【地方标准】 鸭巴泰病毒 RT-PCR 检测方法

DB35/T1958—2021《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》由福建省市场监督管理局发布并实施。本标准由福建省农业科学院提出，由福建省农业农村厅归口，起草单位包括福建省农业科学院畜牧兽医研究所、福州海关技术中心、福建省动物疫病预防控制中心及宁德海关检验检疫技术中心。主要起草人：傅秋玲、傅光华、郑腾、李中华、叶洪、黄瑜、万春和、程龙飞、施少华、张体银、刘荣昌、陈翠腾、彭春香、陈红梅、陈珍、朱春华。 1 范围 本标准规定了鸭巴泰病毒核酸诊断的反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测方法，适用于鸭巴泰病毒感染的流行病学监测和诊断。 2 规范性引用文件 GB/T6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法；GB19489—2008 实验室生物安全通用要求。 3 术语和定义 3.1 鸭巴泰病毒（Batai virus; BATV）：属于布尼亚病毒科正布尼亚病毒属的有囊膜病毒，基因组为单股负链分节段RNA，大小约12kb，含S、M、L三个片段，分别编码核衣壳蛋白、囊膜蛋白和聚合酶蛋白。 3.2 鸭巴泰病毒病（Batai virus disease）：我国养禽业中流行，主要影响种番鸭、麻鸭，表现为产蛋下降、卵巢出血、脾脏轻度出血，易与离坦布病毒病混淆，也危害肉鸭，表现为生长不良。 4 设备、材料和试剂 4.1 设备：PCR扩增仪、微量可调移液器（100~1000µL、20~200µL、2~20µL、0.5~10µL）、冰箱（2~8℃及-20℃）、高速冷冻离心机（转速>12000r/min）、组织匀浆器、手术剪、手术镊、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、旋涡振荡器、超净工作台。 4.2 材料和试剂：试验用水符合GB/T6682—2008一级水标准；磷酸盐缓冲液（PBS）、DEPC水、Trizol、三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇、75%乙醇、溴化乙锭溶液、1X TAE缓冲液、1.0%琼脂糖凝胶、DNA分子量标准DL2000、10X加样缓冲液、RT-PCR检测用引物及对照样品（阳性对照：鸭巴泰病毒RNA；阴性对照：其他禽源RNA病毒RNA；空白对照：灭菌去离子水）。 5 样品采集、前处理和保存 5.1 样品采集和运输：采样器具（手术剪、手术镊、容器等）需预先灭菌，采样操作中戴一次性手套和口罩以防样品交叉污染。