【地方标准】 转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种定量检测 实时荧光PCR方法

本标准《转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种定量检测实时荧光PCR方法》（DB12/T651-2016）规定了转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2转化体特异性定量PCR检测方法的术语和定义、检测方法、结果计算等内容。 本标准适用于转基因耐除草剂大豆GTS40-3-2及其衍生品种，以及制品中GTS40-3-2转化体的定量PCR检测。 本标准由天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津市质量技术监督宝检测中心等单位起草，起草人包括兰青阔、宛煜嵩、杨炳存、赵新、李亮、陈锐等。 规范性引用文件包括GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》和NY/T672《转基因植物及其产品检测通用要求》等。 3.1 Lectin基因：编码大豆凝集素的基因。 3.2 GTS40-3-2转化体特异性序列：GTS40-3-2外源插入片段5端与大豆基因组的连接区序列，包括35S启动子部分序列和大豆基因组的部分序列。 检测原理是根据大豆外源基因和内标基因特异性序列设计引物和TaqMan荧光探针，通过实时荧光PCR扩增标准样品和试样，依据标准样品模板拷贝数与Ct值的线性关系，绘制外源基因和内标基因的标准曲线，最终计算试样中外源基因和内标基因的拷贝数及其比值。 检测方法包括试剂和材料、仪器、分析步骤等。试剂要求使用分析纯试剂和重蒸留水或符合GB/T6682规定的一级水。仪器包括分析天平、荧光定量PCR扩增仪、核酸定量仪、重蒸馏水发生器等。分析步骤包括抽样、试样准备、试样预处理、DNA模板制备、标准曲线样品制备等。标准溶液的制备采用梯度稀释方法，确保涵盖多个浓度范围。