菌采梯器取样：样品固本粉末，应达取边限证，无流体的，通过振指混勾品送到微生物检验室越快越好，一最应不超过3h。如果谁最迹，可将试学1~-5心保存如球毒.6漁作步（附录A
6.1增荫
取饲料试料25g人装有22>mICN倍养菌滚（H,1)的500mLL瓶（3.5内：十36℃谱并61--1：培并时间现细莲生长情况示定,当培养限出现轻微混泌讨即应终止培关。6.2分和初步生化试验
5.2.取消液1坏，新线接种+晾滑（B2半板离55瑞脂B.3板1取1开线接租于支康凯折B.4)平极或快红关墩脂B.5)平板：个，」35℃培养1%h--24h，忘微E菌在这当择齐基下品现无色透脉不发群礼的菌穿5.2.2桃收半板上的叫辣南落，接种游缺琼脂（T3.6>和需需摘半司体R7)各1留。一股应多排几个座路，以品谢漏绝\养1%-24h，分别州察结果，方2.3出现小述现象的增差物司以规为阴性：a）在一铁琼脂斜面上呈曼延生长的培苏物在18h--24h内降乳辅、渠概的培养物：b;
不分解菌齿和尺生士半反体表而的活养物！山产气的酒弃钢！
有动力的培非物；
）★准梳化氧的培养物
G.2.4凡是乳赫，声独不发睡，需靠请产酸不产气（福氏志贺民菌多型可产本少量气体），无动小的尚，可做诺学分一求的生化试验。6.3血清学分型和进一步的生化试验6. 3.1血清学分型
挑收缺铁均量上的培养物：敏板片凝案式验。先用4志贺氏菌多价血试4.17)检吉，如果出于长抗成的学行而不则集，成海妞液佛历检：就采品现凝英，见用A1A，群客价和群过分试收，系1辞逼氏志款民则祥型比子以清分别：福天惠望随各型和亚型型和群抗原见表。可无用群风子血性检合，再根爆群区了血冲出现共的续果，依次选用单因子血清检变。
GB/T 8381.2--2005
1邮志肾氏的多价十件不解集的为株，可出鲍氏多价1、2，3分别检径，并选一步用1--15各型因于血清。如果随氏多价血清不凝果，可用疾志费出3-12型多价血清及各型因于血消检查。表1
氏志翼氏菌音型和泌型的型抗原和群抗原型
X变体
Y空体
型抗紫
st-—统巢：
.,2,1,5.9.....
1.2.5.5,4..
J.........
1.6.7.9.9.
1.3.4.6..
: ..t,-...
1.5,7.5....
.7.8.9...
不避事，有或无。
6.3,2进一步的生化试验
在群因于血牌中的疑票
亡嵌血清学分型的可时，晟微遇决的生化或验，即：葡落糖数（9），西舜柠做散盐（.1!！系酸和马氢酸脱酵（H,15),H7.2录案（B.1U)KCN4长（B.12).以及水粉节和-叶的分解（H，14），除宋内民菌和单民3型为鸟高酸阳性外，志费店菌展的培举物均为明性结果，必要叫送应做节兰氏色按吉和氧化牌试验，虚为轧化酶队能的革兰氏托菌，生化应不符合的菌殊，即使能与荣种志就[葡分型血消发生凝策，仍不得判定为志比断的培养物，已判定为心贺氏菌的销齐钩，成世一步做外乳糖发醇（1b）女醛、棉了轴和拍的发的1.14)和旋某质式份（B.16)，志贺菊减1个生化群的培养物，应符合该群的生化持性，但提长6型的生化特性与A群或L群相似，见表2.瘦2志贺氏离随四个剿的生化特性牛站
人群，族恶翼氏曲
1，福志设金
心胖,范氏点缺无当
D群来内氏无的
六：+阳性，一明件：一7+*效回性：-1起强阳性有小同生化型，6.4结果报告
综合生化和而治学的试险结昊定商型并作也授：世迪
能豆质
GI/T83E1.2—2005
附录A
（规范性附录）
检验理序围
25g1GN225m
UII18~24H
年7前
TA，车体
T3[应具产成。外而产联、[[一)A严气。,A,动力1化分奖
群及公见统界
恢计统，西量氏柠请单生，放
组感、K敏、KC，水病并和4:11 #州请核以作有共阳结果
北志曲
南 A.1检验程序用
计年芒压的各神反应结果
D.1GN端菌液
B. 1. 1成分
葡树楼
甘菇醇
炸蒙酸钠
去氧阻酸
磷酸二氢钾
策化钠
蒸瘤水
D. 1. 2制法
（规范性对录）
培养式剂制备
GH/T 8361.2—2005
按上述分配好，加热使报解，校正p11，分装每瓶225mL，115高压火南15mi-B.2HR琼脂HekluFntericAgar?
B. 2. 1 成分
小肉膏
水粉隶
氯化的
游谱水
3.院索活蓝落液
Andrade格衣制：将酸性复红0.5g落于00ml，蒸罐水加人氧氧化纳陷液（a)=：mol/116ml，数时克红色不全，再加氢辈化钠液1~ml
甲液，硫代流钠84，竹微酸洗4培了100m1.恭图水中乙激，去氢胆隧钠10R陷[1CoL蒸锥水中pH?.
18~20#
1000 L
R.2.2制法
将前面上种成分落解于401.英留水内性为蒸酬度：将瑞背加人于60ml.蒸临水内，加热箱。加：人下液印乙波于硅础液内，液止。们人指示剂，并与统脂减合诈待冷垒C，须注平娠。位：此培排不叫高准甚、
GH/T8381.2--2005
B3. 3. 1基础培养基
芒肉膏
三号活盘
热馆火
将牛肉音际陈行站溶新于0)ml.蒸询水中，将琼脂加人于600r.T.游讷水中，壳使具熔解，小游两滤混合，12两压灭尊5min，保存备用，H.3.完全培养基
专仙养所
烷烯酸销
硫代配酸射
10%检费塑铁溶液
中性红穿液
0.1火弹绿落带
加热窃化基础培养基：按比例加入上述架料以外之各成分.充分混合均勾、较正7.0、加人中性红和煜绿液，汁平板。
注！：制的培推基宜当川使效弃一冰新内4内使川。注2:格绿演配好后应准1口内征:[1B.4走质配琼脂
B, 4. 1 成分
垂山豚
错胆战(感牛、羊旭蓝)
氢化钠
蒸昭水
3.01%结晶苯.水效
3.3头一性红水落额
B.4.2剃法
JuuomLbzxZ.net
1.4.2.1将蛋自陈、际盐和氢化销溶解于4mL热情水中，收:2，%.将凉人630mL菜体水户，如热解，物两液台许，分装十烧租内，121离压火菌15a备用：B.4.2.2临用时加热熔化拉脂，整热加人乳械.冷至50℃-55%时.加人品紧和中性名求熔液，播分后谢注半板。
注：结品战及性效求溶液配处后须等高正灭素，5
B.5伊红美蓝琼脂(EM)
B. 5. 1成分
蛋白豚
磷效“锂
伊红Y锥被
0美声落液
荔馅水
R.5.2制法
GB/T 8381.2—2005
将近味、快酸盐和琼当落解于然面永户，校止H，分于烧瓶内：12_“离压灭由15min爸.写用时州人乳婚州热穿化琼脂，冷至心~多时，加人伊红和大蓝密皱，描勺，顿江平版，D.6三爆铁琼脂:TSI
.6.1成分
4为奇
氯化带
征改业读按(NH,:Feso·6Hl(.2g硫少疏酸钠
携幅求
B.9.2制法
将除琼非拓扮灯饮外的年瑞分溶解二蒸馏水牛·饺正1。加人瑞脂·旧热滋梯，以解化琼脂。人U.2照红水落浓.5L，提5。分张试做装堂多此：以每供到教尚的层，之产压灭的15ain：改置商房i各月，
B.7葡萄糖半固体管
D. 7. 1成分
蛋白照
中国备
氯化谢
1.6资醉带酒片游商
甜萄树
1cc. rit.
GB/T $381.2—2C05
B.7.2制法
将蛋白脑，牛肉膏和氧化销加入十木中，校后加人源热熔能，正加人指六剂即菌萄带处装12c灭堂15mi
B.半固林曾
D.8. 1成分
张心陈
中肉商
氨化纳
谦编承
R, 8.2制法
0. 33--0. 4 R
按以上成配好煮佛使等解，并控山：H，分馨试誉，12压灭齿》mir。自文凝司备用注：供动力观款、国冲保，日抗原位州变导试验等月。B.9普葡糖链培养基
B.9.1成分
教亿纳
毓酸镁（Mg5(，·711,(
磷酸二氢毯
酸然一钟
确砖蜡
燕润水
心兰长速豪重克酚监路滤
B, 9,2制法
光将盘类和萨穿十水内，收：H，再加航配.加热落化，龄后加人指示剂，准合均匀后分装试管：121高庆火菌min，敢戚斜面
B,9.3试避方法
用接种针经轻魅及培举物的炭而.在缺水管内做成摄稀的卷液·内眼现察不激混·以·接种坏内含苗数生20~133心间为宜。将接和环火菌片排收菌液接种，同时再以向法接种普通料道·支作为刘，十e一荒21h，叫性者他靠能抽依斜面.1.有止常大小的菌落生长；阴性肾不生长.仁车对照培养售.生长良好，如存制菊糖锻斜面生长极做小的菌游可视为阴在给果，：弃器使月前店用消当慢饱，丹用求蒸整水冲垫1净产川新棉微皮报西：十热卤出使，果禁注意，方杂质污染对：思流成限阳性的结见，B.10尿琼脂(pr.2)
B. 13. 1 成分
张广施
煮化药
经胜抗
森酸二钾
9.4%盼红落满
蒸锥水
20片果素整变
pH7.30, 1
B. 10.2制法
CI/T 8381.2—2C05
将除录效和琼非以外的成分配好，并较正pII，加人前胎，加盐落化并分表党瓶。11Y高后灭卤15mi：冷至5℃5加人险送过然的最液，床为编使度为2%最终成为7.2=0.1分装」灭再试誉内,效成料面备用：B.1C.3试验方法
挑取惊脂培养物接种，在5e：，化培养24h，察结果，球素醛比性者由小产减使培养变为红包。
B.11西蒙氏柠酸盐培养基
B. 1:.1成分
氯化钩
硫酸铁:Mg50+7I.0)
微一氯馈
扫檬酸钠
蒸馅水
几,2%读察活草酚监济液
K,11. 2制送
as triL
先将盐类溶解于水内，快止PII，再加惊脂，如热奇化，感后人指示剂、混仓划勾后办装过管，121：商正灭盘15m效成新面。
B.11.3试验方法
非取少量统汽培弃物接冲，十36℃+1：培养4d，每天说密结思。召性背款-面上有首蒂生长.塔养基从绿色龄为监色，
B,12高化钾!KCN>培养基
R.12.1成分
篮！陈
奥化舒
此酸二盆纯
瞬酸效射
燕锅水
0.5真化钾落商
B.12.2制法
1 rn? ml.
将除等化钾以外的或分配好后装烧积，：21r离压灭菌1mir。款冰箱内使具充分冷却，位GH/T8$$1,22005
m基加3.做化钾液2.地后添为1：100分装12m10m试收单药41文刻用火闲榜皮塞举聚，敬在4冰箱内车心可保存两个，同时，将不加北钟的培养作为对照培养基，分表试管备用。R.12.3试验方法
将脂培弃物控种十實户豚东内家为蒂轩南滴，排收1环接仲十化钾K）塔获基，贝燕取坏接种对照地养立33二培养~，现结果：如细首生长迎为羽性不制，经细南不生长为阴冲制）
普告：氧化钾是刷毒药物使用时应小心切勿站染、以免中毒，奥天分培养基应在冰箱内进行.试验失败的主要原因是封口不严，氰化辨透渐分解，产生组氧酸气体出，以致药蜘浓典降低.细茜生长·因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别连意，E.13氢基酸脱频致试验培养基
B.13.1成分
爱白样
瑞世没育
蒸萄水
1.心%误两-2要落液
L年基或1>.安某喀
R.13.2制法
除氮基以外的成分加热深解后，分装每瓶10二别证人种基陵：核安降势酸利鸟按m或单人可校至.照客
不加氮酸。分表于灭苗的小式管内，每普“\.5L，工面滴加一层液本右票，115%高卡案1\m1\，H.13.3试验方法
其琼脂料也上挑收养物种，十3+1培养1-，给果或芯酸放的性者出1产做，名养应求色，阅性名无城性产划，内施尚产酸而使养变为贡免，对照管应为黄色。
L. 14糖发酵管
1. 14. 1成分
牛肉荷
蛋户陈
氯化锅
磁酸氛钢a,P,1
C.2滨察香草份然济效
蒸的水
3.14.2制法
-000 m:
B.14.21前询发降答或1述家分坐后按人制械，分装十：个小的小试内12压15
R.14.2.2其他齐种树发酵管按速成分配后，分装代瓶10.12C商压次函1mm.5将各种糖炎分别配好游高灭茜：将5m糖游液加人于养基以菌操分13
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