【地方标准】 猪瘟病毒抗体快速检测方法 镧系荧光免疫层析法

ICS 01.120
A00
DB34
安徽省地方标准
DB34/T 3489—2019
猪瘟病毒抗体快速检测方法
镧系荧光免疫层析法
The Rapid Detection Methods for Antibodies to Classical Swine Fever Virus Lanthanide Fluorescence Immunochromatographic Assay

2019-12-25 发布
2020-01-25 实施
安徽省市场监督管理局 发布

前言

本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。
本标准由安徽农业大学提出并起草。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽冠华农牧有限公司、安徽禾丰浩翔农业发展有限公司、安徽省动物疫病预防与控制中心、阜阳市动物卫生监督所、怀宁县动物疫病预防与控制中心、巢湖市畜牧兽医局、六安市动物疫病预防与控制中心、成都微瑞生物科技有限公司。
本标准主要起草人：李郁、何长生、占松鹤、谢玉洁、程竹兵、李春芬、程圣芳、高亚飞、段倩倩、孙装、袁献宇、高亚成、蒋广志、张和森。

1 范围

本标准规定了猪瘟病毒抗体快速检测方法——镧系荧光免疫层析法的原理、仪器和试剂、样品采集与处理、操作方法、结果计算、生物安全和防污染措施。
本标准适用于猪瘟病毒抗体的快速检测。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
GB/T 27401 实验室质量控制规范 动物检疫
NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3 原理

镧系荧光免疫层析法（lanthanide fluorescence immunochromatographic assay，LFIA）快速检测猪瘟病毒抗体，系采用镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球作荧光示踪物，分别标记猪瘟病毒重组 E2 蛋白抗原和鸡 IgY，并埋置在标记垫内。硝酸纤维素膜上检测线（T）包被猪瘟病毒重组 E2 蛋白抗原、参考线（C）包被山羊抗鸡 IgY 抗体。当血清样品抗体与镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球标记的猪瘟病毒重组 E2 蛋白抗原单独反应后形成免疫复合物，继续与硝酸纤维素膜上检测线（T 线）包被的猪瘟病毒重组 E2 蛋白抗原反应形成复合物；其余物质向前层析，在 C 线处包被的山羊抗鸡 IgY 抗体与镧系元素铕（Eu3+）荧光纳米微球标记的鸡 IgY 结合形成免疫结合物。最后用镧系荧光分析仪读取检测卡上的荧光信号，经计算即可得出猪瘟病毒抗体效价。

4 仪器与试剂

4.1 仪器

4.1.1 镧系荧光分析仪
4.1.2 单道可调微量移液器：0.5 μL~10 μL，20 μL~200 μL，100 μL~1000 μL
4.1.3 分析天平：精度 0.001 g
4.1.4 离心机：转速 5000~15000 r/min
4.1.5 冰箱：2 ℃~8 ℃，-20 ℃

4.2 试剂

4.2.1 实验用水：应符合 GB/T 6682 中一级水的规格。