【国家标准(GB)】 中华绒螯蟹

ICS67.120.30
中华人民共和国国家标准
GB/T19783—2005
中华绒螯蟹
Chinesemitten-handed crab
2005-06-02发布
驱码路伪
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
http：//foodmate.net2005-10-01实施
本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位：上海水产大学。本标准主要起草人：李思发、赵金良、邹曙明、蔡完其、王成辉http：//foodmate.netGB/T19783—2005
1范围
中华绒螯蟹
CB/T197832005
本标准规定了中华绒警蟹的主要外部形态特征，生长与繁殖、遗传学特性以及检测方法。本标准适用于中华绒整蟹的种质检测与鉴定。2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本沉是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB17716—1999青鱼
GB/T18654.12
术语和定义
奖种质检验
养殖鱼
下列术语和定义适用
手本标准
头胸甲长carapacelength
第12部分：染色体组型分析
头胸甲背面前缘内额齿间的凹窝至头胸甲后缘端部的长度G
额宽frontalwidth
头胸甲前缘左，右外额齿间的宽度。3.3
体高bodyheighr
头胸甲背面至腹部腹面的垂直距高第一侧齿宽firstobital marginwidth头胸甲前侧缘左、右第一侧齿间的宽度。背甲后半长postcarapace length头胸甲背面颈沟至头胸甲后缘端部筋长度第3步足长节长meropodit length of thethird peraeopod第3步足长节的长度。
第3步足前节长propoditlengthof thethirdperaeopod第3步足前节的长度。
第4步足指节长dactylopoditlengthofthefourthperaeopod第4步足指节的长度。
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4名称和分类
4.1学名
中华绒整蟹（Eriocheir sinensisH.Milne-Edwards)。4.2分类位置
甲壳纳（Crustacea），十足目（Decapoda），爬行亚目（Raptantia），方蟹科（Grapsidae），绒鳌蟹属（Eriocheir)。
5主要外部形态特征
5.1外形特征
头胸甲明显隆起。额缘有4个尖齿，齿间缺刻较深，居中一个特别深，呈“V”或“U”形。第四侧齿明显。螯足钳掌与钳趾基部内外均有绒毛。第4对步足前节狭长，趾节呈尖爪状。雎蟹腹脐圆形，雄蟹腹脐为三角形。
背面黄褐色或青褐色，腹部灰白或银白色。整足绒毛棕褐色，步足刚毛呈金黄色中华绒整蟹的外部形态见图1和图2。雌性
）雌性
图1中华绒警蟹外形（背面）
图2中华绒整蟹外形（腹面）
b)雄性
b）雄性
http：//foodmate.net5.2可量性状
中华绒整蟹成婚的主要形态性状比值见表表1中华绒鳌蟹主要形态性状比值项
额宽/头胸甲长
第一侧齿宽/头胸甲长
背甲后半长/头胸甲长
体高/头胸甲长
第3步足长节长/头胸甲长
第3步足前节长/头胸甲长
第4步足指节长/头胸甲长
6生长与繁殖
6.1生长
中华绒整蟹体长与体重关系式参见附录A6.2繁殖
6.2.1中华绒整蟹生殖洞游一般在9月份~10月份6.2.2
性成熟雕蟹可进行一次交配，多次产卵6.2.3不同体重中华绒螯蟹的抱卵量见表2表2中华绒警蟹抱卵量
体重/g
100150
150~200
7遗传学特性
7.1细胞遗传学特性
体细胞染色体数2n=146。
7.2生化遗传学特性
平均值主标准差
0.239±0.010
0.624±0.017
0.531±0.011
0.522±0.012
0.761±0.045
0.509±0.028
0.437±0.025
抱卵量/粒
350000
CB/T19783-2005
300000~550000
500000~750000
700000
7.2.1中华绒警蟹肌肉中乳酸脱氢酶（LDH)的电泳图谱见图3.表现为1条谱带十
图3中华绒整蟹肌肉中LDH同工酶电泳酶谱7.2.2根据对各水系中华绒螯蟹8种同工酶17个座位的测定，中华绒警蟹群体的多态座位比例为31.25%，平均杂合度为0.0999~0.1041。7.3分子遗传学特性
中华绒整蟹随机引物OPP17（TGACCCGCCT）的扩增产物电泳图谱见图4。扩增的947bp片段为中华绒整蟹所特有，但在其不同地理群体中表现有不同的出现频率参见附录B。3
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分子量标记a/ER
8检测方法
HindI)
中华绒整蟹随机引物Opp17的扩增产物电泳图谱8.1
繁殖力测定
在繁殖季节，将附准抱卵雌蟹腹部刚毛上的受精卵全部刮下，称量。用电子天平称1.0g卵，3个样品，在解副镜下分别计数，计算平均每克卵的平均卵粒数和抱卵量。8.2染色体测定
按GB/T18654
8.3同工酶测定
的规定执行。Www.bzxZ.net
-1999第6章的规定执行，
按GB17716—
8.4随机扩增多态DNAORAPD）测定8.4.1样品的采集与保春
取0.1g～0.3各肌肉脏脏、血液或蹈鳍的新鲜样品，于液氨、干冰及95%乙醇保存。
8.4.2基因组DNA的提取
30℃以不低温保存，或于
放1.5ml离心管内，加人400LSTE缓冲液配制方法为：取0.1g~0.3g样品，剪碎
30mmol/LTris-HCI(pH8.0)，200mmol//EDTA，50mmol/LAaCI。再加入终浓度分别为1%的SDS和100μg/mL~300μg/mL的蛋白酶K，混勺后于56℃作用过夜（纳12h)。混合液中加人等体积饱和，使样品与酚充分混匀，100001min离心8min，吸取上清液：加人等体积的粉-氟仿异戊醇混合液，混合比例为24：24：混勾后吸取上清液，加人等体积的氯仿，混勾后吸取上清液：加人等体积的异丙醇或2倍体积的无水乙醇，产生絮状DNA沉淀。静置5min，小心倒出异丙醇或乙醇，获得DNA沉淀，并用70%的乙醇洗涤，干燥，加人500μL的无菌重蒸水，再加人25mg/mL的RNAA溶液（无DNA酶活性）2ML，于37C温育1h后，置于4℃冰箱保存备用。8.4.3基因组DNA的PCR扩增
在0.5mL薄壁管中加人总体积为25LPCR反应混合液：2.0μL~3.0μLPCR扩增缓冲液[配制方法为：100mmol/LTris-HCl(pH9.0),500mmol/LKCl,30.0mmol/LMgCl..0.001%明胶],1μL2.5mmol/LdNTP混合液1xL~2μL5μmol/L引物，约25ng~150ng基因组DNA0.6U~2UTag酶。于PCR扩增仪上反应，循环程序为：第一个程序为93℃94℃变性5min第二个程序为4
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93℃~94℃45s，36℃45s，72℃90s第二个程序进行40个~45个循环后，72℃延伸5min~10min扩增反应结束后·直接电泳或4℃暂时保存至电泳分析。8.4.4PCR扩增产物的电泳分离与观察于1.5%琼脂糖凝胶上进行电脉.取10HLPCR扩增产物，用移液器将样品加人样品孔中。DNA分子量标记同时点在旁边的孔中。在1V/cm～10V/cm凝胶的电压下进行电冰。当溴酚蓝指示剂迁移至足够分高DNA片段的距离时，停止电泳。用0.5μg/mL的溴化乙锭染色10min~30min后在紫外透射系统上观察，照相（已加人终浓度为0.5g/mL漠化乙锭染色液的凝胶可以直接在紫外透射仪上观察、照相）
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附录A
（资料性附录）
中华绒整蟹体长与体重关系式
雌性，雄性中华绒整蟹的体长与体重关系式分别以式（A.1)和式（A.2）表示。W-6.0078X10-L29724
W=1.3990x10-L.75so
式中：
W—体重，单位为克（g）：
头胸甲长，单位为厘米（cm）。附录B
（资料性附录）
特异性分子标记在中华绒整蟹不同地理群体中的出现频率...A.1）
随机引物Opp17扩增的947bp片段在中华绒鳌蟹不同地理群体中的出现频率分别为：长江水系群体为87.50%瓯江水系群体为78.26%、黄河水系群体为41.66%、辽河水系群体为10.83%（见图B.1)
图B.1随机引物Opp17扩增的947bp片段在中华绒整蟹不同地理群体中的出现频率6
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